Script IV RT MasterMix采用(yong)第四代(dai)高(gao)達(da)60℃的(de)全(quan)新(xin)高(gao)溫逆轉錄(lu)酶(mei)，可以通(tong)讀(du)GC含量(liang)豐富(fu)，二(er)級結構(gou)復(fu)雜(za)的(de)RNA模(mo)板(ban)，極大提高(gao)了(le)逆轉錄(lu)效(xiao)率(lv)，CT值(zhi)壹(yi)般(ban)提(ti)早2-3個(ge)循(xun)環(huan)。
ScriptIVRTMasterMix (for qPCR)反轉(zhuan)錄(lu)試(shi)劑

諾博(bo)萊(lai)德(de) ScriptIVRTMasterMix (for qPCR)反轉(zhuan)錄(lu)試(shi)劑

Script IV RT MasterMix( Perfect for qPCR )

目錄(lu)號(hao):71618

產品內容

保(bao)存(cun)條件(jian)

-20℃保(bao)存(cun)，有效期(qi) 12 個(ge)月(yue)。

具體產品的參數(shu)以收到(dao)產品說明書的參數(shu)為(wei)準(zhun)

產品簡(jian)介

Script IV RT MasterMix采用(yong)第四代(dai)高(gao)達(da)60℃的(de)全(quan)新(xin)高(gao)溫逆轉錄(lu)酶(mei)，可以通(tong)讀(du)GC含量(liang)豐富(fu)，二(er)級結構(gou)復(fu)雜(za)的(de)RNA模(mo)板(ban)，極大提高(gao)了(le)逆轉錄(lu)效(xiao)率(lv)，CT值(zhi)壹(yi)般(ban)提(ti)早2-3個(ge)循(xun)環(huan)。

5x RT Mix IV為(wei)壹(yi)管(guan)式逆轉錄(lu)預(yu)混液，含有逆轉錄(lu)所需(xu)的(de)所有試劑（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture、RT Buffer），並且(qie)，針(zhen)對(dui)qPCR進(jin)行特別優化oligodT和N6隨(sui)機引物(wu)配(pei)比(bi)，使(shi)cDNA合(he)成可從(cong)RNA轉錄(lu)本(ben)的各個(ge)區(qu)域(yu)起(qi)始(shi)並具(ju)有(you)相同的(de)逆轉錄(lu)效(xiao)lv，最da程度(du)保(bao)證了(le)qPCR結果(guo)的真(zhen)實性(xing)和(he)可重復(fu)性(xing)。

適(shi)用(yong)範(fan)圍

第壹(yi)鏈(lian)cDNA合(he)成，尤(you)其高(gao)GC含量(liang)，復(fu)雜(za)模(mo)板(ban)的cDNA合(he)成。可用(yong)於(yu)高(gao)拷(kao)貝、低(di)拷(kao)貝基(ji)因(yin)的(de)檢測。

註意(yi)事(shi)項(xiang)

1． 避(bi)免RNase汙染。

2． 為(wei)保(bao)證反轉(zhuan)錄(lu)成(cheng)功(gong)，建(jian)議使用(yong)高(gao)質量(liang)的RNA樣品(pin)。

3． 5x RT Mix IV含有甘油比(bi)較粘(zhan)稠(chou)，容易吸(xi)附(fu)在(zai)管(guan)壁(bi)和(he)吸(xi)頭(tou)外，導致(zhi)損(sun)失(shi)， 使(shi)用(yong)前請點甩(shuai)離(li)心後(hou)取(qu)用(yong)。 5x RT Mix IV包(bao)含的酶過(guo)量(liang)，即使每次(ci)分(fen)別按(an)照(zhao)3.8 μl使用(yong)，也(ye)不影響使(shi)用(yong)效(xiao)果(guo)。

4． 20 μl逆轉錄(lu)反應(ying)體(ti)系(xi)建(jian)議加入不超過(guo)1μg的Total RNA。如(ru)果目的(de)基(ji)因(yin)的(de)表(biao)達(da)量(liang)非常(chang)低(di)，最多(duo)加(jia)入5 μg Total RNA，否(fou)則，RNA量(liang)過(guo)高(gao)，可能會(hui)超出(chu)後(hou)續qPCR的(de)線(xian)性範(fan)圍。

5． 本產品適(shi)用(yong)於(yu)包(bao)含Ploy (A)結構(gou)的(de)真核生(sheng)物(wu)mRNA和(he)不包含Ploy (A)結構(gou)的(de)原核(he)生(sheng)物(wu)RNA、真(zhen)核生(sheng)物(wu)rRNA和(he)tRNA等(deng)模(mo)板(ban)，但不適(shi)用(yong)於(yu)miRNA等(deng)小(xiao)RNA模(mo)板(ban)。

6． 如(ru)果模(mo)板(ban)具有(you)復(fu)雜(za)二(er)級結構(gou)或(huo)高(gao)GC區(qu)域(yu)，推(tui)薦(jian)使用(yong)變(bian)性(xing)步(bu)驟，即在(zai)操作(zuo)步(bu)驟之前，將模(mo)板(ban)RNA在65℃孵(fu)育(yu)5 min後(hou)迅速(su)轉(zhuan)移到(dao)冰(bing)上(shang)，再(zai)加(jia)RNA模(mo)板(ban)和RNase free H2O，混勻，50°C孵育(yu)15 min進(jin)行逆轉錄(lu)。

第壹(yi)連(lian) cDNA 合(he)成 (以 20 μl 反應(ying)體(ti)系(xi)為(wei)例)

重要(yao)提(ti)示(shi)：操作(zuo)前，請將各組(zu)分(fen)輕(qing)彈混勻，點甩(shuai)離(li)心後(hou)置冰(bing)上(shang)備用(yong)。

1． 反應(ying)體(ti)系(xi)的(de)配制

於冰(bing)上(shang)，在(zai)PCR管(guan)中(zhong)，加入以下(xia)組(zu)分(fen)：

2． 輕柔吸(xi)打混勻，50℃孵育(yu)15 min，進(jin)行逆轉錄(lu)反應(ying)。

3． 85°C加熱(re)5 sec，終(zhong)止反應(ying)。

逆轉錄(lu)產物可立(li)即用(yong)於(yu)qPCR反應(ying)，或(huo)保(bao)存(cun)於-20°C，並在(zai)半(ban)年(nian)內使(shi)用(yong)；長(chang)期(qi)存(cun)放，請分(fen)裝(zhuang)後(hou)存(cun)於-70°C。

qPCR

建議取(qu)1~2μl cDNA產物原液作(zuo)為(wei)20μl qPCR反應(ying)體(ti)系(xi)的(de)模(mo)板(ban)。

如(ru)果基因(yin)表(biao)達(da)量(liang)比(bi)較高(gao)，請根(gen)據實(shi)際(ji)情(qing)況適(shi)當(dang)稀(xi)釋cDNA模(mo)板(ban)後(hou)使用(yong)。

相關(guan)產品：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於(yu)所有qPCR儀)

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

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91218 動物(wu)組(zu)織/細胞/昆蟲(chong)總(zong)RNA提(ti)取(qu)試劑盒(he) (同RNeasy Plus Mini Kit)

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91452 高(gao)效(xiao)植(zhi)物(wu)總RNA提(ti)取(qu)試劑盒(he)（根(gen)、莖、葉(ye)、花(hua)）

ScriptIVRTMasterMix (for qPCR)反轉(zhuan)錄(lu)試(shi)劑