Script IV RT Kit With gDNA Eraser是壹種高效、穩定(ding)、快速並(bing)具有清除(chu)高(gao)達260ng基因(yin)組DNA汙染能(neng)力的(de)高(gao)溫逆(ni)轉錄系統，采(cai)用(yong)第四(si)代(dai)高達60℃的(de)全(quan)新高(gao)溫(wen)逆(ni)轉錄酶(mei)，可(ke)以(yi)通(tong)讀(du)GC含(han)量(liang)豐富，二級(ji)結構(gou)復雜的RNA模板，極大(da)提(ti)高(gao)了(le)逆(ni)轉錄效率和(he)長(chang)度(du)，CT值壹般(ban)提(ti)早(zao)2-3個(ge)循(xun)環(huan)。
Script IVRT Kit WithgDNAEraser反(fan)轉錄試(shi)劑

諾博(bo)萊(lai)德 Script IVRT Kit WithgDNAEraser反轉錄試(shi)劑

Script III RT Kit With gDNA Eraser（Perfect for qPCR）

目(mu)錄號(hao):71614

產(chan)品(pin)內(nei)容

保(bao)存(cun)條件(jian)

-20℃保(bao)存(cun)，有效期 12 個(ge)月。

具體產(chan)品(pin)的(de)參(can)數(shu)以收到產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書的(de)參數(shu)為準(zhun)

產(chan)品(pin)簡(jian)介(jie)

Script IV RT Kit With gDNA Eraser是壹種高效、穩定(ding)、快速並(bing)具有清除(chu)高(gao)達260ng基因(yin)組DNA汙染能(neng)力的(de)高(gao)溫逆(ni)轉錄系統，采(cai)用(yong)第四(si)代(dai)高達60℃的(de)全(quan)新高(gao)溫(wen)逆(ni)轉錄酶(mei)，可(ke)以(yi)通(tong)讀(du)GC含(han)量(liang)豐富，二級(ji)結構(gou)復雜的RNA模板，極大(da)提(ti)高(gao)了(le)逆(ni)轉錄效率和(he)長(chang)度(du)，CT值壹般(ban)提(ti)早(zao)2-3個(ge)循(xun)環(huan)。

其(qi)中(zhong)5x RT Mix IV為壹管(guan)式(shi)逆(ni)轉錄預混液(ye)，含有(you)逆轉錄所(suo)需(xu)的(de)所有試劑(ji)（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture、RT Buffer），並(bing)且(qie)，針對(dui)qPCR進(jin)行特別優(you)化(hua)oligodT和(he)N6隨機引物配比(bi)，使(shi)cDNA合(he)成可(ke)從(cong)RNA轉錄本的(de)各(ge)個(ge)區域起(qi)始(shi)並(bing)具有相同(tong)的逆(ni)轉錄效lv，最da程度(du)保(bao)證了(le)qPCR結果的真實(shi)性和(he)可(ke)重(zhong)復(fu)性。

適用範圍

第壹鏈cDNA合(he)成，尤(you)其(qi)高GC含量(liang)，復雜模板的cDNA合成。可(ke)用(yong)於高拷(kao)貝(bei)、低(di)拷(kao)貝(bei)基因(yin)的(de)檢測。

註意(yi)事(shi)項(xiang)

1． 建議(yi)使(shi)用 0.2ml RNase-free PCR 管在(zai)冰(bing)上(shang)配(pei)制(zhi)反(fan)應液(ye)，並(bing)用(yong) PCR 擴(kuo)增(zeng)儀(yi)精(jing)準(zhun)控溫(wen)。

2． 為保(bao)證反(fan)轉錄成功(gong)，建(jian)議(yi)使(shi)用高質(zhi)量(liang)的 RNA 樣(yang)品，及(ji)避免 RNase 汙染。

3． 20μl 逆轉錄反(fan)應體(ti)系建議(yi)加(jia)入(ru)不超過(guo) 1μg 的 Total RNA。如果目(mu)的(de)基因(yin)的(de)表(biao)達量(liang)非常(chang)低(di)，最多(duo)加(jia)入(ru) 5μg 。

4． 本產(chan)品(pin)適用於包含(han) Ploy (A)結構(gou)的真(zhen)核生(sheng)物 mRNA 和(he)不包含(han) Ploy (A)結構(gou)的原(yuan)核生(sheng)物RNA、真核生(sheng)物(wu)rRNA和(he)tRNA等(deng)模板，但不適用於miRNA等小(xiao) RNA 模板。

