Script III RT MasterMix為壹管(guan)式(shi)逆轉(zhuan)錄預(yu)混(hun)液(ye)，含(han)有(you)逆轉(zhuan)錄所需的所有試(shi)劑
只需加(jia)入RNA模(mo)板和(he)RNase-Free H2O，15分(fen)鐘即可完成(cheng)逆轉(zhuan)錄反(fan)應。 操(cao)作(zuo)方(fang)便(bian)快(kuai)捷(jie)，逆轉(zhuan)錄產物(wu)兼(jian)容(rong)染(ran)料(liao)法(fa)和(he)探(tan)針(zhen)法qPCR，用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)高拷(kao)貝(bei)或者低(di)拷貝(bei)基(ji)因
Script III RT MasterMix 反轉(zhuan)錄試(shi)劑

諾(nuo)博萊德 Script III RT MasterMix 反(fan)轉(zhuan)錄試(shi)劑

Script III RT MasterMix( Perfect for qPCR ) 

目(mu)錄號(hao):71518

產品(pin)內(nei)容(rong)

保(bao)存(cun)條件(jian)

-20℃保(bao)存(cun)，有效(xiao)期 12 個月。

具(ju)體(ti)產品(pin)的(de)參(can)數(shu)以收(shou)到產品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)參(can)數為準

產品(pin)簡(jian)介(jie)

Script III RT MasterMix為(wei)壹管(guan)式(shi)逆轉(zhuan)錄預(yu)混(hun)液(ye)，含(han)有(you)逆轉(zhuan)錄所需的所有試(shi)劑：Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、OligodT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer。

只需加(jia)入RNA模(mo)板和(he)RNase-Free H2O，15分(fen)鐘即可完成(cheng)逆轉(zhuan)錄反(fan)應。 操(cao)作(zuo)方(fang)便(bian)快(kuai)捷(jie)，逆轉(zhuan)錄產物(wu)兼(jian)容(rong)染(ran)料(liao)法(fa)和(he)探(tan)針(zhen)法qPCR，用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)高拷(kao)貝(bei)或者低(di)拷貝(bei)基(ji)因。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

1． 避(bi)免RNase汙(wu)染(ran)。

2． 為(wei)保(bao)證反(fan)轉(zhuan)錄成(cheng)功，建議(yi)使用(yong)高質量的(de)RNA樣(yang)品(pin)。

3． 5x RT MasterMix含(han)有甘油比較(jiao)粘稠(chou)，容(rong)易(yi)吸(xi)附(fu)在(zai)管(guan)壁和(he)吸(xi)頭(tou)外(wai)，導(dao)致(zhi)損失(shi)，使用前(qian)請點(dian)甩(shuai)離(li)心(xin)後(hou)取用(yong)。5x RT MasterMix包(bao)含的(de)酶(mei)過(guo)量(liang)，即(ji)使(shi)每次(ci)分(fen)別(bie)按(an)照(zhao)3.8 μl使用(yong)，也不(bu)影(ying)響使(shi)用效果。

4． 20 μl逆轉(zhuan)錄反(fan)應體(ti)系建議(yi)加入不(bu)超過1μg的Total RNA。如(ru)果目(mu)的基(ji)因的表達(da)量非(fei)常(chang)低，最(zui)多加入5 μg Total RNA，否(fou)則(ze)，RNA量(liang)過(guo)高，可(ke)能(neng)會(hui)超出後(hou)續(xu)qPCR的(de)線性(xing)範圍(wei)。

5． 本(ben)產品(pin)適(shi)用(yong)於(yu)包(bao)含Ploy (A)結構的真核(he)生物(wu)mRNA和(he)不(bu)包(bao)含Ploy (A)結構的原(yuan)核(he)生物(wu)RNA、真核(he)生物(wu)rRNA和(he)tRNA等模(mo)板，但(dan)不(bu)適用於miRNA等小(xiao)RNA模板。

6． 如(ru)果模(mo)板具(ju)有復(fu)雜(za)二(er)級結構或高GC區(qu)域，推(tui)薦(jian)使用(yong)變(bian)性(xing)步驟(zhou)，即在操作步驟(zhou)之前(qian)，將模(mo)板RNA在(zai)65℃孵育5 min後(hou)迅(xun)速(su)轉(zhuan)移(yi)到冰(bing)上，再加RNA模(mo)板和(he)RNase free H2O，混(hun)勻(yun)，50°C孵(fu)育15 min進(jin)行(xing)逆轉(zhuan)錄。

第(di)壹連 cDNA 合(he)成 (以 20 μl 反(fan)應(ying)體(ti)系為例(li))

重(zhong)要提(ti)示：操(cao)作前(qian)，請將(jiang)各組分(fen)輕(qing)彈混(hun)勻(yun)，點(dian)甩(shuai)離(li)心(xin)後(hou)置冰(bing)上備用。

1． 反(fan)應體(ti)系的配制

於(yu)冰(bing)上，在PCR管(guan)中(zhong)，加(jia)入以下(xia)組分(fen)：

2． 輕(qing)柔吸(xi)打(da)混(hun)勻(yun)，42℃孵(fu)育15 min，進(jin)行(xing)逆轉(zhuan)錄反(fan)應。

3． 85°C加(jia)熱5 sec，終(zhong)止(zhi)反(fan)應。

逆轉(zhuan)錄產物(wu)可(ke)立(li)即(ji)用於qPCR反(fan)應，或保(bao)存(cun)於-20°C，並(bing)在半年內使用(yong)；長(chang)期存(cun)放，請分(fen)裝後存(cun)於-70°C。

qPCR

建(jian)議(yi)取1~2μl cDNA產物(wu)原(yuan)液(ye)作(zuo)為(wei)20μl qPCR反(fan)應(ying)體(ti)系的模(mo)板。

如(ru)果基(ji)因表達(da)量比(bi)較(jiao)高，請根(gen)據(ju)實(shi)際情(qing)況(kuang)適(shi)當(dang)稀釋(shi)cDNA模板後(hou)使用。

相(xiang)關產品(pin)：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用於所有qPCR儀)

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

91013 通用(yong)型(xing)總(zong)RNA快(kuai)速(su)提(ti)取試(shi)劑盒（動物、植物、細(xi)菌、真菌、酵母）

91218 動物組(zu)織/細(xi)胞(bao)/昆(kun)蟲總(zong)RNA提(ti)取試(shi)劑盒 (同RNeasy Plus Mini Kit)

91318 多(duo)糖多酚(fen)植物總RNA提(ti)取試(shi)劑盒（RNeasy Plant Mini Kit的(de)升(sheng)級版)

91451 高效(xiao)動物組(zu)織/細(xi)胞(bao)總RNA提(ti)取試(shi)劑盒 (動物組(zu)織、細(xi)胞(bao))

91452 高效(xiao)植物總RNA提(ti)取試(shi)劑盒（根(gen)、莖、葉(ye)、花(hua)）

Script III RT MasterMix 反(fan)轉(zhuan)錄試(shi)劑