獨(du)te的(de)結(jie)合(he)液(ye)/蛋(dan)白(bai)酶(mei)K迅速裂(lie)解(jie)細胞和(he)滅活(huo)細(xi)胞(bao)內(nei)核酸(suan)酶(mei)，然後(hou)基因(yin)組DNA在(zai)高(gao)離(li)序鹽(yan)狀(zhuang)態下(xia)選(xuan)擇(ze)性吸附(fu)於離(li)心柱(zhu)內(nei)矽(gui)基(ji)質膜， 再通(tong)過(guo)壹(yi)系列快(kuai)速(su)的(de)漂(piao)洗－離(li)心的(de)步(bu)驟(zhou)， 抑制物去(qu)除(chu)液(ye)和(he)漂洗液(ye)將(jiang)細(xi)胞代(dai)謝(xie)物、蛋(dan)白(bai)等雜質(zhi)去除(chu)， 最(zui)後(hou)低(di)鹽(yan)的(de)洗脫(tuo)緩沖(chong)液(ye)將(jiang)純凈基因組(zu)DNA從(cong)矽(gui)基(ji)質膜上(shang)洗脫(tuo)。
海洋(yang)動(dong)物組(zu)織基因組DNA快(kuai)速提(ti)取(qu)試(shi)劑盒

諾(nuo)博萊德(de) 海洋(yang)動(dong)物組(zu)織基因組DNA快(kuai)速提(ti)取(qu)試(shi)劑盒

海洋(yang)動(dong)物組(zu)織基因組DNA快(kuai)速提(ti)取(qu)試(shi)劑盒（離(li)心柱(zhu)型(xing)）

目錄(lu)號(hao)：40317

適用(yong)於快(kuai)速(su)提取(qu)各種(zhong)海洋(yang)動(dong)物組(zu)織基因組DNA

v  試劑(ji)盒(he)組(zu)成、儲(chu)存(cun)、穩(wen)定(ding)性：

本試(shi)劑(ji)盒(he)在(zai)室溫(wen)儲(chu)存(cun)12個(ge)月(yue)不影(ying)響(xiang)使(shi)用(yong)效果(guo)

儲(chu)存(cun)事項(xiang):

1.結合(he)液(ye)CB或者(zhe)抑制物去(qu)除(chu)液(ye)IR低(di)溫(wen)時可能(neng)出(chu)現析(xi)出(chu)和沈(chen)澱(dian)，可(ke)以(yi)在(zai)37℃水浴(yu)幾分鐘(zhong)幫(bang)助重(zhong)新溶(rong)解(jie)，恢(hui)復(fu)澄(cheng)清透明(ming)後(hou)冷卻(que)到(dao)室溫(wen)即(ji)可(ke)使用(yong)。

2.為避(bi)免(mian)降(jiang)低活性、方(fang)便運輸，提供(gong)蛋白(bai)酶(mei)K為凍幹(gan)粉狀(zhuang)，收到(dao)後，可(ke)短暫離(li)心後，加(jia)入(ru)1ml滅菌(jun)水溶(rong)解(jie)，因(yin)為(wei)反復凍融可(ke)能(neng)會(hui)降(jiang)低酶(mei)活性，因此(ci)溶(rong)解(jie)後(hou)立(li)即按照每次使用(yong)量(20微升(sheng))分裝凍存，－20℃保(bao)存(cun)。

3.避免(mian)試劑(ji)長時間暴露(lu)於空(kong)氣中(zhong)產生揮發(fa)、氧化(hua)、pH值(zhi)變(bian)化(hua)，各溶(rong)液(ye)使(shi)用後應(ying)及時蓋(gai)緊(jin)蓋(gai)子。

具體(ti)產品(pin)的(de)參(can)數(shu)以(yi)收到(dao)產品(pin)說(shuo)明書(shu)的(de)參(can)數(shu)為準

