常規的(de)DNA純(chun)化(hua)方(fang)式並不(bu)能(neng)有(you)效地去(qu)除糞(fen)便(bian)中存(cun)在(zai)的(de)大(da)量(liang)抑制(zhi)因子(zi)而導致(zhi)下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)的(de)失(shi)敗，如PCR不(bu)能(neng)擴(kuo)增出所(suo)需(xu)片(pian)段(duan)。該試劑盒(he)采用DNA吸附柱和新型(xing)獨te的(de)溶液(ye)系統(tong)，能(neng)有(you)效去(qu)除動(dong)物糞(fen)便(bian)中各(ge)種影(ying)響下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)（如PCR）的(de)抑制(zhi)因子(zi)，並能(neng)高效地回收(shou)糞(fen)便(bian)中的(de)基(ji)因組DNA。
糞(fen)便(bian)基因(yin)組DNA快速提(ti)取試劑盒(he)

諾(nuo)博(bo)萊德(de) 糞(fen)便(bian)基因(yin)組DNA快速提(ti)取試劑盒(he)

糞(fen)便(bian)基因(yin)組DNA快速提(ti)取試劑盒(he) （離心(xin)柱型）

目錄號：40213

適(shi)用(yong)範(fan)圍：

適(shi)用(yong)於(yu)快速提(ti)取各(ge)種糞(fen)便(bian)DNA

試劑盒(he)組成(cheng)、儲存、穩定性：

本試劑盒(he)在(zai)室(shi)溫(wen)儲存12個(ge)月不(bu)影響使(shi)用(yong)效果(guo)。

雜(za)質清(qing)除劑AB，短(duan)時(shi)間(jian)內使(shi)用(yong)可(ke)以(yi)放(fang)室(shi)溫(wen)，長(chang)期保(bao)存(cun)負-20℃。

儲存事項:

1.緩(huan)沖(chong)液ASL或者(zhe)結(jie)合(he)液(ye)CB低溫(wen)時(shi)可(ke)能(neng)出現(xian)析(xi)出和(he)沈澱，可(ke)以(yi)在(zai)70℃水浴(yu)幾(ji)分鐘幫助(zhu)重新充(chong)分溶解(jie)，恢(hui)復(fu)澄(cheng)清(qing)透(tou)明(ming)後(hou)冷(leng)卻到(dao)室(shi)溫(wen)即(ji)可(ke)使(shi)用(yong)。

2.雜(za)質清(qing)除劑AB常溫(wen)運輸(shu)，短(duan)期壹(yi)個(ge)月內(nei)可(ke)4℃存放，-20℃長(chang)期保(bao)存(cun)。

3.為避免降(jiang)低活性，方(fang)便運輸(shu)，提(ti)供(gong)蛋白酶K為凍(dong)幹粉狀(zhuang)，收(shou)到(dao)後(hou)，可(ke)短暫(zan)離心(xin)後(hou)，加(jia)入(ru)1毫(hao)升(sheng)滅菌水(shui)溶解(jie)，因(yin)為反復凍(dong)融(rong)可(ke)能(neng)會(hui)降(jiang)低酶活性，因(yin)此溶解(jie)後(hou)立即(ji)按照每次使(shi)用(yong)量(liang)(20微升(sheng))分裝凍(dong)存(cun)，－20℃保(bao)存(cun)。

4.避(bi)免(mian)試劑長(chang)時(shi)間(jian)暴露於(yu)空氣中(zhong)產生揮發、氧化(hua)、pH值變(bian)化(hua)，各(ge)溶液(ye)使(shi)用(yong)後(hou)應(ying)及時(shi)蓋(gai)緊(jin)蓋子(zi)。

具體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參(can)數以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書的(de)參(can)數為準

