M13和其它(ta)的(de)絲狀噬菌(jun)體(ti)載體(ti)，在(zai)文(wen)庫(ku)構(gou)建(jian)和為(wei)序列測序提供(gong)單鏈DNA和引(yin)人突(tu)變方(fang)面(mian)十分有(you)用。將適量(liang)M13絲狀噬菌(jun)體(ti)或(huo)者相(xiang)關噬粒（M13來源）感(gan)染的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養物(wu)離(li)心(xin)，上清(qing)中(zhong)的(de)單鏈噬菌(jun)體(ti)DNA在(zai)高(gao)離(li)序鹽(yan)狀態下選(xuan)擇性吸(xi)附(fu)於離(li)心(xin)柱內(nei)矽基質(zhi)膜，再(zai)通(tong)過(guo)壹(yi)系列快速的(de)漂(piao)洗(xi)－離(li)心(xin)的步驟，將(jiang)鹽(yan)、細胞(bao)代謝(xie)物，蛋白等雜(za)質(zhi)去除，最(zui)後(hou)低鹽(yan)的(de)洗(xi)脫緩(huan)沖液(ye)將純凈(jing)噬菌(jun)體(ti)單鏈DNA從矽基質(zhi)膜上(shang)洗(xi)
M13噬菌(jun)體(ti)單鏈基因組(zu)DNA快速提取(qu)試劑(ji)盒(he)

諾博(bo)萊德 M13噬菌(jun)體(ti)單鏈基因組(zu)DNA快速提取(qu)試劑(ji)盒(he)

M13噬菌(jun)體(ti)單鏈基因組(zu)DNA快速提取(qu)試劑(ji)盒(he)

目(mu)錄號(hao)：40211

適用範圍：

適用於快速提取(qu)M13噬粒單鏈DNA

試劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)、儲(chu)存(cun)、穩定性：

本試劑(ji)盒(he)在(zai)室溫(wen)儲(chu)存(cun)12個(ge)月不(bu)影(ying)響(xiang)使用效果。

儲(chu)存(cun)事(shi)項:

  1.結(jie)合(he)液(ye)MB低溫時(shi)可(ke)能(neng)出(chu)現(xian)析(xi)出(chu)和沈(chen)澱，可(ke)以在(zai)37℃水(shui)浴幾(ji)分鐘(zhong)幫助(zhu)重(zhong)新(xin)溶(rong)解，恢(hui)復澄(cheng)清(qing)透(tou)明後(hou)冷(leng)卻(que)到室溫(wen)即(ji)可(ke)使用。

   2.   避免試劑(ji)長時(shi)間(jian)暴露(lu)於空(kong)氣中(zhong)產(chan)生揮發、氧(yang)化、pH值(zhi)變化(hua)，各溶(rong)液(ye)使用後(hou)應及(ji)時(shi)蓋(gai)緊蓋(gai)子(zi)。

具體(ti)產(chan)品的參數以收(shou)到產(chan)品說明書的參數為(wei)準

產(chan)品介(jie)紹：

M13和其它(ta)的(de)絲狀噬菌(jun)體(ti)載體(ti)，在(zai)文(wen)庫(ku)構(gou)建(jian)和為(wei)序列測序提供(gong)單鏈DNA和引(yin)人突(tu)變方(fang)面(mian)十分有(you)用。將適量(liang)M13絲狀噬菌(jun)體(ti)或(huo)者相(xiang)關噬粒（M13來源）感(gan)染的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養物(wu)離(li)心(xin)，上清(qing)中(zhong)的(de)單鏈噬菌(jun)體(ti)DNA在(zai)高(gao)離(li)序鹽(yan)狀態下選(xuan)擇性吸(xi)附(fu)於離(li)心(xin)柱內(nei)矽基質(zhi)膜，再(zai)通(tong)過(guo)壹(yi)系列快速的(de)漂(piao)洗(xi)－離(li)心(xin)的步驟，將(jiang)鹽(yan)、細胞(bao)代謝(xie)物，蛋白等雜(za)質(zhi)去除，最(zui)後(hou)低鹽(yan)的(de)洗(xi)脫緩(huan)沖液(ye)將純凈(jing)噬菌(jun)體(ti)單鏈DNA從矽基質(zhi)膜上(shang)洗(xi)脫。

產(chan)品特(te)點(dian)：

  1.不需(xu)要(yao)使用有毒的(de)ben酚等試(shi)劑(ji)，也不需(xu)要(yao)乙醇(chun)沈(chen)澱等(deng)步驟。

 2.節省(sheng)時(shi)間(jian)，簡捷，單個(ge)樣(yang)品操作(zuo)壹(yi)般(ban)可(ke)在(zai)10分鐘(zhong)內(nei)完(wan)成(cheng)。

