2x SYBR qPCR Mix是(shi)SYBR I 嵌合(he)染(ran)料法(fa)專(zhuan)用的(de)qPCR試(shi)劑(ji)，為2x 預混液，包含除(chu)引物(wu)和(he)DNA樣(yang)品(pin)以外的(de)所有qPCR組分，可(ke)減(jian)少操作(zuo)步(bu)驟(zhou)，縮短加(jia)樣(yang)時間(jian)，降(jiang)低汙染(ran)幾率。其核心(xin)組分是(shi)全新(xin)的(de)抗(kang)體法(fa)HotmasterTaq DNA聚合(he)酶，配合(he)精(jing)心(xin)優化(hua)的(de)Buffer體(ti)系(xi)
2x SYBR qPCR Mix（With 50x ROX）熒光定(ding)量(liang)

諾(nuo)博萊德(de) 2x SYBR qPCR Mix（With 50x ROX）熒光定(ding)量(liang)

2x SYBR qPCR Mix（With 50x ROX） 

目錄號：71311

產(chan)品(pin)內容(rong)

保存(cun)條(tiao)件(jian)

-20℃保存(cun)，有(you)效期 24 個(ge)月(yue), 使(shi)用前充分融解，輕柔(rou)顛(dian)倒混(hun)勻(yun)。短期(qi)使(shi)用可放(fang)在(zai) 4 ℃，避(bi)免(mian)反(fan)復凍(dong)融。

具體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參(can)數以收到(dao)產(chan)品(pin)說明書(shu)的(de)參(can)數為準

產品(pin)簡(jian)介

2x SYBR qPCR Mix是(shi)SYBR I 嵌合(he)染(ran)料法(fa)專(zhuan)用的(de)qPCR試(shi)劑(ji)，為2x 預混液，包含除(chu)引物(wu)和(he)DNA樣(yang)品(pin)以外的(de)所有qPCR組分，可(ke)減(jian)少操作(zuo)步(bu)驟(zhou)，縮短加(jia)樣(yang)時間(jian)，降(jiang)低汙染(ran)幾率。其核心(xin)組分是(shi)全新(xin)的(de)抗(kang)體法(fa)HotmasterTaq DNA聚合(he)酶，配合(he)精(jing)心(xin)優化(hua)的(de)Buffer體(ti)系(xi)，有(you)效抑(yi)制非特異(yi)性擴(kuo)增(zeng)，可(ke)對寬(kuan)廣濃(nong)度(du)範圍(wei)的(de)模(mo)板(ban)進行準確定(ding)量(liang)，獲得(de)穩(wen)定(ding)可(ke)靠的(de)qPCR結果，具有(you)靈(ling)敏(min)度(du)高、特異(yi)性強(qiang)、穩(wen)定(ding)性(xing)好等(deng)特點(dian)。

本產品(pin)含有(you)獨(du)立包(bao)裝參(can)比(bi)染(ran)料50x ROX，用於(yu)消除(chu)信號(hao)本底以及(ji)校正孔與(yu)孔之(zhi)間(jian)產(chan)生(sheng)的(de)熒光信號(hao)誤差， 不(bu)同(tong)儀器所需ROX Reference Dye濃度(du)不(bu)同(tong)，見(jian)下表。

操作(zuo)步驟(zhou)：(以ABI Step One Plus機(ji)型為測(ce)試(shi)機(ji)型)

1. 將(jiang)DNA模(mo)板(ban)、引物、2 x SYBR qPCR Mix、ddH2O溶(rong)解並置於(yu)冰上備(bei)用。

2. 冰(bing)上配制qPCR反(fan)應(ying)體系(xi)：（以20μl反(fan)應(ying)體系(xi)為例(li)）

註(zhu)意(yi)：

1） 推(tui)薦模(mo)板(ban)加(jia)樣(yang)量為1-2 μl / 20μl反(fan)應(ying)體系(xi)，cDNA原液≤總反應(ying)體系(xi)的(de)10%，基(ji)因(yin)組(zu)DNA的(de)量(liang)為10 - 100 ng。

因(yin)不(bu)同(tong)種(zhong)類(lei)的(de)DNA模板(ban)中含有(you)的(de)靶(ba)基因(yin)拷(kao)貝(bei)數(shu)不(bu)同(tong)，可(ke)對模(mo)板(ban)進行梯度(du)稀釋，以確定(ding)最(zui)佳(jia)的(de)模(mo)板(ban)使(shi)用量。

2） 通常推(tui)薦引(yin)物濃(nong)度(du)為0.2 μM，就(jiu)可(ke)以得(de)到(dao)較(jiao)好(hao)的(de)結(jie)果，反應(ying)效果不(bu)佳(jia)時可在(zai)0.1 - 1.0 μM範(fan)圍(wei)內進(jin)行(xing)調(tiao)整。擴增(zeng)效(xiao)率不(bu)高的(de)情(qing)況下，可提(ti)高引(yin)物(wu)濃(nong)度(du)；發生(sheng)非特異(yi)性反(fan)應(ying)時，可降(jiang)低引(yin)物(wu)濃(nong)度(du)，由此優(you)化(hua)反應(ying)體系(xi)。

3） 舉例為常規(gui)PCR反應(ying)體系(xi)和(he)反應(ying)程序(xu)，實際(ji)操作(zuo)中應(ying)根據模(mo)板(ban)、引物結構和目的(de)片段大小不(bu)同(tong)進(jin)行相應(ying)的(de)改(gai)進和優化(hua)。

3. qPCR反應(ying)程序(xu)

註(zhu)意(yi)：

1） 本產品(pin)兼容(rong)性強(qiang)，絕大多(duo)數(shu)情(qing)況下使(shi)用二步法和三(san)步(bu)法均(jun)可獲得(de)良(liang)好效(xiao)果。建(jian)議(yi)采(cai)用兩步法qPCR反應(ying)程序(xu)。壹(yi)般(ban)來說，二步法(fa)擴增(zeng)特異(yi)性高(gao)，三(san)步(bu)法擴增(zeng)效率高。如(ru)果融鏈(lian)曲(qu)線較(jiao)差(cha)，可(ke)以嘗(chang)試(shi)兩(liang)步法(fa)擴增(zeng)或提(ti)高退(tui)火溫度(du)；如(ru)果因(yin)使(shi)用Tm值(zhi)較(jiao)低(di)的(de)引(yin)物等(deng)原因(yin)，得(de)不(bu)到(dao)良(liang)好的(de)實驗(yan)結果時，可嘗(chang)試(shi)加(jia)長(chang)延(yan)伸時間(jian)或(huo)者(zhe)進(jin)行三步法PCR擴(kuo)增。

2） 根(gen)據引(yin)物(wu)的(de)Tm值(zhi)進行退火&延(yan)伸（退(tui)火）溫度(du)的(de)設定(ding)；

3） 延(yan)伸（退(tui)火&延(yan)伸）時間(jian)的(de)設置還需要(yao)根據您所使(shi)用的(de)qPCR儀所需要(yao)的(de)最(zui)短數(shu)據采(cai)集時間(jian)自(zi)行(xing)調(tiao)整(zheng)。

2x SYBR qPCR Mix（With 50x ROX）熒光定(ding)量(liang)