產(chan)品(pin)介(jie)紹(shao)：

常規的(de)DNA純(chun)化(hua)方(fang)式並不(bu)能(neng)有(you)效地去(qu)除糞(fen)便(bian)中存(cun)在(zai)的(de)大(da)量(liang)抑制(zhi)因子(zi)而導致(zhi)下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)的(de)失(shi)敗，如PCR不(bu)能(neng)擴(kuo)增出所(suo)需(xu)片(pian)段(duan)。該試劑盒(he)采用DNA吸附柱和新型(xing)獨te的(de)溶液(ye)系統(tong)，能(neng)有(you)效去(qu)除動(dong)物糞(fen)便(bian)中各(ge)種影(ying)響下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)（如PCR）的(de)抑制(zhi)因子(zi)，並能(neng)高效地回收(shou)糞(fen)便(bian)中的(de)基(ji)因組DNA。動(dong)物糞(fen)便(bian)樣品(pin)經(jing)特殊緩(huan)沖(chong)液ASL重懸後(hou)，70℃處(chu)理5分鐘裂解(jie)細(xi)菌；離心(xin)去(qu)除不(bu)溶解(jie)的(de)雜(za)質，蛋白酶K消(xiao)化(hua)進(jin)壹(yi)步去(qu)除蛋白和雜(za)質；然(ran)後(hou)基(ji)因(yin)組DNA在(zai)高離序鹽(yan)狀(zhuang)態下(xia)選(xuan)擇(ze)性吸附於離心(xin)柱內矽(gui)基(ji)質膜，再(zai)通(tong)過壹(yi)系(xi)列快速的(de)漂(piao)洗－離心(xin)的(de)步驟，抑制(zhi)物去(qu)除液(ye)和(he)漂洗(xi)液將細(xi)胞代(dai)謝物、蛋白等雜(za)質去(qu)除，最(zui)後(hou)低鹽的(de)洗(xi)脫緩(huan)沖(chong)液將純(chun)凈(jing)基(ji)因組DNA從矽(gui)基(ji)質膜上(shang)洗脫。

產(chan)品(pin)特點(dian)：

1. 離心(xin)吸附柱內矽(gui)基(ji)質膜全(quan)部采用進(jin)口(kou)*公司(si)特制吸附膜，柱與柱之(zhi)間吸附量(liang)差(cha)異(yi)極(ji)小，可(ke)重復性好(hao)。克服了國產試劑盒(he)膜質量(liang)不(bu)穩定的(de)弊端(duan)。

2. 不(bu)需(xu)要使(shi)用(yong)有(you)毒(du)的(de)ben酚等試劑，也(ye)不(bu)需(xu)要乙(yi)醇(chun)沈(chen)澱等步驟。

3.  快速，簡(jian)捷，單(dan)個樣(yang)品操(cao)作(zuo)壹(yi)般(ban)可(ke)在(zai)40分鐘內完(wan)成(cheng)。

4.   多次柱漂洗確保(bao)高純(chun)度(du)，OD₂₆₀/OD₂₈₀典(dian)型的(de)比(bi)值達(da)1.7～1.9，可(ke)直接(jie)用(yong)於PCR，Southern-blot和(he)各種酶切(qie)反(fan)應(ying)。

註意(yi)事項：

1. 所(suo)有(you)的(de)離心(xin)步驟均在(zai)室(shi)溫(wen)完(wan)成(cheng)，使(shi)用(yong)轉速可(ke)以(yi)達(da)到13,000rpm的(de)傳統(tong)臺(tai)式離心(xin)機(ji)，如Eppendorf 5415C 或者(zhe)類(lei)似(si)離心(xin)機(ji)。

2. 開始(shi)實驗(yan)前將需(xu)要的(de)水(shui)浴(yu)先(xian)預熱(re)到(dao)70℃備用(yong)。

3.  結(jie)合(he)液(ye)CB 和抑制(zhi)物去(qu)除液(ye)IR中(zhong)含有(you)刺(ci)激性化(hua)合(he)物，操(cao)作(zuo)時(shi)要戴乳膠手套，避免(mian)沾(zhan)染(ran)皮膚，眼睛和衣(yi)服。若(ruo)沾(zhan)染(ran)皮膚、眼睛時，要用(yong)大(da)量(liang)清水或者(zhe)生理鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗。

