Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三(san)代高(gao)效(xiao)逆(ni)轉錄酶，具有(you)更(geng)強的(de)延伸能力和穩(wen)定(ding)性(xing)，並配備(bei)了具有(you)DNA分(fen)解活性(xing)的(de)特殊(shu)dsDNase，只需(xu)壹步操(cao)作， 即可(ke)同(tong)時(shi)完(wan)成(cheng)基(ji)因組(zu)清除與逆轉錄反(fan)應(ying)，操(cao)作方便快捷
III 1st Strand cDNA Synthesis Kit 反(fan)轉錄(lu)

諾博(bo)萊德(de) III 1st Strand cDNA Synthesis Kit 反(fan)轉錄(lu)

Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）（for PCR or qPCR）

目(mu)錄(lu)號(hao)：71118

產品內容

保(bao)存(cun)條件(jian)：-20℃保(bao)存(cun)，有(you)效(xiao)期 12 個月(yue)。

具體產品的(de)參(can)數以(yi)收到(dao)產品說明書的(de)參(can)數為(wei)準

產品簡介(jie)

Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采(cai)用第三(san)代高(gao)效(xiao)逆(ni)轉錄酶，具有(you)更(geng)強的(de)延伸能力和穩(wen)定(ding)性(xing)，並配備(bei)了具有(you)DNA分(fen)解活性(xing)的(de)特殊(shu)dsDNase，只需(xu)壹步操(cao)作， 即可(ke)同(tong)時(shi)完(wan)成(cheng)基(ji)因組(zu)清除與逆轉錄反(fan)應(ying)，操(cao)作方便快捷，可(ke)用於(yu)長達(da)12kb的(de)cDNA合成(cheng)以及(ji)高(gao)比(bi)例(li)的(de)全(quan)長cDNA文(wen)庫的(de)構建等。逆(ni)轉錄(lu)產物可(ke)以用於(yu)PCR，克隆基(ji)因；也(ye)可(ke)以用於(yu)qPCR，兼容染料法(fa)和探(tan)針法，用來(lai)檢測高拷(kao)貝(bei)或(huo)低(di)拷(kao)貝(bei)基(ji)因。

Oligo(dT)18 和(he)Random primer (N6)是(shi)獨立組(zu)分(fen)，可(ke)以自(zi)由選(xuan)用，以(yi)獲(huo)得(de)優良(liang)的(de)逆轉錄(lu)結(jie)果(guo)！

引(yin)物的(de)選(xuan)擇：

1. 如(ru)果(guo)RNA模板(ban)來(lai)源(yuan)於(yu)真(zhen)核生(sheng)物，首(shou)xuanOligo (dT)，與真核生(sheng)物mRNA的(de)3’PolyA尾配對(dui)，可(ke)獲(huo)得(de)最(zui)高(gao)產量的(de)全(quan)長cDNA。

2. 如(ru)果(guo)對壹些物種，不能確定(ding)mRNA是(shi)否有(you)polyA尾(wei)的(de)情況(kuang)下，首(shou)suanOligo(dT)，不成(cheng)功再(zai)嘗試(shi)基(ji)因特(te)異(yi)性(xing)引(yin)物(GSP)和Random primer為引(yin)物。

3. 基(ji)因特(te)異(yi)性(xing)引(yin)物(GSP)的(de)特異性(xing)較高(gao)。但有(you)些(xie)情況(kuang)下，用於(yu)PCR反(fan)應(ying)的(de)GSP無法(fa)有(you)效(xiao)引(yin)導第壹鏈cDNA合成(cheng)，可(ke)改用Oligo (dT)或(huo)Randomprimer重(zhong)新(xin)進(jin)行(xing)逆(ni)轉錄。

4. Random primer特(te)異(yi)性(xing)最(zui)di，所(suo)有(you)RNA，包(bao)括(kuo)mRNA，rRNA，tRNA均可(ke)以作(zuo)為Random primer的(de)模板(ban)。當目(mu)標(biao)區(qu)域具有(you)復(fu)雜(za)二(er)級(ji)結構或(huo)GC含(han)量較高(gao)，或(huo)者模板(ban)為(wei)原核生(sheng)物來源(yuan)，使(shi)用Oligo (dT)或(huo)基(ji)因特(te)異(yi)性(xing)引(yin)物(GSP)無法(fa)有(you)效(xiao)引(yin)導cDNA合成(cheng)時，可(ke)使用Random primer為(wei)引(yin)物。

5. 如(ru)果(guo)合成(cheng)cDNA下遊(you)用於(yu)qPCR，可(ke)將Oligo (dT)與Random primer混合使(shi)用（各(ge)加1μl /20μl反(fan)應(ying)體系(xi)），可(ke)使mRNA的(de)各(ge)個區(qu)域cDNA合成(cheng)效率相(xiang)同(tong)，有(you)助(zhu)於(yu)提高qPCR結果(guo)的(de)真實性(xing)和重(zhong)復(fu)性(xing)。

第壹連(lian) cDNA 合成(cheng) (以(yi) 20 μl 反(fan)應(ying)體系(xi)為例(li))

1．  反(fan)應(ying)體系(xi)的(de)配制

操(cao)作前，請(qing)將各(ge)組(zu)分(fen)輕彈混(hun)勻(yun)，點(dian)甩離(li)心(xin)收集至(zhi)管(guan)底，置冰上(shang)備(bei)用。

使(shi)用 RNase-Free PCR 管(guan)在冰上(shang)配(pei)制(zhi)：

2．輕柔(rou)吸(xi)打混勻(yun)，點(dian)甩離(li)心(xin)，置 PCR 儀(yi)進行(xing)逆(ni)轉錄反(fan)應(ying)。

如(ru)用Oligo(dT)18或(huo)基(ji)因特(te)異(yi)性(xing)引(yin)物(GSP)，產物用於(yu)PCR：42℃孵(fu)育30 min；產物用於(yu)qPCR：42℃孵(fu)育15 min。

如(ru)用 Random Primer,25℃孵(fu)育10 min 後(hou)，產物用於(yu) PCR，42℃孵(fu)育30 min；25℃孵(fu)育 10 min 後(hou)，產物用於(yu) qPCR，42℃孵(fu)育 15 min。

註(zhu)意(yi)：如(ru)果(guo)模板(ban)具有(you)復(fu)雜(za)二(er)級(ji)結構或(huo)高(gao) GC 區(qu)域，可(ke)以先(xian)只加(jia) RNA 模板(ban)、 引(yin)物和 RNase free H2O，混勻(yun)，65℃變性(xing) 5 min，冰上(shang)冷卻(que)，點(dian)甩離(li)心(xin)後加(jia)入(ru)其(qi)它成(cheng)分(fen)，並將 42℃孵(fu)育溫(wen)度提(ti)升(sheng)至(zhi) 50°C，有(you)助(zhu)於(yu)提高產量。

3． 85°C加(jia)熱 5 sec，失(shi)活(huo)RTase和dsDNase，終止反(fan)應(ying)。

逆(ni)轉(zhuan)錄產物可(ke)立即(ji)用於(yu)PCR或(huo)qPCR反(fan)應(ying)，或(huo)保(bao)存(cun)於-20°C，並在半年(nian)內使用；長(chang)期存(cun)放建議分(fen)裝(zhuang)後在-70°C保(bao)存(cun)，cDNA應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)。

PCR

建議取(qu)2 - 4 μl的(de)cDNA產物原液作(zuo)為(wei)PCR模板(ban)。

1. 常(chang)規(gui)擴增(zeng)：71019-2x Taq PCR MasterMix (30sec/kb)

71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)

2. 高(gao)保(bao)真擴(kuo)增(zeng)：71812-2x FastHiFi PCR MasterMix (≤3kb片(pian)段)

71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb片(pian)段)

qPCR

建議取(qu)1~2μl cDNA產物原液作(zuo)為(wei)20μl qPCR反(fan)應(ying)體系(xi)的(de)模板(ban)。如(ru)果(guo)基(ji)因表(biao)達(da)量較高(gao)，請(qing)根據(ju)實際(ji)情況(kuang)適當稀釋(shi)cDNA模板(ban)後(hou)使用。

相(xiang)關(guan)產品：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同(tong)TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用於(yu)所(suo)有(you)qPCR儀(yi))

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

91013 通(tong)用型總(zong)RNA快速(su)提(ti)取試(shi)劑(ji)盒(he)（動物、植物、細菌(jun)、真(zhen)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)）

91218 動物組(zu)織/細(xi)胞/昆(kun)蟲(chong)總(zong)RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) (同(tong)RNeasy Plus Mini Kit)

91318 多糖(tang)多酚(fen)植物總(zong)RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he)（RNeasy Plant Mini Kit的(de)升級(ji)版)

91451 高(gao)效(xiao)動物組(zu)織/細(xi)胞總(zong)RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) (動物組(zu)織、細(xi)胞)

91452 高(gao)效(xiao)植物總(zong)RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he)（根、莖、葉(ye)、花(hua)）

III 1st Strand cDNA Synthesis Kit 反(fan)轉錄(lu)