Script III RT Kit With gDNA Eraser是(shi)壹(yi)種高(gao)效、穩(wen)定、快(kuai)速並(bing)可(ke)以去(qu)除基(ji)因組DNA汙(wu)染(ran)的(de)反轉(zhuan)錄(lu)系統。本產(chan)品(pin)具(ju)有(you)強(qiang)大(da)的基(ji)因組清(qing)除能力(li)，碰(peng)到基(ji)因組殘(can)留較多(duo)的(de)RNA樣本時(shi)，這(zhe)款逆轉(zhuan)錄(lu)試(shi)劑(ji)盒是(shi)最(zui)you選(xuan)擇。只需(xu)兩步(bu)操作，17分(fen)鐘就可(ke)以完(wan)成(cheng)基(ji)因組清(qing)除和逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)，操作方(fang)便(bian)快捷(jie)
Script III RT Kit With gDNA Eraser反轉(zhuan)錄(lu)

諾博(bo)萊德(de) Script III RT Kit With gDNA Eraser反轉(zhuan)錄(lu)

Script III RT Kit With gDNA Eraser（Perfect for qPCR）

目(mu)錄(lu)號:71514

產(chan)品(pin)內(nei)容(rong)

保存(cun)條件

-20℃保存(cun)，有(you)效期(qi) 12 個月。

具體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參數以收(shou)到產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)的(de)參(can)數為準(zhun)

產(chan)品(pin)簡(jian)介(jie)

Script III RT Kit With gDNA Eraser是(shi)壹(yi)種高(gao)效、穩(wen)定、快(kuai)速並(bing)可(ke)以去(qu)除基(ji)因組DNA汙(wu)染(ran)的(de)反轉(zhuan)錄(lu)系統。本產(chan)品(pin)具(ju)有(you)強(qiang)大(da)的基(ji)因組清(qing)除能力(li)，碰(peng)到基(ji)因組殘(can)留較多(duo)的(de)RNA樣本時(shi)，這(zhe)款逆轉(zhuan)錄(lu)試(shi)劑(ji)盒是(shi)最(zui)you選(xuan)擇。只需(xu)兩步(bu)操作，17分(fen)鐘就可(ke)以完(wan)成(cheng)基(ji)因組清(qing)除和逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)，操作方(fang)便(bian)快捷(jie)，逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)產(chan)物(wu)兼(jian)容(rong)染(ran)料(liao)法(fa)和探(tan)針(zhen)法(fa)qPCR，用(yong)於檢(jian)測高(gao)拷貝或(huo)低拷貝基(ji)因。

本品(pin)采(cai)用第(di)三代(dai)高(gao)效逆轉(zhuan)錄(lu)酶和熱敏型(xing)dsDNase，針(zhen)對(dui)qPCR進行特別優(you)化oligo dT和N6隨(sui)機引物(wu)配(pei)比(bi)，使(shi)cDNA合成(cheng)可(ke)從(cong)RNA轉(zhuan)錄(lu)本的各(ge)個區域起始(shi)並(bing)具(ju)有(you)相同(tong)的逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)效lv，最da程度保(bao)證了qPCR結(jie)果(guo)的(de)真實性(xing)和可(ke)重(zhong)復(fu)性(xing)。

其(qi)中5x RT MasterMix為壹管式逆轉(zhuan)錄(lu)預(yu)混液(ye)，含(han)有(you)逆轉(zhuan)錄(lu)所需(xu)的所(suo)有(you)試(shi)劑(ji)（Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer）。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

1． 本產(chan)品(pin)適(shi)用於包(bao)含 Ploy (A)結(jie)構(gou)的(de)真核生(sheng)物(wu) mRNA 和(he)不(bu)包含(han) Ploy (A)結(jie)構(gou)的(de)原(yuan)核生物(wu)RNA、真核生(sheng)物(wu)rRNA和(he)tRNA等(deng)模(mo)板(ban)，但(dan)不(bu)適(shi)用(yong)於miRNA等(deng)小 RNA 模(mo)板(ban)。

2． 避(bi)免(mian) RNase 汙(wu)染(ran)。

3． 為保證反轉(zhuan)錄(lu)成功，建(jian)議使(shi)用高(gao)質量(liang)的 RNA 樣品(pin)。

4． 20μl 逆轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)體(ti)系建(jian)議加(jia)入不超(chao)過 1μg 的(de) Total RNA。如果(guo)目(mu)的(de)基(ji)因的表(biao)達(da)量非(fei)常(chang)低，最多(duo)加(jia)入 5μg Total RNA，否則(ze)，RNA 量過(guo)高(gao)，可(ke)能(neng)會超(chao)出後續(xu) qPCR 的線(xian)性(xing)範(fan)圍(wei)

