細胞發(fa)生(sheng)雕亡(wang)時，染(ran)色(se)質DNA在(zai)核(he)小(xiao)體(ti)之(zhi)間發(fa)生(sheng)斷裂，最終(zhong)形(xing)成(cheng)200bp整(zheng)數倍的DNA片段(duan)，這(zhe)些(xie)DNA片(pian)段(duan)被提取後，經(jing)電泳(yong)及溴化(hua)乙(yi)錠(ding)染(ran)色(se)後(hou)形(xing)成(cheng)梯(ti)子狀(zhuang)外觀，謂之(zhi)DNA Ladder。
雕亡(wang)DNA Ladder快(kuai)速(su)提取試劑盒 核(he)酸提取

諾(nuo)博萊(lai)德 雕(diao)亡(wang)DNA Ladder快(kuai)速(su)提取試劑盒 核(he)酸提取 

雕(diao)亡(wang)DNA Ladder快(kuai)速(su)提取試劑盒

目(mu)錄號：40116

適(shi)用範(fan)圍(wei)：

適(shi)用於快(kuai)速(su)提取雕亡(wang)DNA Ladder

試劑盒組成(cheng)、儲存(cun)、穩(wen)定性(xing)：

本(ben)試劑盒在室(shi)溫儲存(cun)12個月(yue)不影(ying)響使(shi)用效果。

儲存(cun)事項(xiang):

1.   裂(lie)解/結(jie)合(he)液(ye)CB低溫(wen)時可(ke)能(neng)出(chu)現析出(chu)和沈澱(dian)，可(ke)以在37℃水浴(yu)幾分鐘(zhong)幫(bang)助(zhu)重新(xin)溶解，恢(hui)復澄清(qing)透(tou)明(ming)後冷(leng)卻(que)到(dao)室(shi)溫(wen)即可(ke)使(shi)用(yong)。

2.   避免(mian)試劑長時間暴露於空氣中(zhong)產(chan)生(sheng)揮發(fa)、氧(yang)化、pH值變(bian)化，各(ge)溶液使(shi)用(yong)後應(ying)及(ji)時蓋緊蓋子。

具(ju)體(ti)產(chan)品(pin)的參(can)數以收(shou)到(dao)產品(pin)說明(ming)書(shu)的參(can)數為準(zhun)

產(chan)品(pin)介(jie)紹：

細(xi)胞發(fa)生(sheng)雕亡(wang)時，染(ran)色(se)質DNA在(zai)核(he)小(xiao)體(ti)之(zhi)間發(fa)生(sheng)斷裂，最終(zhong)形(xing)成(cheng)200bp整(zheng)數倍的DNA片段(duan)，這(zhe)些(xie)DNA片(pian)段(duan)被提取後，經(jing)電泳(yong)及溴化(hua)乙(yi)錠(ding)染(ran)色(se)後(hou)形(xing)成(cheng)梯(ti)子狀(zhuang)外觀，謂之(zhi)DNA Ladder。血(xue)液和組織(zhi)培養(yang)細(xi)胞(bao)在裂解(jie)/結(jie)合(he)液(ye)中(zhong)裂(lie)解後，釋放出(chu)來(lai)的DNA片段(duan)在高離(li)序鹽狀(zhuang)態(tai)下選擇(ze)性(xing)吸附(fu)於離(li)心(xin)柱(zhu)內(nei)矽基質膜(mo)，再通過(guo)壹系列快(kuai)速(su)的漂洗(xi)－離(li)心(xin)的步驟(zhou)，將(jiang)鹽、細胞(bao)代(dai)謝物、蛋白等雜質去(qu)除(chu)，最(zui)後(hou)低鹽的洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液將(jiang)DNA Ladder片段(duan)從矽基質膜(mo)上洗(xi)脫(tuo)。

產(chan)品(pin)特點(dian)：

1. 不需(xu)要(yao)使用有毒(du)的ben酚等試劑，也不需(xu)要(yao)乙醇沈澱(dian)等步驟(zhou)。

2.  本(ben)公司獨(du)you的裂解/結(jie)合(he)液(ye)配(pei)方有效裂(lie)解(jie)細胞，使用本(ben)試劑盒不需(xu)要(yao)加(jia)入昂(ang)貴的蛋白酶(mei)K處理(li)，大(da)大降(jiang)低了使用成(cheng)本(ben)和加(jia)快(kuai)了處理(li)速(su)度。