v產品(pin)介紹(shao)：

獨te的(de)結(jie)合(he)液(ye)/蛋(dan)白(bai)酶(mei)K迅速裂(lie)解(jie)細胞和(he)滅活(huo)細(xi)胞(bao)內(nei)核酸(suan)酶(mei)，然後(hou)基因(yin)組DNA在(zai)高(gao)離(li)序鹽(yan)狀(zhuang)態下(xia)選(xuan)擇(ze)性吸附(fu)於離(li)心柱(zhu)內(nei)矽(gui)基(ji)質膜， 再通(tong)過(guo)壹(yi)系列快(kuai)速(su)的(de)漂(piao)洗－離(li)心的(de)步(bu)驟(zhou)， 抑制物去(qu)除(chu)液(ye)和(he)漂洗液(ye)將(jiang)細(xi)胞代(dai)謝(xie)物、蛋(dan)白(bai)等雜質(zhi)去除(chu)， 最(zui)後(hou)低(di)鹽(yan)的(de)洗脫(tuo)緩沖(chong)液(ye)將(jiang)純凈基因組(zu)DNA從(cong)矽(gui)基(ji)質膜上(shang)洗脫(tuo)。

v註意(yi)事項(xiang)：

洗脫(tuo)液(ye)EB不含有螯合(he)劑(ji)EDTA，不影(ying)響(xiang)下(xia)遊(you)酶(mei)切(qie)、連接(jie)等反應(ying)。也(ye)可(ke)以(yi)使(shi)用水洗脫(tuo)，但(dan)應該確保(bao)批(pi)pH大於7.5， pH過(guo)低(di)影(ying)響(xiang)洗脫(tuo)效率。用(yong)水洗脫(tuo)DNA應該保存(cun)在(zai)－20℃。DNA如(ru)果(guo)需要(yao)長期保存(cun)，可以(yi)用(yong)TE緩沖(chong)液(ye)洗脫(tuo)（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但(dan)是(shi)EDTA可能(neng)影(ying)響(xiang)下(xia)遊(you)酶(mei)切(qie)反應(ying)，使用(yong)時可以(yi)適當(dang)稀釋(shi)。
v操作(zuo)步(bu)驟(zhou)：（實驗前(qian)請(qing)先(xian)閱讀(du)註意(yi)事項(xiang)）

提示(shi)：第壹(yi)次使用(yong)前(qian)請(qing)先(xian)在漂(piao)洗液(ye)WB中(zhong)加(jia)入(ru)指din量(liang)無水乙(yi)醇(chun)，充(chong)分混勻，加入(ru)後請(qing)及時在方(fang)框(kuang)打(da)鉤標(biao)記(ji)已加(jia)入(ru)乙醇(chun)，以(yi)免(mian)多次加入(ru)!

1.切(qie)取(qu)不多於30mg 的(de)組(zu)織材(cai)料(liao)，放(fang)入(ru)裝有180μl組織裂解液(ye)SL的(de)1.5ml離(li)心管中(zhong)，渦(wo)旋振(zhen)蕩15 秒。根(gen)據(ju)提取(qu)的(de)組(zu)織不同(tong)，起(qi)始(shi)量也(ye)稍(shao)有不同(tong)，腮(sai)的(de)細(xi)胞(bao)量較大，壹般建議提取(qu)量(liang)不超過(guo)20mg。如(ru)果(guo)裂(lie)解(jie)困難，可(ke)先(xian)用(yong)液(ye)氮(dan)研磨。

2.加入(ru)20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶(mei)K溶(rong)液(ye)(20mg/ml)，立(li)刻渦(wo)旋振(zhen)蕩充(chong)分混勻。將(jiang)裂(lie)解物放(fang)置(zhi)在55℃水浴(yu)1-3小(xiao)時或者(zhe)直到(dao)組織消(xiao)化完(wan)quan。

不同(tong)組(zu)織裂解時間不同(tong)，通(tong)常需0.5–2小(xiao)時即可完(wan)成。扇貝組(zu)織0.5小(xiao)時基本可裂解(jie)完(wan)quan，蝦(xia)和(he)魚(yu)類組(zu)織1小(xiao)時。每小(xiao)時振(zhen)蕩混合(he)樣(yang)品(pin)2-3次，每次振(zhen)蕩混勻15 秒。

可選(xuan)做(zuo)步(bu)驟(zhou): 如(ru)果(guo)RNA殘留(liu)較多，需要(yao)去(qu)除RNA，可在完(wan)成步驟(zhou)2後加(jia)20μl RNase A(25mg/ml)溶(rong)液(ye)，振(zhen)蕩混勻，室溫(wen)放(fang)置(zhi)5-10分鐘(zhong)。

3.加入(ru)200μl 結合(he)液(ye)CB，立(li)刻渦(wo)旋振(zhen)蕩充(chong)分混勻，70℃放(fang)置(zhi)10分鐘(zhong)。