5． 建(jian)議使(shi)用 0.2ml RNase-free PCR 管在(zai)冰(bing)上(shang)配(pei)制反應(ying)液(ye)，並(bing)用(yong) PCR 擴(kuo)增儀(yi)精準(zhun)控(kong)溫(wen)。

6． 5x RT MasterMix 和 4x gDNA Eraser Mix 含(han)有(you)高(gao)濃(nong)度(du)甘(gan)油，比(bi)較粘(zhan)稠，容(rong)易(yi)吸(xi)附在(zai)管壁(bi)和吸(xi)頭外(wai)，導(dao)致(zhi)損失，用(yong)前(qian)請點甩(shuai)離(li)心後(hou)取(qu)用。5x RT MasterMix 和(he) 4x gDNA Eraser Mix 內(nei)包(bao)含的(de)酶(mei)過(guo)量(liang)，即(ji)使(shi)每次分別按(an)照(zhao) 3.8 μl、0.9 μl 使(shi)用，也(ye)不影響使(shi)用效(xiao)果。

第(di)壹連 cDNA 合(he)成(cheng) (以 20 μl 反應(ying)體(ti)系為例)

重要(yao)提(ti)示(shi)：操作前(qian)，請(qing)將(jiang)各(ge)組分輕(qing)彈(dan)混勻(yun)，點甩(shuai)離(li)心後(hou)置(zhi)冰(bing)上(shang)備(bei)用。

1． 去除基(ji)因組DNA

於冰(bing)上(shang)，在(zai)PCR管中，加(jia)入以下(xia)組分：

用移液(ye)器(qi)輕(qing)輕(qing)吸(xi)打(da)混勻(yun)，42°C 孵育 2 min，以去(qu)除基(ji)因組 DNA 汙(wu)染(ran)。

2． 逆轉(zhuan)錄(lu)反應(ying)

把步驟(zhou)1的(de)反應(ying)管放在(zai)冰(bing)上(shang)，加(jia)入4 μl 5x RT MasterMix，輕(qing)柔(rou)吸(xi)打(da)混勻(yun)瞬離(li)，設置(zhi)反應(ying)程序：

① mRNA模(mo)板(ban)來源(yuan)於真核細胞(bao)(植物(wu)、動物(wu))，含有(you)Poly(A)尾(wei)結(jie)構(gou)：42℃孵(fu)育15min；

② mRNA模(mo)板(ban)來源(yuan)於原(yuan)核細胞(bao)(細菌(jun))、病(bing)毒(du)，不含(han)Poly(A)尾(wei)結(jie)構(gou)：25℃孵(fu)育10min；42℃孵育15 min。

註(zhu)意(yi)：如(ru)果模(mo)板(ban)具(ju)有(you)復(fu)雜(za)二(er)級(ji)結(jie)構(gou)或(huo)高(gao)GC區域，把42°C的孵(fu)育溫(wen)度(du)提(ti)升至(zhi)50°C，有(you)助(zhu)於提(ti)高(gao)產(chan)量。

3． 終止(zhi)反應(ying)

85°C加熱5 sec，失(shi)活RTase和gDNA Eraser。

逆轉(zhuan)錄(lu)產(chan)物(wu)可(ke)立(li)即(ji)用於qPCR反應(ying)，或保(bao)存(cun)於-20°C，並(bing)在(zai)半(ban)年(nian)內(nei)使(shi)用；長期(qi)存放，請分裝(zhuang)後存於-70°C。

qPCR

建(jian)議取(qu)1~2μl cDNA產(chan)物(wu)原(yuan)液(ye)作為20μl qPCR反應(ying)體(ti)系的(de)模(mo)板(ban)。如(ru)果(guo)基(ji)因表(biao)達(da)量比(bi)較高(gao)，請根(gen)據(ju)實際(ji)情(qing)況(kuang)適當(dang)稀(xi)釋cDNA模(mo)板(ban)後(hou)使(shi)用。

相關產(chan)品(pin)：

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

91013 通用型(xing)總RNA快(kuai)速提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（動物(wu)、植物(wu)、細菌(jun)、真菌、酵(jiao)母）

91218 動物(wu)組織/細胞(bao)/昆(kun)蟲總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒 (同(tong)RNeasy Plus Mini Kit)

91318 多(duo)糖多(duo)酚(fen)植物(wu)總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（RNeasy Plant Mini Kit的升級(ji)版)

91451 高(gao)效動物(wu)組織/細胞(bao)總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒 (動物(wu)組織、細胞(bao))

91452 高(gao)效植物(wu)總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（根(gen)、莖、葉(ye)、花）

Script III RT Kit With gDNA Eraser反轉(zhuan)錄(lu)