4. 液(ye)EB不(bu)含有(you)螯(ao)合劑EDTA， 不(bu)影響下(xia)遊(you)酶(mei)切(qie)、連接(jie)等反(fan)應(ying)。也可(ke)以(yi)使(shi)用(yong)水(shui)洗(xi)脫， 但應(ying)該確(que)保(bao)pH大(da)於(yu)7.5， pH過(guo)低影響洗(xi)脫效率(lv)。用(yong)水(shui)洗(xi)脫DNA應(ying)該保(bao)存(cun)在(zai)－20℃。DNA如果(guo)需(xu)要長(chang)期保(bao)存(cun)，可(ke)以(yi)用(yong)TE緩(huan)沖(chong)液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可(ke)能(neng)影(ying)響下(xia)遊(you)酶(mei)切(qie)反應(ying)，使(shi)用(yong)時(shi)可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)稀釋(shi)。

5. PCR可(ke)能(neng)被(bei)過量(liang)的(de)DNA（壹(yi)般(ban)大(da)於(yu)1μg）抑制(zhi)，使(shi)用(yong)最(zui)小用量(liang)的(de)洗(xi)脫DNA（適(shi)當(dang)稀釋(shi)）反而可(ke)以(yi)得(de)到(dao)更好(hao)的(de)擴(kuo)增。壹(yi)般(ban)加(jia)入(ru)的(de)洗(xi)脫DNA體(ti)積(ji)不(bu)要超(chao)過(guo)總PCR反應(ying)體(ti)積(ji)的(de)10％。我們建(jian)議(yi)在(zai)PCR反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)加(jia)入(ru)終(zhong)濃度0.1 μg/μl的(de)BSA（牛血(xue)清(qing)白蛋白）有(you)助(zhu)於得(de)到優(you)良擴(kuo)增效果(guo)。

操(cao)作(zuo)步驟：（實驗(yan)前請(qing)先(xian)閱(yue)讀(du)註意(yi)事項）

提(ti)示(shi)：第(di)壹(yi)次使(shi)用(yong)前請(qing)先(xian)在(zai)15ml漂洗(xi)液(ye)WB中(zhong)加(jia)入(ru)60ml無(wu)水乙(yi)醇(chun)，充(chong)分混(hun)勻，加(jia)入(ru)後(hou)請(qing)及時在(zai)方框(kuang)打(da)鉤標(biao)記(ji)已加(jia)入(ru)乙(yi)醇(chun)，以(yi)免(mian)多次加(jia)入(ru)!

1. 收(shou)集約200-220mg糞(fen)便(bian)到壹(yi)個(ge)2ml離心(xin)管(guan)，置(zhi)冰(bing)上。

如果(guo)是冰凍(dong)的(de)標(biao)本，加(jia)入(ru)緩(huan)沖(chong)液ASL前不(bu)能(neng)解(jie)凍(dong)，否則(ze)DNA容易降(jiang)解(jie)。

2. 加(jia)1.4ml 緩(huan)沖(chong)液ASL，連續(xu)渦旋振(zhen)蕩(dang)1分鐘或者(zhe)直到(dao)完(wan)quan混(hun)勻均壹(yi)。

註意(yi)完(wan)quan渦旋混(hun)勻，否則(ze)會嚴重(zhong)降(jiang)低產量(liang)。

3. 將(jiang)重(zhong)懸物70℃溫(wen)育(yu)5分鐘。

該(gai)加(jia)熱(re)步驟可(ke)以(yi)提(ti)高3-5倍DNA產(chan)量(liang)，並且(qie)幫助(zhu)裂解(jie)細(xi)菌和(he)寄(ji)生蟲。對(dui)於某(mou)些難裂解(jie)的(de)細(xi)胞（如革(ge)蘭(lan)氏陽(yang)性菌(jun)）可(ke)以(yi)提(ti)高到95℃。

4. 渦旋振(zhen)蕩(dang)15秒，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)1分鐘。最(zui)高速離心(xin)1分鐘沈澱(dian)糞(fen)便(bian)顆粒(li)。

5.轉移(yi)900μl上(shang)清(qing)到(dao)壹(yi)個(ge)1.5ml離心(xin)管(guan)，加(jia)入(ru)100μl雜(za)質清(qing)除劑AB，立刻(ke)渦旋振(zhen)蕩(dang)1分鐘或者(zhe)直到(dao)完(wan)quan混(hun)勻均壹(yi)，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)1分鐘。最(zui)高速離心(xin)3分鐘去(qu)除雜(za)質。

6. 轉移(yi)所(suo)有(you)上(shang)清到(dao)壹(yi)個(ge)1.5ml離心(xin)管(guan)，最(zui)高速離心(xin)3分鐘。

7. 轉移(yi)210μl上(shang)清(qing)到(dao)壹(yi)個(ge)1.5ml離心(xin)管(guan)，加(jia)入(ru)20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液(ye)，充(chong)分混(hun)勻，加(jia)入(ru)200μl 結(jie)合液CB，渦旋振(zhen)蕩(dang)15秒，充(chong)分混(hun)勻。70℃溫(wen)育(yu)10分鐘。

如果(guo)產量(liang)偏低，可(ke)以(yi)轉移(yi)更多的(de)上(shang)清，並且(qie)相(xiang)應(ying)的(de)按比例(li)提高蛋白酶K和(he)結(jie)合液的(de)和(he)後(hou)面(mian)的(de)異(yi)丙醇使(shi)用(yong)量(liang)。

8. 冷(leng)卻後(hou)加(jia)入(ru)100μl 異(yi)丙醇，渦旋混(hun)勻。

9. 上(shang)壹(yi)步所得(de)溶液(ye)和可(ke)能(neng)出現(xian)的(de)沈(chen)澱都加(jia)入(ru)壹(yi)個(ge)吸附柱AC中，（吸附柱放入(ru)收(shou)集管(guan)中(zhong)）13,000rpm離心(xin)30秒，倒(dao)掉收(shou)集管(guan)中(zhong)的(de)廢(fei)液。

10.加(jia)入(ru)500μl抑制(zhi)物去(qu)除液(ye)IR，12,000rpm 離心(xin)30秒，棄廢液(ye)。

11. 加(jia)入(ru)700μl漂(piao)洗液WB（請(qing)先(xian)檢(jian)查(zha)是否已加(jia)入(ru)無(wu)水乙(yi)醇(chun)!），12,000rpm 離心(xin)30秒，棄掉廢(fei)液(ye)。

12.  加(jia)入(ru)500μl漂(piao)洗液WB，12,000rpm 離心(xin)30秒，棄掉廢(fei)液(ye)。

13. 將(jiang)吸附柱AC放回空收(shou)集管(guan)中(zhong)，13,000rpm離心(xin)2分鐘，盡量(liang)除去(qu)漂洗(xi)液，以(yi)免(mian)漂(piao)洗液(ye)中殘留(liu)乙(yi)醇(chun)抑制(zhi)下(xia)遊(you)反(fan)應(ying)。

14. 取出吸附柱AC，放入(ru)壹(yi)個(ge)幹凈(jing)的(de)離心(xin)管(guan)中，在(zai)吸附膜的(de)中(zhong)間部位(wei)加(jia)100－150μl洗(xi)脫緩(huan)沖(chong)液EB（洗脫緩(huan)沖(chong)液可(ke)事先(xian)在(zai) 65-70℃水浴(yu)中(zhong)預熱(re)），室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)2分鐘，12,000rpm 離心(xin)1分鐘。將得(de)到(dao)的(de)溶液(ye)重新加(jia)入(ru)離心(xin)吸附柱中，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)2分鐘，12,000rpm離心(xin)1分鐘。

洗(xi)脫體(ti)積(ji)越大(da)，洗(xi)脫效率(lv)越高，如果(guo)需(xu)要DNA濃(nong)度(du)較高，可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)減少(shao)洗(xi)脫體(ti)積(ji)，但是(shi)最(zui)小體(ti)積(ji)不(bu)應(ying)少於(yu)50μl，體(ti)積(ji)過小降(jiang)低DNA洗脫效率(lv)，減少(shao)DNA產(chan)量(liang)。

15.   DNA可(ke)以(yi)存(cun)放(fang)在(zai)2-8℃，如果(guo)要長(chang)時(shi)間存(cun)放，可(ke)以(yi)放(fang)置(zhi)在(zai)－20℃。

問(wen)題(ti)與解(jie)決(jue)方法: