Script III All-in-one RT Mix With dsDNase是(shi)Script III RT Kit WithgDNA Eraser的(de)升級版，只(zhi)需壹步操作， 僅需15分(fen)鐘(zhong)就(jiu)可(ke)以同(tong)時完成(cheng)基(ji)因(yin)組清除與(yu)逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)，操(cao)作方便快捷，逆轉(zhuan)錄(lu)產(chan)物(wu)兼容染(ran)料法和(he)探(tan)針(zhen)法qPCR，用於檢(jian)測(ce)高拷(kao)貝或(huo)低(di)拷(kao)貝基(ji)因(yin)。
III All-in-one RT Mix with dsDNase反轉(zhuan)錄(lu)

諾(nuo)博萊德 III All-in-one RT Mix with dsDNase反轉(zhuan)錄(lu)

Script III All-in-one RT Mix With dsDNase（Perfect for qPCR）

目(mu)錄(lu)號:71710

產(chan)品內(nei)容

保(bao)存(cun)條件

-20℃保(bao)存(cun)，有(you)效期(qi) 12 個(ge)月(yue)。

具體(ti)產(chan)品的參數(shu)以(yi)收到(dao)產(chan)品說明書的(de)參數(shu)為(wei)準

產(chan)品簡介

Script III All-in-one RT Mix With dsDNase是(shi)Script III RT Kit WithgDNA Eraser的(de)升級版，只(zhi)需壹步操作， 僅需15分(fen)鐘(zhong)就(jiu)可(ke)以同(tong)時完成(cheng)基(ji)因(yin)組清除與(yu)逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)，操(cao)作方便快捷，逆轉(zhuan)錄(lu)產(chan)物(wu)兼容染(ran)料法和(he)探(tan)針(zhen)法qPCR，用於檢(jian)測(ce)高拷(kao)貝或(huo)低(di)拷(kao)貝基(ji)因(yin)。

本(ben)品采用第(di)三(san)代(dai)高(gao)效逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)和(he)熱敏型dsDNase，針(zhen)對(dui)qPCR進行(xing)特別優化(hua)oligo dT和(he)N6隨機(ji)引(yin)物配(pei)比，使cDNA合(he)成(cheng)可(ke)從RNA轉(zhuan)錄(lu)本(ben)的(de)各(ge)個(ge)區域(yu)起始並(bing)具有(you)相(xiang)同的(de)逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)效lv，最da程度(du)保(bao)證了qPCR結(jie)果(guo)的(de)真(zhen)實(shi)性和(he)可(ke)重復(fu)性。

其中(zhong)5 x All-in-one RT Mix為(wei)壹管式逆轉(zhuan)錄(lu)預混液(ye)，含(han)有(you)逆轉(zhuan)錄(lu)所需(xu)的(de)所有(you)試劑(ji)（Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、OligodT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer）。

註意(yi)事(shi)項

1． 避(bi)免(mian) RNase 汙(wu)染(ran)。

2． 為(wei)保(bao)證逆轉(zhuan)錄(lu)成(cheng)功(gong)，建(jian)議(yi)使用高質(zhi)量(liang)的(de) RNA 樣(yang)品。

3． 20μl 逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)體(ti)系建(jian)議(yi)加入(ru)不超過 1μg 的(de) Total RNA。如果(guo)目(mu)的(de)基(ji)因(yin)的表(biao)達(da)量(liang)非(fei)常(chang)低，最多(duo)加入(ru) 5μg Total RNA，否則(ze)，RNA 量(liang)過(guo)高(gao)，可(ke)能會(hui)超出(chu)後(hou)續(xu) qPCR 的線(xian)性範(fan)圍

4． 本(ben)產(chan)品適用於包(bao)含(han) Ploy (A)結(jie)構的真核生(sheng)物(wu) mRNA 和(he)不包(bao)含(han) Ploy (A)結(jie)構的原核生(sheng)物(wu)RNA、真核生(sheng)物(wu)rRNA和(he)tRNA等(deng)模(mo)板(ban)，但(dan)不適(shi)用於miRNA等(deng)小(xiao) RNA 模(mo)板(ban)。

5． 5x All-in-one RT Mix 和(he) dsDNase 含(han)有(you)高濃(nong)度(du)甘(gan)油(you)，比較粘(zhan)稠，容易吸附(fu)在(zai)管(guan)壁(bi)和(he)吸(xi)頭外，導(dao)致(zhi)損失(shi)，用前請(qing)點甩離(li)心(xin)後(hou)取用。5x All-in-oneRT Mix 和(he) dsDNase 內(nei)包(bao)含(han)的(de)酶(mei)過量(liang)，即(ji)使每(mei)次分(fen)別(bie)按照(zhao) 3.8 μl、0.9 μl使用，也不影(ying)響(xiang)使用效果(guo)。

6． 建(jian)議(yi)使用 0.2ml RNase-free PCR 管在(zai)冰上(shang)配(pei)制反應(ying)液(ye)，並(bing)用 PCR 擴增(zeng)儀(yi)精準控溫。

第(di)壹連 cDNA 合成(cheng) (以(yi) 20 μl 反應(ying)體(ti)系為例)

重(zhong)要(yao)提(ti)示：操(cao)作前，請(qing)將各(ge)組分(fen)輕(qing)彈(dan)混勻(yun)，點甩離(li)心(xin)後(hou)置(zhi)冰上(shang)備用。

1． 反應(ying)體(ti)系的配(pei)制

於冰(bing)上(shang)，在PCR管(guan)中，加入(ru)以(yi)下組分(fen)：

用移液器(qi)輕輕(qing)吸打(da)，充分(fen)混勻(yun)，點甩離(li)心(xin)收(shou)集至管(guan)底(di)。

2． 逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)

① mRNA模(mo)板(ban)來源於真(zhen)核(he)細胞(植物、動(dong)物(wu))，含有(you)Poly(A)尾結(jie)構：42℃孵(fu)育(yu)15min；

② mRNA模(mo)板(ban)來源於原核細胞(細菌)、病(bing)毒(du)，不含(han)Poly(A)尾結(jie)構：25℃孵(fu)育(yu)10min；42℃孵(fu)育(yu)15 min。

註意(yi)：如果(guo)模(mo)板(ban)具有(you)復雜(za)二級結(jie)構或高GC區域(yu)，設置(zhi)反應(ying)程(cheng)序：

42°C孵(fu)育(yu)2 min（去除gDNA），50°C孵(fu)育(yu)15 min (逆(ni)轉(zhuan)錄(lu))，有(you)助於提(ti)高產(chan)量(liang)。

3． 終(zhong)止反應(ying)

85°C加熱5 sec，失活(huo)RTase和(he)gDNA Eraser。

逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)產(chan)物(wu)可(ke)立即(ji)用於qPCR反應(ying)，或(huo)保存(cun)於-20°C，並(bing)在(zai)半年內(nei)使用；長期(qi)存(cun)放(fang)，請(qing)分(fen)裝(zhuang)後(hou)存(cun)於-70°C。

qPCR

建(jian)議(yi)取1~2μl cDNA產(chan)物(wu)原液作為20μl qPCR反應(ying)體(ti)系的模(mo)板(ban)。如果(guo)基(ji)因(yin)表(biao)達(da)量(liang)比較高(gao)，請(qing)根(gen)據(ju)實(shi)際(ji)情(qing)況(kuang)適(shi)當(dang)稀(xi)釋(shi)cDNA模板(ban)後(hou)使用。

相(xiang)關(guan)產(chan)品：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同(tong)TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用於所有(you)qPCR儀(yi))

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

91013 通(tong)用型總RNA快速(su)提(ti)取試劑(ji)盒(he)（動物(wu)、植物、細菌、真菌(jun)、酵母(mu)）

91218 動(dong)物(wu)組織/細胞/昆蟲(chong)總RNA提(ti)取試劑(ji)盒(he) (同RNeasy Plus Mini Kit)

91318 多(duo)糖多(duo)酚植物總RNA提(ti)取試劑(ji)盒(he)（RNeasy Plant Mini Kit的升級版)

91451 高(gao)效動(dong)物組織/細胞總RNA提(ti)取試劑(ji)盒(he) (動物(wu)組織、細胞)

R452 高(gao)效植物總RNA提(ti)取試劑(ji)盒(he)（根(gen)、莖(jing)、葉、花）

III All-in-one RT Mix with dsDNase反轉(zhuan)錄(lu)