本產(chan)品(pin)包(bao)含(han)Pfu DNA聚(ju)合酶(mei)、dNTPs、MgCl2、反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)，濃(nong)度為2×。 保(bao)真度是Taq酶的(de)54倍(bei)，用(yong)於高保(bao)真PCR反應、復雜模(mo)板(ban)如(ru)GC含(han)量(liang)高(>60%)， 有(you)二(er)級(ji)結構(gou)等的(de)擴增和大規模(mo)的(de)基(ji)因(yin)檢(jian)測。
2×Pfu PCR Master Mix（含(han)染料(liao)）

諾博萊德 2×Pfu PCR Master Mix（含(han)染料(liao)）

2× PFU PCR Master Mix(含(han)染料(liao))

目錄(lu)號(hao)：71111

產(chan)品(pin)內(nei)容(rong)

保(bao)存(cun)條件(jian)

-20℃保(bao)存(cun)，有(you)效(xiao)期 2 年。經常使(shi)用(yong)，可(ke)置(zhi)於(yu) 4 °C 保(bao)存(cun)，有(you)效(xiao)期 3 個月。

具(ju)體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參(can)數(shu)以(yi)收(shou)到產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)的(de)參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)

產(chan)品(pin)簡(jian)介

本(ben)產(chan)品(pin)包(bao)含(han)Pfu DNA聚(ju)合酶(mei)、dNTPs、MgCl2、反(fan)應(ying)緩(huan)沖(chong)液(ye)，濃(nong)度為2×。 保(bao)真度是Taq酶的(de)54倍(bei)，用(yong)於高保(bao)真PCR反應、復雜模(mo)板(ban)如(ru)GC含(han)量(liang)高(>60%)， 有(you)二(er)級(ji)結構(gou)等的(de)擴增和大規模(mo)的(de)基(ji)因(yin)檢(jian)測。

PCR產(chan)物為(wei)平(ping)末(mo)端(duan)，純化後(hou)可(ke)直接用(yong)於Blunt載(zai)體(ti)克(ke)隆（Cat#V116、 V117）。

本(ben)產(chan)品(pin)含(han)紅色(se)示(shi)蹤(zong)染料(liao)，不(bu)需添(tian)加(jia)上樣緩(huan)沖(chong)液(ye)即(ji)可(ke)直接上樣進(jin)行(xing)電泳(yong)；也(ye)可(ke)經(jing)過(guo)純化處(chu)理，以(yi)用(yong)於酶(mei)切、連(lian)接、測序(xu)等後(hou)續操作(zuo)。

適(shi)用(yong)範圍：

高保(bao)真DNA擴增:如(ru)表達(da)基因的(de)克(ke)隆(long)、基(ji)因(yin)的(de)定(ding)點突變(bian)、細胞(bao)內(nei)基(ji)因(yin)點突變(bian)的(de)分析(SNP)和(he)末(mo)端補(bu)平(ping)。

基(ji)因檢(jian)測：適(shi)合大(da)規模(mo)基(ji)因檢(jian)測，半(ban)定(ding)量(liang)PCR實驗(yan)和微(wei)量DNA的(de)檢(jian)測。

產(chan)品(pin)特點

具(ju)有(you)快(kuai)速簡(jian)便(bian)、靈敏度高、特異(yi)性強、穩定(ding)性(xing)好等優(you)點，可(ke)最大(da)限(xian)度的(de)減少人為誤(wu)差(cha)。

2   × Pfu PCR Master Mix 使(shi)用(yong)說明：

壹(yi)、配(pei)制 PCR 反(fan)應體(ti)系(xi)：(於(yu)冰上(shang)配(pei)制)

參(can)考(kao)模(mo)板(ban)用(yong)量（50 μl 反(fan)應體(ti)系(xi)）：

質粒(li)：0.1-10 ng；細(xi)菌基(ji)因(yin)組：10-100 ng；人類基(ji)因(yin)組：50-150 ng；cDNA：1-5 μl 。

二(er)、建(jian)議 PCR 循環(huan)條(tiao)件(jian)：

註(zhu)意：如(ru)果(guo)擴增片(pian)段≤4 kb，建(jian)議延(yan)伸(shen)速度為 1kb / min；片(pian)段＞4 kb，建(jian)議 0.5kb / min。

註(zhu)意事(shi)項：

a. Pfu酶(mei)具有(you)3′-5′的(de)外(wai)切(qie)酶(mei)活(huo)性，所以(yi)Pfu酶(mei)擴增時延(yan)伸(shen)速度比Taq酶低，應根(gen)據(ju)擴增產(chan)物的(de)長(chang)度設置(zhi)相應(ying)的(de)延(yan)伸(shen)時間，如(ru)果(guo)擴增片(pian)段小於4 kb，建(jian)議Pfu酶的(de)延(yan)伸(shen)速度為1kb/ min；如(ru)果(guo)擴增片(pian)段大(da)於4 kb，建(jian)議延(yan)伸(shen)速度為0.5kb / min。同時Pfu酶的(de)3′-5′的(de)外(wai)切(qie)酶(mei)活(huo)性可(ke)能(neng)降(jiang)解(jie)引(yin)物， 所以(yi)應(ying)先加(jia)dNTP後，再(zai)加(jia)Pfu酶到反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)，並立(li)即(ji)進(jin)行(xing)PCR反應(ying)。

b. 用(yong)Pfu酶擴增時，引物的(de)純度要(yao)求(qiu)較(jiao)高，引(yin)物長(chang)度大於18個堿(jian)基，Tm在55－80℃ 之間，引物濃(nong)度在0.1-0.5 μM之間，比Taq酶略高。

c. Pfu酶(mei)的(de)熱(re)穩定(ding)性(xing)比Taq酶好，對於GC含(han)量(liang)很(hen)高的(de)模(mo)板(ban)，變(bian)性溫度可(ke)以(yi)提(ti)高到98℃，對Pfu酶(mei)的(de)活(huo)性無影響(xiang)。

三、結果(guo)檢(jian)測：反(fan)應結(jie)束後(hou)取 5 µl 反(fan)應產(chan)物，瓊(qiong)脂糖(tang)凝(ning)膠(jiao)電(dian)泳(yong)檢(jian)測。

2×Pfu PCR Master Mix（含(han)染料(liao)）