3.節省時間，簡(jian)捷，單(dan)個(ge)樣(yang)品(pin)操(cao)作壹般(ban)可(ke)在(zai)10分(fen)鐘(zhong)內(nei)完(wan)成(cheng)。

註(zhu)意(yi)事項(xiang)

1. 所(suo)有的離(li)心(xin)步(bu)驟(zhou)均(jun)在室(shi)溫(wen)完(wan)成(cheng)，使(shi)用轉(zhuan)速(su)可(ke)以達(da)到(dao)13,000rpm的傳(chuan)統臺式離(li)心(xin)機(ji)，如Eppendorf 5415C或者(zhe)類似離(li)心(xin)機(ji)。

2.  開(kai)始實(shi)驗(yan)前將(jiang)需(xu)要(yao)的水浴(yu)先預(yu)熱到(dao)70℃備用(yong)。

3.   裂(lie)解/結(jie)合(he)液(ye)CB含有刺激性(xing)化(hua)合(he)物，操(cao)作時要戴乳膠手套(tao)，避免(mian)沾染(ran)皮膚(fu)，眼(yan)睛(jing)和衣(yi)服。若(ruo)沾(zhan)染(ran)皮膚(fu)、眼(yan)睛(jing)時，要用大(da)量清(qing)水或者(zhe)生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗(xi)。

4.   壹(yi)般(ban)2×10⁶培養(yang)細(xi)胞(bao)DNA產量為10-20μg，200μl人(ren)全血(xue)典型(xing)產(chan)量(liang)為3-6μg。

5. 壹(yi)般(ban)電泳(yong)檢測時典型(xing)上(shang)樣(yang)量(liang)為2-3μg純化的DNA，如果雕亡(wang)率低，有可(ke)能(neng)只見(jian)到(dao)基因(yin)組DNA，而見(jian)不到(dao)DNA ladder，可(ke)以試試加(jia)大上(shang)樣(yang)量(liang)。

操(cao)作步驟(zhou)：（實驗(yan)前請(qing)先閱讀(du)註(zhu)意(yi)事項(xiang)）

提示：第壹次使(shi)用(yong)前請(qing)先在漂(piao)洗(xi)液(ye)WB中(zhong)加(jia)入指(zhi)din量(liang)無水乙醇(chun)，充(chong)分混(hun)勻(yun)，加(jia)入後(hou)請(qing)及時在方框(kuang)打鉤標(biao)記已(yi)加(jia)入乙(yi)醇(chun)，以免(mian)多次加(jia)入!

1.取(qu)2×10⁶個細胞（懸(xuan)浮細胞或者(zhe)組織(zhi)培養(yang)細(xi)胞(bao)重懸(xuan)在(zai)200μl PBS中(zhong)）或者(zhe)200μl全血(xue)（大約(yue)含有2×10⁶個(ge)細胞）加(jia)入200μl裂(lie)解(jie)/結(jie)合(he)液(ye)CB，立刻渦旋(xuan)振蕩充(chong)分混(hun)勻(yun)。

可(ke)選(xuan)做(zuo)步(bu)驟(zhou): 如果RNA殘留(liu)較(jiao)多，影響雕(diao)亡(wang)DNA ladder的觀察(cha)，可(ke)以在加(jia)入200μl裂(lie)解(jie)/結(jie)合(he)液(ye)CB 前加(jia)20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振蕩混(hun)勻(yun)，室溫(wen)放(fang)置(zhi)5-10分(fen)鐘(zhong)。

細(xi)胞或者(zhe)全血(xue)處理(li)起(qi)始量(liang)最大可(ke)達(da)300μl，如果起始量(liang)介(jie)於200μl-300μl之間，則(ze)需(xu)要(yao)按(an)比例(li)相應(ying)提高後面(mian)使用試劑量。