 3.產(chan)量(liang)高(gao)，典型的(de)產(chan)量(liang)800µl M13絲狀噬菌(jun)體(ti)上清(qing)可(ke)以提取(qu)3µg噬菌(jun)體(ti)單鏈DNA。

   4.多次(ci)柱漂(piao)洗(xi)確保(bao)高(gao)純(chun)度(du)，OD260/OD280典型的(de)比值(zhi)達1.7～1.9。可(ke)以直接(jie)用來(lai)測(ce)序，壹(yi)般(ban)典型可(ke)辨認讀長達650bp。

註意(yi)事項：

    1.    所有的離(li)心(xin)步驟均(jun)在(zai)室溫(wen)完(wan)成(cheng)，使用轉速(su)可(ke)以達到13,000rpm的傳(chuan)統臺(tai)式(shi)離(li)心(xin)機，如(ru)Eppendorf 5415C 或(huo)者類(lei)似(si)離(li)心(xin)機。

    2.   開(kai)始實驗前將需(xu)要(yao)的(de)水(shui)浴先預(yu)熱(re)到50℃備(bei)用。

    3.     結(jie)合(he)液(ye)MB含(han)有刺(ci)激(ji)性化(hua)合(he)物，操(cao)作時(shi)要(yao)戴(dai)乳膠手套，避(bi)免(mian)沾(zhan)染皮(pi)膚，眼(yan)睛和衣服。若(ruo)沾(zhan)染皮(pi)膚、眼(yan)睛時(shi)，要(yao)用(yong)大量(liang)清(qing)水(shui)或(huo)者生理鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)。
 操作步驟:（實驗前請(qing)先閱(yue)讀(du)註意(yi)事項）

以800μl噬菌(jun)體(ti)感(gan)染細(xi)菌(jun)培(pei)養上(shang)清(qing)提取(qu)舉例:

提示：第(di)壹次(ci)使用前請(qing)先在(zai)漂(piao)洗(xi)液(ye)WB中(zhong)加(jia)入(ru)指ding量(liang)無水(shui)乙醇(chun)，充(chong)分混勻，加入(ru)後(hou)請(qing)及(ji)時(shi)在(zai)方(fang)框打鉤標記已加(jia)入(ru)乙醇(chun)，以免多次(ci)加入(ru)!

1.將M13絲狀噬菌(jun)體(ti)或(huo)者相(xiang)關噬粒（M13來源）感(gan)染的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養物(wu)分裝(zhuang)在(zai)1.5毫(hao)升(sheng)離(li)心(xin)管(guan)，12,000rpm離(li)心(xin)5分鐘(zhong)沈(chen)澱菌(jun)體(ti)。

2. 小(xiao)心(xin)取800μl上清(qing)轉(zhuan)入(ru)新(xin)的1.5ml離(li)心(xin)管(guan)，加入(ru)400μl結(jie)合(he)液(ye)MB，充(chong)分混勻。

如果使用的上(shang)清(qing)大於或(huo)者小(xiao)於800μl，則結(jie)合(he)液(ye)MB的用量(liang)需(xu)要(yao)按(an)照(zhao)比例(li)增加(jia)或(huo)者減(jian)少(shao)。

 3.將上述混合(he)物加(jia)入(ru)壹(yi)個(ge)吸(xi)附(fu)柱AC中(zhong)，（吸(xi)附(fu)柱放入(ru)收(shou)集管(guan)中(zhong)）13,000rpm離(li)心(xin)15秒，倒掉收(shou)集管(guan)中(zhong)的(de)廢液(ye)。

吸(xi)附(fu)柱壹(yi)次(ci)最(zui)多只(zhi)可(ke)以容納大約700μl混合(he)物，因(yin)此(ci)需(xu)要(yao)分次(ci)把混合(he)物加(jia)到吸(xi)附(fu)柱內(nei)，重(zhong)復步(bu)驟3。

      4.加入(ru)700μl漂(piao)洗(xi)液(ye)WB（請(qing)先檢查是(shi)否已加(jia)入(ru)無水(shui)乙醇(chun)!），12,000rpm 離(li)心(xin)30秒，棄廢液(ye)。

      5.   將吸(xi)附(fu)柱AC放回(hui)空(kong)收(shou)集管(guan)中(zhong)，13,000rpm離(li)心(xin)2分鐘(zhong)，盡量(liang)除(chu)去漂洗(xi)液(ye)， 以免漂洗(xi)液(ye)中(zhong)殘(can)留(liu)乙醇(chun)抑(yi)制(zhi)下遊(you)反應。

