Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采(cai)用(yong)第三(san)代(dai)高(gao)效逆轉錄酶(mei)，具有更(geng)強(qiang)的延(yan)伸(shen)能(neng)力(li)和(he)穩定(ding)性(xing)，並(bing)配備了(le)具有DNA分解活(huo)性的特(te)殊dsDNase，只需壹(yi)步(bu)操(cao)作(zuo)， 即可(ke)同時(shi)完成基(ji)因組(zu)清除(chu)與逆轉錄反(fan)應(ying)，操(cao)作(zuo)方(fang)便快捷。逆轉錄產(chan)物可(ke)以用(yong)於PCR，克(ke)隆基(ji)因(yin)；
ScriptIIIlncRNAcDNASynthesis Kit反(fan)轉(zhuan)錄

諾(nuo)博(bo)萊(lai)德(de) ScriptIIIlncRNAcDNASynthesis Kit反(fan)轉(zhuan)錄

Script III lncRNAcDNA Synthesis Kit（With dsDNase）lncRNAcDNA 第(di)壹(yi)鏈合成試劑盒(he)（去基因組）

目(mu)錄號(hao):71500

產(chan)品內容(rong)

保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)：-20℃保(bao)存(cun)，有效期 12 個月(yue)。

具體產(chan)品的參數(shu)以(yi)收到產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)的參數(shu)為準(zhun)

產(chan)品簡(jian)介(jie)

Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采(cai)用(yong)第三(san)代(dai)高(gao)效逆轉錄酶(mei)，具有更(geng)強(qiang)的延(yan)伸(shen)能(neng)力(li)和(he)穩定(ding)性(xing)，並(bing)配備了(le)具有DNA分解活(huo)性的特(te)殊dsDNase，只需壹(yi)步(bu)操(cao)作(zuo)， 即可(ke)同時(shi)完成基(ji)因組(zu)清除(chu)與逆轉錄反(fan)應(ying)，操(cao)作(zuo)方(fang)便快捷。逆轉錄產(chan)物可(ke)以用(yong)於PCR，克(ke)隆基(ji)因(yin)；也(ye)可(ke)以用(yong)於qPCR，兼(jian)容(rong)染料法和(he)探針法，用(yong)來檢測高(gao)拷(kao)貝(bei)或(huo)低拷貝(bei)基(ji)因。

lncRNA cDNA 第(di)壹(yi)鏈合成試劑盒(he)是專(zhuan)門(men)針對長(chang)鏈非編(bian)碼(ma)RNA（lncRNA）反(fan)轉(zhuan)錄而(er)開(kai)發的產(chan)品。與(yu) mRNA 相(xiang)比(bi)，lncRNA具有豐度低(di)、GC 含量差異大(da)、二(er)級(ji)結構(gou)更(geng)復(fu)雜等(deng)特(te)性，傳統反(fan)轉(zhuan)錄試劑lncRNA 難(nan)以(yi)達到理想(xiang)的效果(guo)。本(ben)試劑盒(he)含有高(gao)效去除(chu)基因(yin)組 DNA 的 dsDNase，可(ke)有效避免(mian)殘(can)留的基(ji)因(yin)組DNA 對後續(xu)檢測結果(guo)的幹(gan)擾。本試劑盒(he)中中(zhong)使用(yong)的反(fan)轉(zhuan)錄酶(mei)是通(tong)過(guo)分子改造後的新(xin)型(xing)反(fan)轉(zhuan)錄酶(mei)，具有更(geng)強(qiang)的 RNA 親(qin)和(he)性和熱(re)穩定(ding)性(xing)，使(shi)本(ben)試劑盒(he)在通(tong)讀 GC 含量高(gao)，二(er)級(ji)結構(gou)復(fu)雜，低(di)豐(feng)度的 RNA 模(mo)板(ban)和(he)抗逆性等方(fang)面表(biao)現(xian)突(tu)出，特(te)別適合表(biao)達水平(ping)相(xiang)對較低，二(er)級(ji)結構(gou)相(xiang)對復(fu)雜的 lncRNA 的反(fan)轉(zhuan)錄反(fan)應(ying)。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)：第(di)壹(yi)連cDNA合(he)成 (以(yi)20 μl反(fan)應(ying)體系(xi)為例(li))

1．反(fan)應(ying)體系(xi)的配制(zhi)

使(shi)用(yong) RNase-Free PCR 管(guan)在冰(bing)上配制(zhi)：(使用(yong)前，請將(jiang)各(ge)組(zu)分輕(qing)彈(dan)混(hun)勻(yun)，點甩(shuai)離心收集至管(guan)底，置冰(bing)上備用(yong)。)

2．輕(qing)柔吸(xi)打混(hun)勻(yun)，點甩(shuai)離心，置(zhi) PCR 儀進(jin)行(xing)逆轉錄反(fan)應(ying)。

25℃孵(fu)育(yu) 10 min 後，產(chan)物用(yong)於 PCR，42℃孵(fu)育(yu) 30 min；產(chan)物用(yong)於 qPCR，42℃孵(fu)育(yu) 15 min。

註意：如(ru)果(guo)模(mo)板(ban)具有復雜二(er)級(ji)結構(gou)或(huo)高(gao) GC 區(qu)域，可(ke)以先只加(jia) RNA 模(mo)板(ban)、引(yin)物和 RNase free H2O，混(hun)勻(yun)，65℃變性(xing) 5 min，冰(bing)上冷(leng)卻，點甩(shuai)離心後加(jia)入(ru)其(qi)它成分，將(jiang) 42℃孵(fu)育(yu)溫(wen)度(du)提升(sheng)至(zhi) 50°C，有(you)助(zhu)於提高(gao)產(chan)量。

3． 85°C加(jia)熱(re) 5 sec，失活(huo)RTase和(he)dsDNase，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)。

逆轉錄產(chan)物可(ke)立即用(yong)於PCR或(huo)qPCR反(fan)應(ying)，或保(bao)存於-20°C，並(bing)在半(ban)年內使用(yong)；長期(qi)存放建議(yi)分裝後在(zai)-70°C保存，cDNA應(ying)避免(mian)反(fan)復(fu)凍融。

PCR（建(jian)議(yi)取(qu)2 - 4 μl的cDNA產(chan)物原液(ye)作(zuo)為PCR模(mo)板(ban)。）

1. 常(chang)規擴增： 71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)

2. 高(gao)保(bao)真擴增：71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb，15sec/k)

qPCR（建(jian)議(yi)取(qu)1~2μl cDNA產(chan)物原液(ye)作(zuo)為20μl qPCR反(fan)應(ying)體系(xi)的模(mo)板(ban)。如(ru)果(guo)基(ji)因(yin)表(biao)達量較高(gao)，可(ke)以根(gen)據(ju)實際(ji)情況適當稀(xi)釋cDNA模(mo)板(ban)後使(shi)用(yong)。）

ScriptIIIlncRNAcDNASynthesis Kit反(fan)轉(zhuan)錄