Pfu DNA Polymerase 是從(cong)克隆(long)有DNA Polymerase 基(ji)因的大腸桿菌(jun)中分離(li)純(chun)化(hua)的， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合(he)酶活性和(he)3′-5′外切酶活性，能(neng)糾正DNA擴(kuo)增(zeng)過程(cheng)中產(chan)生(sheng)的堿基錯配(pei)。Pfu酶是目前(qian)已發(fa)現的所有耐高(gao)溫DNA Polymerase中出錯率最(zui)di的。
Pfu DNA Polymerase（含超(chao)純dNTP）PCR相(xiang)關(guan)

諾博萊德 Pfu DNA Polymerase（含(han)超(chao)純dNTP）PCR相(xiang)關(guan)

Pfu DNA Polymerase (含超(chao)純 dNTP)

目錄(lu)號：:71013

產(chan)品(pin)內(nei)容

保存(cun)條(tiao)件(jian)

-20℃保存(cun)，有(you)效(xiao)期 2 年。

經常使(shi)用(yong)，可(ke)置於(yu) 4 °C 保(bao)存(cun)，有(you)效(xiao)期 3 個(ge)月。

具體產(chan)品(pin)的參數以(yi)收到產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)的參數為(wei)準(zhun)

產(chan)品(pin)簡介(jie)

Pfu DNA Polymerase 是從(cong)克隆(long)有DNA Polymerase 基(ji)因的大腸桿菌(jun)中分離(li)純(chun)化(hua)的， Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合(he)酶活性和(he)3′-5′外切酶活性，能(neng)糾正DNA擴(kuo)增(zeng)過程(cheng)中產(chan)生(sheng)的堿基錯配(pei)。Pfu酶是目前(qian)已發(fa)現的所有耐高(gao)溫DNA Polymerase中出錯率最(zui)di的。其PCR產(chan)物(wu)為(wei)平(ping)端(duan)，可(ke)直接用(yong)平(ping)端(duan)載體克隆(long)（Cat#V116、V117）。

活性單(dan)位:

1 單位（U）Pfu DNA Polymerase 活性定義(yi)為(wei)在 74℃、30 分鐘內(nei)，以(yi)活性化(hua)的大馬(ma)哈(ha)魚(yu)精子 DNA 作(zuo)為(wei)模板(ban)引物(wu)，將(jiang) 10 nmol 脫氧(yang)核(he)苷酸(suan)摻入(ru)到酸(suan)不(bu)溶(rong)物(wu)質所(suo)需(xu)的酶量。

質量控制:

SDS-PAGE 檢測純度(du)大(da)於(yu) 99%，經(jing)檢(jian)測無外(wai)源(yuan)核(he)酸酶活性；PCR 方法 檢測(ce)無宿主(zhu)殘余(yu) DNA，能(neng)有效(xiao)地(di)擴(kuo)增(zeng)人基(ji)因組(zu)中的單拷貝(bei)基因；室溫存(cun)放(fang)壹周(zhou)，無明(ming)顯活性改(gai)變。

酶貯存(cun)緩沖(chong)液(ye)：

50mM Tris-HCl(pH 8.2)，0.1mM EDTA，1mM DTT，Stabilizers，50% glycerol。

10×Pfu Buffer (含Mg2+)：

200 mM Tris-HCl (pH8.8)，100 mM KCl，100 mM(NH4)2 SO4，20 mM MgSO4，其他成分(fen)。

適(shi)用(yong)範圍(wei)：

用(yong)於DNA的高(gao)保真(zhen)擴增，如基因表(biao)達(da)克隆(long)、基因定點(dian)突(tu)變、細(xi)胞(bao)內(nei)基(ji)因點突變分(fen)析(xi)（SNP）和平(ping)末端(duan)補(bu)平(ping)等。

註意(yi)事項：

1. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所(suo)以(yi)Pfu酶擴增時(shi)延伸(shen)速度(du)比(bi)Taq酶低(di)，應(ying)根據擴(kuo)增(zeng)產(chan)物(wu)的長(chang)度(du)設(she)置(zhi)相(xiang)應的延伸時(shi)間，如果(guo)擴增(zeng)片(pian)段小於4 kb，建(jian)議(yi)Pfu酶的延伸速度(du)為(wei)1kb / min；如果(guo)擴增(zeng)片(pian)段大(da)於4 kb，建(jian)議(yi)延(yan)伸速度(du)為(wei)0.5kb / min。同時(shi)Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可(ke)能(neng)降解引(yin)物(wu)， 所以(yi)應先加dNTP後，再加Pfu酶到反(fan)應(ying)體(ti)系中，並立(li)即(ji)進行PCR反應。

2. 用(yong)Pfu酶擴增時(shi)，引物(wu)的純度(du)要(yao)求(qiu)較高(gao)，引物(wu)長(chang)度(du)大(da)於(yu)18個(ge)堿基(ji)，Tm在(zai)55－80℃ 之間，引物(wu)濃度(du)在(zai)0.1-0.5 μM之間，比Taq酶略高(gao)。

3. Pfu酶的熱(re)穩(wen)定性比(bi)Taq酶好，對於(yu)GC含(han)量很(hen)高(gao)的模板(ban)，變性溫度(du)可(ke)以(yi)提(ti)高(gao)到98℃，對Pfu酶的活性無影響(xiang)。

4. 高(gao)保真(zhen)PFU對於(yu)dNTP純(chun)度(du)要(yao)求(qiu)很(hen)高(gao)，因此建(jian)議(yi)用(yong)本酶配套的超(chao)純dNTPmix。

Pfu DNA Polymerase的使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)：

壹、配制 PCR 反(fan)應體(ti)系：(於冰上配(pei)制)

參考(kao)模板(ban)用(yong)量（50 μl 反(fan)應(ying)體(ti)系）：

質粒：0.1-10 ng；細(xi)菌(jun)基(ji)因組(zu)：10-100 ng；人類(lei)基(ji)因組(zu)：50-150 ng；cDNA：1-5 μl from RT。

二(er)、設置 PCR 循環條件(jian)：（請根據(ju)實際(ji)情況(kuang)適(shi)當調(tiao)整）

三、結果(guo)檢測(ce)：反應結束後取(qu) 5 µl 反應(ying)產(chan)物(wu)，瓊(qiong)脂糖凝膠(jiao)電(dian)泳檢(jian)測(ce)。

Pfu DNA Polymerase（含超(chao)純dNTP）PCR相(xiang)關(guan)