     6. 取出(chu)吸(xi)附(fu)柱AC，放入(ru)壹(yi)個(ge)幹凈的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)吸(xi)附(fu)膜的(de)中(zhong)間(jian)部位加(jia)60μl洗(xi)脫緩(huan)沖液(ye)EB（洗(xi)脫緩(huan)沖液(ye)事先在(zai) 50℃水(shui)浴中(zhong)預(yu)熱(re)）， 室溫(wen)放置(zhi)1分鐘(zhong)，12,000rpm 離(li)心(xin)1分鐘(zhong)。如果想得到較多(duo)量(liang)的(de)DNA，可(ke)將(jiang)得到的溶(rong)液(ye)重(zhong)新(xin)加(jia)入(ru)離(li)心(xin)吸(xi)附(fu)柱中(zhong)，10,000rpm離(li)心(xin)1分鐘(zhong)。

洗(xi)脫體(ti)積越大，洗(xi)脫效率(lv)越高，如果需(xu)要(yao)DNA濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao)，可(ke)以適當(dang)減(jian)少(shao)洗(xi)脫體(ti)積， 但(dan)是最(zui)小(xiao)體(ti)積不應少於40μl，體(ti)積過(guo)小(xiao)降(jiang)低DNA洗(xi)脫效率(lv)，減(jian)少(shao)DNA產(chan)量(liang)。

     7. DNA可(ke)以存(cun)放在(zai)2-8℃，如(ru)果要(yao)長(chang)時(shi)間(jian)存(cun)放，可(ke)以放置(zhi)在(zai)－20℃。

附(fu)錄（M13噬菌(jun)體(ti)感(gan)染細(xi)菌(jun)培(pei)養上(shang)清(qing)準(zhun)備(bei)過(guo)程(cheng)）:

下面(mian)舉例說明M13噬菌(jun)體(ti)感(gan)染細(xi)菌(jun)培(pei)養上(shang)清(qing)準(zhun)備(bei)過(guo)程(cheng)，詳(xiang)細的M13噬菌(jun)體(ti)（或(huo)M13來源噬粒）培(pei)養和上清(qing)準(zhun)備(bei)過(guo)程(cheng)請(qing)參見『分子(zi)克隆(long)』第(di)二(er)版(ban)。

1.37℃ 振(zhen)搖(yao)過(guo)夜培(pei)養合(he)適的(de)噬菌(jun)體(ti)宿主(zhu)菌(jun)（如(ru)JM109）。

2.使用6％的過(guo)夜培(pei)養菌(jun)接(jie)種(zhong)新(xin)鮮的LB培(pei)養液(ye)，37℃振(zhen)搖(yao)培(pei)養壹(yi)個(ge)小(xiao)時(shi)。

  3.   根據M13噬菌(jun)體(ti)的儲(chu)存(cun)液(ye)的濃度(du)（滴(di)度(du)）按(an)照(zhao)0.5-1.5%(V/V)的比例(li)加(jia)入(ru)噬菌(jun)體(ti)來感(gan)染宿(xiu)主(zhu)菌(jun)。37℃振(zhen)搖(yao)培(pei)養5-6個(ge)小(xiao)時(shi)。

  4.   將上面(mian)M13絲狀噬菌(jun)體(ti)或(huo)者相(xiang)關噬粒（M13來源）感(gan)染的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養物(wu)分裝(zhuang)在(zai)1.5毫(hao)升(sheng)離(li)心(xin)管(guan)，12,000rpm離(li)心(xin)5分鐘(zhong)沈(chen)澱菌(jun)體(ti)。

 5.    可(ke)選(xuan)步驟: 小(xiao)心(xin)取1毫升上(shang)清(qing)轉(zhuan)入(ru)新(xin)的1.5ml離(li)心(xin)管(guan)， 重(zhong)復步(bu)驟4離(li)心(xin)5分鐘(zhong)。這步有助(zhu)於去除上(shang)清(qing)中(zhong)殘(can)留(liu)的(de)微(wei)量(liang)宿(xiu)主(zhu)菌(jun)RNA或(huo)者DNA。

  6.    小(xiao)心(xin)取800μl上清(qing)轉(zhuan)入(ru)新(xin)的1.5ml離(li)心(xin)管(guan)。

 7.    現在(zai)可(ke)以按照(zhao)操作步驟提取(qu)噬菌(jun)體(ti)單鏈DNA了(le)。

問題(ti)與(yu)解(jie)決(jue)方(fang)法(fa):