Script IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采(cai)用第(di)四代(dai)高(gao)達60℃的全新(xin)高(gao)溫逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)，可以通(tong)讀GC含(han)量(liang)豐(feng)富(fu)，二(er)級結構(gou)復雜的(de)RNA模(mo)板(ban)，極(ji)大提(ti)高(gao)了逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)效(xiao)率（CT值壹般提(ti)早2-3個循環(huan)）和長(chang)度(du)（可合(he)成(cheng)長(chang)達15 kb的cDNA以及高(gao)比(bi)例(li)的(de)全(quan)長(chang)cDNA）
1st Strand cDNA Synthesis Kit 反(fan)轉(zhuan)錄(lu)試(shi)劑

諾(nuo)博(bo)萊(lai)德(de) 1st Strand cDNA Synthesis Kit 反(fan)轉(zhuan)錄(lu)試(shi)劑

Script IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）（for PCR or qPCR）

目(mu)錄(lu)號：71414

產品內容(rong)

保存(cun)條(tiao)件(jian)

-20℃保存(cun)，有效期(qi) 12 個月(yue)。

具體產品的參(can)數以收到(dao)產品說明(ming)書(shu)的(de)參(can)數為(wei)準

產品簡(jian)介

Script IV 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采(cai)用第(di)四代(dai)高(gao)達60℃的全新(xin)高(gao)溫逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)，可以通(tong)讀GC含(han)量(liang)豐(feng)富(fu)，二(er)級結構(gou)復雜的(de)RNA模(mo)板(ban)，極(ji)大提(ti)高(gao)了逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)效(xiao)率（CT值壹般提(ti)早2-3個循環(huan)）和長(chang)度(du)（可合(he)成(cheng)長(chang)達15 kb的cDNA以及高(gao)比(bi)例(li)的(de)全(quan)長(chang)cDNA）；可用於PCR、qPCR等下遊實(shi)驗(yan)。

Oligo(dT)18 和Random primer (N6)是(shi)獨(du)立組分(fen)，可以自(zi)由選用，以獲(huo)得最(zui)合(he)適(shi)的(de)反(fan)轉(zhuan)錄(lu)結果(guo)！

本(ben)產品采(cai)用預混合技術和熱敏(min)性(xing)dsDNase，只(zhi)需(xu)壹步(bu)操作，15 min 即可同(tong)時完成基(ji)因(yin)組清(qing)除(chu)與逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)反(fan)應，極大簡(jian)化了操作步(bu)驟，避免(mian)了復雜加(jia)樣過程(cheng)造(zao)成(cheng)的(de)樣品汙染(ran)與RNA降解的風險(xian)。

引(yin)物(wu)的選(xuan)擇：

1. 如(ru)果(guo)RNA模板(ban)來(lai)源(yuan)於真(zhen)核生(sheng)物(wu)，首(shou)xuanOligo (dT)，與真(zhen)核生(sheng)物(wu)mRNA的 3’PolyA尾配(pei)對(dui)，可獲(huo)得最(zui)高(gao)產量(liang)的全(quan)長(chang)cDNA。

2. 如(ru)果(guo)對壹些物(wu)種，不(bu)能確定(ding)mRNA是(shi)否(fou)有polyA尾的(de)情(qing)況下(xia)，首(shou)xuanOligo(dT)，不成(cheng)功再(zai)嘗(chang)試基(ji)因(yin)特異(yi)性引物(wu)(GSP)和Random primer為(wei)引物(wu)。

3. 基(ji)因(yin)特異(yi)性引物(wu)(GSP)的特(te)異(yi)性較高(gao)。但(dan)有些情(qing)況(kuang)下，用於PCR反(fan)應的GSP無法(fa)有效引(yin)導(dao)第(di)壹鏈cDNA合(he)成，可改用Oligo (dT)或(huo)Randomprimer重(zhong)新(xin)進(jin)行逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)。

4. Random primer特(te)異(yi)性最(zui)di，所(suo)有RNA，包括mRNA，rRNA，tRNA均可以作為(wei)Random primer的模板(ban)。當目標(biao)區域具有復雜二(er)級結構(gou)或(huo)GC含(han)量(liang)較高(gao)，或(huo)者(zhe)模板為(wei)原核生(sheng)物(wu)來(lai)源(yuan)，使(shi)用Oligo (dT)或(huo)基(ji)因(yin)特異(yi)性引物(wu)(GSP)無法(fa)有效引(yin)導(dao)cDNA合成(cheng)時，可使(shi)用Random primer為(wei)引物(wu)。