5． 5x RT Mix IV 和(he) 4x gDNA Eraser Mix 比(bi)較粘(zhan)稠，容(rong)易(yi)吸附(fu)在(zai)管(guan)壁和(he)吸(xi)頭(tou)外，使(shi)用(yong)前(qian)，請(qing)先點甩(shuai)離心(xin)。5x RT Mix IV 和(he) 4x gDNA Eraser Mix 包(bao)含(han)的酶(mei)過(guo)量(liang)，即(ji)使每(mei)次(ci)分(fen)別(bie)按(an)照(zhao) 3.8μl、0.9μl 使(shi)用(yong)，也(ye)不影(ying)響(xiang)結果。

第壹連 cDNA 合(he)成 (以 20 μl 反(fan)應體(ti)系為例)

重要(yao)提(ti)示(shi)：操作前(qian)，請(qing)將(jiang)各組分(fen)輕(qing)彈混勻(yun)，點甩(shuai)離心(xin)後置(zhi)冰(bing)上(shang)備用。

1． 去(qu)除(chu)基因(yin)組DNA

於冰(bing)上(shang)，在(zai)PCR管(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)以(yi)下(xia)組分(fen)：

用移(yi)液(ye)器輕(qing)輕吸打(da)混勻(yun)，42°C 孵育(yu) 2 min，以(yi)去(qu)除(chu)基因(yin)組 DNA 汙染。

2． 逆轉錄反(fan)應

把步(bu)驟1的(de)反應(ying)管放(fang)在(zai)冰(bing)上(shang)，加(jia)入(ru)4 μl 5x RT Mix IV，輕(qing)柔吸打(da)混勻(yun)，瞬(shun)離，設(she)置(zhi)反應(ying)程序(xu)：

① mRNA模板來源於真核(he)細胞(植(zhi)物(wu)、動(dong)物(wu))，含有Poly(A)尾(wei)結構(gou)：50℃孵育(yu)15min；

② mRNA模板來源於原核(he)細胞(細菌(jun))、病(bing)毒(du)，不含Poly(A)尾(wei)結構(gou)：25℃孵育(yu)10min；50℃孵育(yu)15 min。

註意(yi)：若(ruo)模板具有復雜二級(ji)結構(gou)或(huo)高(gao)GC區域，把(ba)50°C的孵育(yu)溫(wen)度(du)提(ti)升(sheng)至55-60°C，

有助於提(ti)高(gao)產(chan)量(liang)。

3． 終(zhong)止反(fan)應(ying)

85°C加(jia)熱5 sec，失活(huo)RTase和(he)gDNA Eraser。

逆轉錄產(chan)物(wu)可(ke)立(li)即(ji)用於qPCR反應(ying)，或(huo)保(bao)存(cun)於-20°C，並(bing)在(zai)半(ban)年內(nei)使用(yong)；長(chang)期存(cun)放(fang)，請(qing)分(fen)裝後(hou)存(cun)於-70°C。

qPCR

建議(yi)取1~2μl cDNA產(chan)物(wu)原(yuan)液(ye)作為20μl qPCR反應體系的模板。如果基因(yin)表(biao)達量(liang)比(bi)較高(gao)，請(qing)根(gen)據實(shi)際情(qing)況(kuang)適當稀釋(shi)cDNA模板後使用。

相關(guan)產(chan)品(pin)：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同(tong)TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用於所有(you)qPCR儀(yi))

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

91013 通(tong)用(yong)型總RNA快(kuai)速提(ti)取試劑盒(he)（動(dong)物(wu)、植(zhi)物(wu)、細菌(jun)、真(zhen)菌(jun)、酵(jiao)母）

91218 動(dong)物(wu)組織(zhi)/細胞/昆蟲(chong)總RNA提(ti)取試劑盒(he) (同(tong)RNeasy Plus Mini Kit)

91318 多糖多(duo)酚(fen)植(zhi)物(wu)總RNA提(ti)取試劑盒(he)（RNeasy Plant Mini Kit的升(sheng)級(ji)版(ban))

91451 高效動(dong)物(wu)組織(zhi)/細胞總RNA提(ti)取試劑盒(he) (動(dong)物(wu)組織(zhi)、細胞)

91452 高效植(zhi)物(wu)總RNA提(ti)取試劑盒(he)（根(gen)、莖、葉(ye)、花(hua)）

Script IVRT Kit WithgDNAEraser反轉錄試(shi)劑