λ噬(shi)菌(jun)體載(zai)體廣(guang)泛用於(yu)文(wen)庫(ku)篩(shai)選(xuan)，目的(de)克(ke)隆(long)培(pei)養(yang)獲得大(da)量的噬(shi)菌(jun)體顆粒需要提取(qu)λ噬菌(jun)體DNA來(lai)開展測(ce)序(xu)等後續(xu)工(gong)作。λ噬(shi)菌(jun)體裂(lie)解培(pei)養物(wu)離(li)心(xin)後的上(shang)清(qing)，首先用RNase A /DNase I混合(he)酶消化(hua)去(qu)除殘(can)留的宿主(zhu)菌(jun)DNA/RNA，沈澱(dian)收集(ji)噬菌(jun)體，噬菌(jun)體被SDS裂(lie)解，殘(can)留碎(sui)片(pian)通過(guo)沈澱(dian)離(li)心(xin)去(qu)除掉(diao)。
λ噬菌(jun)體基(ji)因組(zu)DNA快(kuai)速提取(qu)試劑(ji)盒(he)

諾博萊(lai)德(de)λ噬(shi)菌(jun)體基(ji)因組(zu)DNA快(kuai)速提取(qu)試劑(ji)盒(he)

λ噬菌(jun)體基(ji)因組(zu)DNA快(kuai)速提取(qu)試劑(ji)盒(he)（離(li)心(xin)柱型）

目錄(lu)號：40212

適用範圍：

適用於(yu)快(kuai)速λ噬菌(jun)體DNA

試劑盒組成、儲存、穩(wen)定性：

本試劑盒在(zai)室(shi)溫儲存12個月不影(ying)響(xiang)使(shi)用效(xiao)果。

儲存事(shi)項:

1.在RNase A管和(he)DNase I管分別加(jia)入(ru)1毫(hao)升的(de)裂(lie)解緩(huan)沖液吹打(da)，顛(dian)倒混勻，充分溶解(jie)RNase A和(he)DNase I後，按(an)照每(mei)次(ci)使(shi)用量分裝(zhuang)－20℃凍(dong)存，有效(xiao)期6個月。

2.結合(he)液LB低溫時可能出(chu)現(xian)析出和(he)沈澱(dian)，可(ke)以(yi)在37℃水浴幾(ji)分鐘(zhong)幫(bang)助(zhu)重(zhong)新(xin)溶(rong)解(jie)，恢(hui)復澄清(qing)透明後(hou)冷卻(que)到室(shi)溫即(ji)可使用。

3.避免(mian)試劑長時間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)空(kong)氣(qi)中產生揮發(fa)、氧(yang)化(hua)、pH值變化(hua)，各溶(rong)液使用後應(ying)及(ji)時(shi)蓋緊蓋子。

具體產品的(de)參(can)數以(yi)收到產品說明書(shu)的(de)參(can)數為準(zhun)

產品介(jie)紹：

λ噬菌(jun)體載(zai)體廣(guang)泛用於(yu)文(wen)庫(ku)篩(shai)選(xuan)，目的(de)克(ke)隆(long)培(pei)養(yang)獲得大(da)量的噬(shi)菌(jun)體顆粒需要提取(qu)λ噬菌(jun)體DNA來(lai)開展測(ce)序(xu)等後續(xu)工(gong)作。λ噬(shi)菌(jun)體裂(lie)解培(pei)養物(wu)離(li)心(xin)後的上(shang)清(qing)，首先用RNase A /DNase I混合(he)酶消化(hua)去(qu)除殘(can)留的宿主(zhu)菌(jun)DNA/RNA，沈澱(dian)收集(ji)噬菌(jun)體，噬菌(jun)體被SDS裂(lie)解，殘(can)留碎(sui)片(pian)通過(guo)沈澱(dian)離(li)心(xin)去(qu)除掉(diao)。裂(lie)解物(wu)上(shang)清(qing)中的(de)λ噬菌(jun)體DNA在高離(li)序鹽(yan)狀(zhuang)態(tai)下(xia)選(xuan)擇(ze)性吸附(fu)於(yu)離(li)心(xin)柱內矽(gui)基(ji)質膜(mo)，再(zai)通過(guo)壹系列(lie)快(kuai)速的漂洗－離心(xin)的步(bu)驟，將(jiang)鹽(yan)、細(xi)胞(bao)代謝物(wu)、蛋(dan)白等雜質(zhi)去(qu)除，最(zui)後低(di)鹽(yan)的洗脫緩沖(chong)液將(jiang)λ噬(shi)菌(jun)體DNA從(cong)矽(gui)基(ji)質膜(mo)上洗脫。