5. 如(ru)果(guo)合成(cheng)cDNA下遊用於qPCR，可將(jiang)Oligo (dT)與Random primer混合使(shi)用（各加(jia)1μl /20μl反(fan)應體系(xi)），可使(shi)mRNA的各個區域cDNA合成(cheng)效(xiao)率相同(tong)，有助(zhu)於提(ti)高(gao)qPCR結果(guo)的(de)真(zhen)實(shi)性和重(zhong)復性(xing)。

第(di)壹連(lian) cDNA 合成(cheng) (以 20 μl 反(fan)應體系(xi)為(wei)例(li))

1．反(fan)應體系(xi)的(de)配制(zhi)

提(ti)示(shi)：操作前，請(qing)將各組分(fen)輕彈(dan)混勻，點(dian)甩(shuai)離心收集至(zhi)管底，置冰上(shang)備用。

於(yu)冰(bing)上(shang)，在 RNase-Free PCR 管中加(jia)入(ru)以下(xia)組分(fen)：

2．輕柔(rou)吸(xi)打(da)混勻，點(dian)甩(shuai)離心，置 PCR 儀進(jin)行(xing)逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)反(fan)應。

如(ru)用Oligo(dT)18或(huo)基(ji)因(yin)特異(yi)性引物(wu)(GSP)，產物(wu)用於PCR：50℃孵育30 min；產物(wu)用於qPCR：50℃孵育15 min。

如(ru)用 Random Primer,25℃孵育10 min 後，產物(wu)用於 PCR，50℃孵育30 min；25℃孵(fu)育 10 min 後，產物(wu)用於 qPCR，50℃孵育 15 min。

註(zhu)意(yi)：如果(guo)模板具有復雜二(er)級結構(gou)或(huo)高(gao) GC 區域，可以先(xian)只加(jia) RNA 模(mo)板、引物(wu)和 RNase free H2O，混勻，65℃變性(xing) 5 min，冰上(shang)冷(leng)卻(que)，點(dian)甩(shuai)離心後加(jia)入(ru)其它(ta)成(cheng)分(fen)，並(bing)將 50℃孵(fu)育溫度(du)提(ti)升至(zhi) 55-60°C，有助(zhu)於增(zeng)強(qiang)逆(ni)轉(zhuan)效(xiao)率。

3． 85°C加(jia)熱 5 sec，失(shi)活(huo)RTase和dsDNase，終(zhong)止(zhi)反(fan)應。

逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)產物(wu)可立(li)即用於PCR或(huo)qPCR反(fan)應，或(huo)保存(cun)於(yu)-20°C，並(bing)在半年內(nei)使(shi)用；長(chang)期(qi)存(cun)放建(jian)議分(fen)裝(zhuang)後在(zai)-70°C保存(cun)，cDNA應(ying)避免(mian)反(fan)復凍融(rong)。

PCR

建(jian)議(yi)取2 - 4 μl的(de)cDNA產物(wu)原液(ye)作為(wei)PCR模板。

1. 常規(gui)擴增(zeng)：71019-2x Taq PCR MasterMix (30sec/kb)

71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)

2. 高(gao)保真(zhen)擴(kuo)增(zeng)：71812-2x FastHiFi PCR MasterMix (≤3kb片(pian)段(duan))

71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb片(pian)段(duan))

qPCR

建(jian)議(yi)取1~2μl cDNA產物(wu)原液(ye)作為(wei)20μl qPCR反(fan)應體系(xi)的(de)模板(ban)。如果基因(yin)表(biao)

達量(liang)較高(gao)，請(qing)根(gen)據(ju)實際(ji)情(qing)況(kuang)適(shi)當稀釋(shi)cDNA模(mo)板後使(shi)用。

相(xiang)關產品：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同(tong)TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用於所(suo)有qPCR儀)

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

91013 通(tong)用型總RNA快(kuai)速(su)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒（動(dong)物(wu)、植物(wu)、細菌(jun)、真(zhen)菌(jun)、酵母）

91218 動(dong)物(wu)組織/細胞(bao)/昆蟲(chong)總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒 (同(tong)RNeasy Plus Mini Kit)

91318 多(duo)糖(tang)多酚(fen)植物(wu)總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒（RNeasy Plant Mini Kit的升級版(ban))

91451 高(gao)效(xiao)動(dong)物(wu)組織/細胞(bao)總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒 (動(dong)物(wu)組織、細胞(bao))

91452 高(gao)效(xiao)植物(wu)總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒（根(gen)、莖、葉、花(hua)）

1st Strand cDNA Synthesis Kit 反(fan)轉(zhuan)錄(lu)試(shi)劑