4.冷卻(que)後(hou)加(jia)100μl 異(yi)丙醇，充(chong)分顛(dian)倒或渦(wo)旋振(zhen)蕩充(chong)分混勻，此時可能(neng)出(chu)現絮(xu)狀(zhuang)沈(chen)澱。

5.將(jiang)上(shang)壹步(bu)混合(he)物和(he)可(ke)能(neng)的(de)沈(chen)澱(dian)都(dou)加(jia)入(ru)壹個(ge)吸附(fu)柱(zhu)AC中(zhong)，（吸(xi)附(fu)柱(zhu)放(fang)入(ru)收集管(guan)中(zhong)）13,000rpm離(li)心60秒，倒掉(diao)收集管(guan)中(zhong)的(de)廢(fei)液(ye)。

  如(ru)果(guo)有不溶(rong)組(zu)織物可(ke)能(neng)堵(du)住槍(qiang)頭，可(ke)將(jiang)槍(qiang)頭在(zai)吸水紙(zhi)上(shang)輕蹭去(qu)除(chu)不溶(rong)物；如(ru)果(guo)吸(xi)上(shang)來的(de)混合(he)物少(shao)則可(ke)以(yi)將(jiang)槍(qiang)頭和(he)不溶(rong)物壹(yi)起(qi)棄去，該做(zuo)法(fa)是(shi)為了去除(chu)不溶(rong)物，以(yi)免(mian)堵(du)塞離(li)心柱(zhu)。

  上(shang)述步(bu)驟中(zhong)立(li)刻渦(wo)旋或者(zhe)吹(chui)打充(chong)分混勻非常重(zhong)要(yao)，混勻不充(chong)分嚴(yan)重(zhong)降(jiang)低產量，必(bi)要(yao)時如(ru)樣品(pin)粘(zhan)稠不易混勻時可以(yi)渦(wo)旋振(zhen)蕩15秒混勻。

6.  加入(ru)500μl抑制物去(qu)除(chu)液(ye)IR，12,000rpm 離(li)心30秒，棄廢(fei)液(ye)。

7. 加入(ru)700μl漂洗液(ye)WB（請(qing)先檢查(zha)是(shi)否已(yi)加入(ru)無水乙(yi)醇(chun)!），12,000rpm 離(li)心30秒，棄掉(diao)廢液(ye)。

8.  加入(ru)500μl漂洗液(ye)WB，12,000rpm 離(li)心30秒，棄掉(diao)廢液(ye)。

9.  將(jiang)吸(xi)附(fu)柱(zhu)AC放(fang)回(hui)空(kong)收集管(guan)中(zhong)，13,000rpm離(li)心2分鐘(zhong)，盡(jin)量除去漂洗液(ye)， 以(yi)免(mian)漂洗液(ye)中(zhong)殘留(liu)乙醇抑制下遊(you)反應。

10.  取(qu)出(chu)吸附(fu)柱(zhu)AC，放(fang)入(ru)壹個(ge)幹(gan)凈的(de)離(li)心管中(zhong)，在(zai)吸附(fu)膜(mo)的(de)中(zhong)間(jian)部位(wei)加100μl洗脫(tuo)緩沖(chong)液(ye)EB （洗脫(tuo)緩沖(chong)液(ye)事先(xian)在65-70℃水浴(yu)中(zhong)預(yu)熱效(xiao)果(guo)更好(hao)）， 室溫(wen)放(fang)置(zhi)3-5分鐘(zhong)，12,000rpm 離(li)心1分鐘(zhong)。將(jiang)得(de)到(dao)的(de)溶(rong)液(ye)重(zhong)新加入(ru)離(li)心吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)2分鐘(zhong)，12,000rpm離(li)心1分鐘(zhong)。

洗脫(tuo)體積(ji)越大，洗脫(tuo)效率越高，如(ru)果(guo)需要(yao)DNA濃度(du)較(jiao)高(gao)，可以(yi)適當(dang)減(jian)少(shao)洗脫(tuo)體積(ji)， 但(dan)是(shi)最(zui)小(xiao)體(ti)積(ji)不應少(shao)於50μl，體(ti)積(ji)過(guo)小(xiao)降(jiang)低DNA洗脫(tuo)效率，減(jian)少(shao)DNA產量。

11.   DNA可以(yi)存(cun)放(fang)在2-8℃，如(ru)果(guo)要(yao)長時間存放(fang)，可以(yi)放(fang)置(zhi)在－20℃。