產品特(te)點：

1. 不需要使用有毒(du)的(de)ben酚等試劑(ji)，也不(bu)需要乙醇沈澱(dian)等(deng)步(bu)驟。

2. 節(jie)省時(shi)間，簡捷(jie)，可(ke)用於(yu)液體培(pei)養(yang)裂(lie)解物(wu)和(he)固體(ti)培養(yang)板的提取(qu)，單(dan)個樣品操(cao)作壹般可在1.5小時(shi)內完(wan)成。

3. 產量高，典(dian)型的產量10ml λ噬菌(jun)體裂(lie)解培(pei)養物(wu)上(shang)清(qing)可以(yi)提取(qu)約10µg λ噬(shi)菌(jun)體DNA。

4. 多(duo)次(ci)柱(zhu)漂(piao)洗確(que)保高純(chun)度(du)，OD260/OD280典(dian)型的比值達1.7～1.9。可(ke)以(yi)直接(jie)用來(lai)酶切和(he)測(ce)序(xu)。

v  註意(yi)事項(xiang)：

1.使用轉速(su)可(ke)以(yi)達到(dao)13,000rpm的(de)冷凍(dong)離心(xin)機。

2.開始實(shi)驗(yan)前(qian)將(jiang)需要的水浴先預(yu)熱到37℃備(bei)用。

3.需要自備(bei)氯(lv)仿，20％SDS。

4.結合(he)液LB含有刺(ci)激性化(hua)合(he)物(wu)，操(cao)作時(shi)要戴乳(ru)膠手套，避免(mian)沾染皮膚(fu)，眼(yan)睛和(he)衣服(fu)。若(ruo)沾(zhan)染皮膚(fu)、眼(yan)睛時(shi)，要用大量清(qing)水或(huo)者(zhe)生理鹽(yan)水沖洗。

v  操作步(bu)驟：（實(shi)驗(yan)前(qian)請(qing)先閱讀註意(yi)事項(xiang)）

以(yi)10 ml噬菌(jun)體感染細(xi)菌(jun)培養上清(qing)提取(qu)舉(ju)例：

提示：

ð第壹次(ci)使(shi)用前(qian)請(qing)先在漂(piao)洗液WB中加(jia)入(ru)指(zhi)ding量無水乙醇，充分混勻，加入(ru)後(hou)請(qing)及(ji)時(shi)在方框打(da)鉤標記已(yi)加(jia)入(ru)乙醇，以(yi)免多(duo)次(ci)加(jia)入(ru)!

ð  將(jiang)噬(shi)菌(jun)體沈澱(dian)液放在(zai)冰(bing)上預(yu)冷。

1. 將(jiang)0.5%氯(lv)仿(fang)處理後的(de)λ噬(shi)菌(jun)體感染的液體培(pei)養(yang)物(wu)10,000g（約(yue)12,000rpm）4℃離(li)心(xin)10分鐘(zhong)去(qu)除細(xi)胞(bao)碎(sui)片(pian)和(he)殘渣(zha)。

轉速(su)不(bu)能過(guo)高(gao)，時間(jian)不能過(guo)長(chang)，否(fou)則噬(shi)菌(jun)體可能和(he)碎(sui)片(pian)壹起沈(chen)澱(dian)，降(jiang)低(di)產量。

2.取(qu)10ml上清(qing)，加入(ru)20μl RNase和(he)20μl DNase充分混勻37℃溫育(yu)30分鐘(zhong)。

每(mei)個噬(shi)菌(jun)體培養上(shang)清(qing)因生長和(he)裂(lie)解情(qing)況不同(tong)而(er)殘(can)留RNA/DNA量不等(deng)。RNase/DNase消化(hua)過頭(tou)，可(ke)能減少(shao)產量；消化(hua)不完(wan)quan，可(ke)能未(wei)消化(hua)的DNA/RNA和(he)細(xi)胞(bao)碎(sui)片(pian)粘去(qu)部(bu)分噬菌(jun)體減低(di)產量並(bing)/或(huo)者(zhe)導(dao)致(zhi)最(zui)後汙染宿主(zhu)菌(jun)DNA，因此(ci)應(ying)該(gai)根據(ju)實(shi)際(ji)情況(kuang)適(shi)當(dang)調(tiao)節(jie)用量和(he)消化(hua)時間(jian)。