2.  室(shi)溫（15℃-20℃）放置(zhi)10分(fen)鐘(zhong)。

3.加(jia)入100μl異(yi)丙醇(chun)，立刻渦旋(xuan)振蕩充(chong)分混(hun)勻(yun)，此時可(ke)能(neng)會出(chu)現絮狀(zhuang)沈澱(dian)。

上(shang)述(shu)步驟(zhou)中(zhong)適(shi)當(dang)力度充(chong)分混(hun)勻(yun)非常重要(yao)，混(hun)勻(yun)不充(chong)分嚴(yan)重降(jiang)低產(chan)量(liang)。如果樣品(pin)粘(zhan)稠(chou)不易(yi)混(hun)勻(yun)，則可(ke)以渦旋(xuan)振蕩15秒。

4.  將(jiang)上壹(yi)步混(hun)合(he)物（包括可(ke)能(neng)有的沈澱(dian)）加(jia)入壹(yi)個(ge)吸附(fu)柱AC中(zhong)，（吸附(fu)柱放入(ru)收(shou)集(ji)管中(zhong)）13,000rpm離(li)心(xin)30秒(miao)，倒(dao)掉(diao)收(shou)集(ji)管中(zhong)的廢液(ye)。

5.   加(jia)入700μl漂(piao)洗(xi)液(ye)WB（請(qing)先檢查是(shi)否(fou)已(yi)加(jia)入無水乙醇(chun)!），12,000rpm離(li)心(xin)30秒(miao)，棄(qi)掉(diao)廢液(ye)。

6.   加(jia)入500μl漂(piao)洗(xi)液(ye)WB，12,000rpm離(li)心(xin)30秒(miao)，棄(qi)掉(diao)廢液(ye)。

7.   將(jiang)吸附(fu)柱AC放回空收(shou)集(ji)管中(zhong)，13,000rpm離(li)心(xin)2分(fen)鐘(zhong)，盡量除(chu)去(qu)漂(piao)洗(xi)液(ye)， 以免(mian)漂洗(xi)液(ye)中(zhong)殘(can)留(liu)乙醇(chun)影響洗(xi)脫(tuo)效率(lv)和下遊反(fan)應(ying)。

8.   取(qu)出(chu)吸附(fu)柱AC，放入(ru)壹個幹(gan)凈(jing)的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)吸附(fu)膜的中(zhong)間部位加(jia)100μl洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液EB（洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液事(shi)先(xian)在(zai)65-70℃水浴(yu)中(zhong)預(yu)熱），室(shi)溫放(fang)置(zhi)3-5分(fen)鐘(zhong)，12,000rpm離(li)心(xin)1分(fen)鐘(zhong)。將(jiang)得(de)到的溶液重新(xin)加(jia)入離(li)心(xin)吸附(fu)柱中(zhong)，室(shi)溫放置(zhi)2分(fen)鐘(zhong)，12,000rpm離(li)心(xin)1分(fen)鐘(zhong)。

洗(xi)脫(tuo)體(ti)積越(yue)大，洗(xi)脫(tuo)效率(lv)越(yue)高，如果需(xu)要(yao)DNA濃度較(jiao)高，可(ke)以適當(dang)減(jian)少(shao)洗(xi)脫(tuo)體(ti)積，但(dan)是(shi)最小(xiao)體(ti)積不應(ying)少(shao)於50μl，體(ti)積過(guo)小(xiao)降(jiang)低DNA洗(xi)脫(tuo)效率(lv)，減(jian)少(shao)DNA產(chan)量(liang)。

9.  DNA可(ke)以直(zhi)接(jie)使用(yong)或者(zhe)存(cun)放在(zai)－20℃，但(dan)是(shi)不要(yao)超過(guo)14天。

10.  取(qu)大約2-3μg純化的DNA電泳(yong)檢測（註(zhu)意(yi)200μl人全血(xue)典型(xing)產(chan)量(liang)只(zhi)有3­-6μg）。

問(wen)題與解決(jue)方法(fa):

 雕(diao)亡(wang)DNA Ladder快(kuai)速(su)提取試劑盒 核(he)酸提取