3.加入(ru)2 ml冰(bing)預(yu)冷的(de)噬(shi)菌(jun)體沈澱(dian)液，輕柔充(chong)分混勻後置(zhi)冰(bing)上冷卻(que)（培養(yang)板裂(lie)解物(wu)必(bi)須在(zai)冰(bing)上放(fang)置(zhi)30分鐘(zhong)）。

4.10,000g（12,000rpm）4℃離心(xin)10分鐘(zhong)，棄(qi)上清(qing)，幹(gan)燥(zao)1分鐘(zhong)。沈澱(dian)下(xia)來(lai)的噬(shi)菌(jun)體外(wai)觀(guan)為透亮或(huo)者(zhe)稍白的沈(chen)澱(dian)。

5.加入(ru)500μl裂(lie)解緩(huan)沖液，吹打(da)重(zhong)懸(xuan)噬菌(jun)體，加入(ru)100μl 20％SDS，立即(ji)輕柔顛(dian)倒混勻4-6次(ci)後(hou)，70℃溫育(yu)10分鐘(zhong)，然(ran)後(hou)置(zhi)冰(bing)上冷卻(que)。

6.加入(ru)100μl雜質(zhi)沈(chen)澱(dian)液，立即(ji)輕柔顛(dian)倒混勻4-6次(ci)，最(zui)高速(su)13,000g 4℃離(li)心(xin)10分鐘(zhong)。

7.仔細(xi)將(jiang)上(shang)清(qing)轉入(ru)新(xin)的(de)離(li)心(xin)管，加入(ru)350μl結合(he)液LB，輕柔渦(wo)旋混勻。

8. 將(jiang)上(shang)述(shu)混合(he)物(wu)加(jia)入(ru)壹個吸附(fu)柱(zhu)AC中(zhong)，（吸附(fu)柱(zhu)放(fang)入(ru)收集(ji)管中）12,000rpm離(li)心(xin)30秒，倒掉收集(ji)管中的(de)廢(fei)液。

吸附(fu)柱(zhu)壹次(ci)最(zui)多(duo)只(zhi)可(ke)以(yi)容(rong)納大(da)約(yue)700μl混合(he)物(wu)，因此(ci)需要分次(ci)把混合(he)物(wu)上(shang)到(dao)吸附(fu)柱(zhu)內，重(zhong)復步(bu)驟8。

9. 加入(ru)700μl漂(piao)洗(xi)液WB（請先檢查(zha)是否(fou)已(yi)加(jia)入(ru)無水乙醇!），12,000rpm離心(xin)30秒，棄(qi)廢(fei)液。

10. 可選(xuan)步(bu)驟：重(zhong)復步(bu)驟9壹遍(bian)。

11. 將(jiang)吸附(fu)柱(zhu)AC放(fang)回空(kong)收集(ji)管中，13,000rpm離(li)心(xin)2分鐘(zhong)，盡(jin)量除去(qu)漂洗(xi)液， 以(yi)免漂(piao)洗(xi)液中殘(can)留乙醇抑(yi)制下遊(you)反(fan)應(ying)。

12.取(qu)出吸附(fu)柱(zhu)AC，放(fang)入(ru)壹個幹(gan)凈(jing)的(de)離(li)心(xin)管中，在(zai)吸附(fu)膜(mo)的中間(jian)部(bu)位加(jia)100μl洗(xi)脫緩沖(chong)液EB（洗脫緩沖(chong)液事先在 50℃水浴中預(yu)熱）， 室(shi)溫放置(zhi)1分鐘(zhong)，12,000rpm 離心(xin)1分鐘(zhong)。如(ru)果想得(de)到(dao)較多(duo)量的DNA，可(ke)將(jiang)得(de)到(dao)的(de)溶液重(zhong)新(xin)加(jia)入(ru)離(li)心(xin)吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)，12,000rpm離心(xin)1分鐘(zhong)。

洗脫體積越大，洗(xi)脫效(xiao)率越高，如(ru)果需要DNA濃度(du)較高，可以(yi)適當(dang)減少(shao)洗脫體積， 但(dan)是最(zui)小體(ti)積不應(ying)少(shao)於(yu)40μl，體(ti)積過小降低(di)DNA洗(xi)脫效(xiao)率，減少(shao)DNA產量。

13.  DNA可以(yi)存放(fang)在(zai)2-8℃，如(ru)果要長時(shi)間存(cun)放(fang)，可(ke)以(yi)放置(zhi)在-20℃。
問題與解決(jue)方(fang)法: