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聯(lian)系電(dian)話:10-62817090
| 品牌 | NobleRyder/諾博(bo)萊(lai)德(de) | 貨(huo)號(hao) | 71319 |
|---|---|---|---|
| 規格(ge) | 500rxn(20μl/rxn) | 供(gong)貨周期(qi) | 現(xian)貨 |
| 主要用(yong)途(tu) | 適用(yong)於(yu)DNA或(huo)cDNA的靶序列檢測(ce)、基因(yin)表(biao)達分析、拷(kao)貝(bei)數(shu)分析、SNP分(fen)型等。 | 應用(yong)領(ling)域 | 環(huan)保(bao),化工,生(sheng)物(wu)產業(ye),農林(lin)牧漁,制(zhi)藥/生(sheng)物(wu)制藥 |
諾(nuo)博(bo)萊(lai)德(de)2 x Universal Probe qPCR Mix 熒(ying)光定(ding)量(liang)
2x Universal Probe qPCR Mix
目(mu)錄(lu)號(hao):71319
產品內(nei)容(rong)
Components | 71319-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71319-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
2x Universal Probe qPCR Mix | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保(bao)存條件(jian)
-20℃保(bao)存,有效期(qi) 24 個(ge)月。使(shi)用(yong)前(qian),充(chong)分(fen)融(rong)解(jie),輕輕顛倒(dao)混勻(yun),短(duan)期(qi)使(shi)用(yong)可(ke)放在(zai) 4 ℃,避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。
具(ju)體產品的(de)參(can)數(shu)以收到(dao)產品說明(ming)書的參(can)數(shu)為(wei)準
產品簡(jian)介(jie)
2x Universal Probe qPCR Mix是(shi)探針法(fa)專(zhuan)用(yong)的(de)qPCR試劑,為(wei)2x 預混液(ye),包含(han)除引物和(he)DNA樣品以(yi)外(wai)的所有qPCR組分,可(ke)減少操(cao)作步驟,縮(suo)短(duan)加(jia)樣時(shi)間,降(jiang)低(di)汙染(ran)幾(ji)率。
其核(he)心組分是(shi)全新的Hotmaster Taq DNA聚(ju)合酶,配(pei)合精(jing)心優化的Buffer體系(xi),有效抑制非(fei)特(te)異(yi)性(xing)擴(kuo)增(zeng),可(ke)對(dui)寬廣(guang)濃(nong)度(du)範(fan)圍的模板進行準確定(ding)量(liang),獲(huo)得(de)穩(wen)定(ding)可(ke)靠的(de)qPCR結(jie)果,具(ju)有靈(ling)敏度(du)高、特(te)異(yi)性(xing)強、穩(wen)定(ding)性(xing)好(hao)等特(te)點(dian)。適用(yong)於(yu)DNA或(huo)cDNA的靶序列檢測(ce)、基因(yin)表(biao)達分析、拷(kao)貝(bei)數(shu)分析、SNP分(fen)型等。
預混液(ye)中(zhong)已添(tian)加(jia)有通用(yong)型(xing)ROX,適用(yong)於(yu)各(ge)種qPCR儀(yi),使(shi)用(yong)時(shi)不需要額外(wai)添(tian)加(jia)ROX來(lai)校(xiao)正儀(yi)器(qi)。
操(cao)作步驟:
1. 將(jiang)DNA模板、引物、探針、2 x Universal Probe qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解(jie)並置於(yu)冰(bing)上(shang)備用(yong)。
2. 冰(bing)上(shang)配制(zhi)qPCR反(fan)應體系(xi):(以(yi)20μl反(fan)應體系(xi)為(wei)例)
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal Probe qPCRMix | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Probe (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1) 推(tui)薦模板加(jia)樣量(liang)為(wei)1-2μl / 20μl反(fan)應體系(xi),cDNA原(yuan)液(ye)≤總反(fan)應體系(xi)的(de)10%,基因(yin)組DNA的量(liang)為(wei)10-100 ng。因不同(tong)種(zhong)類(lei)的DNA模板中(zhong)含(han)有的靶基因(yin)拷(kao)貝(bei)數(shu)不同(tong),可(ke)對(dui)模板進行梯(ti)度(du)稀(xi)釋(shi),以(yi)確定(ding)最(zui)佳的模板使(shi)用(yong)量(liang)。
2) 通(tong)常(chang)引物濃(nong)度(du)為(wei)0.25 μM,就可以(yi)得(de)到較(jiao)好(hao)的(de)結(jie)果,反(fan)應效果不(bu)佳時可在(zai)0.1 - 1.0 μM範(fan)圍內進(jin)行調(tiao)整。擴(kuo)增(zeng)效(xiao)率不(bu)高(gao)的(de)情(qing)況下(xia),可提(ti)高引物濃(nong)度(du);發(fa)生(sheng)非(fei)特(te)異(yi)性(xing)反(fan)應時,可降(jiang)低(di)引物濃(nong)度(du),由(you)此優化反(fan)應體系(xi)。
3. qPCR反(fan)應程序
註(zhu)意(yi):
1) 本(ben)產品兼(jian)容(rong)性(xing)強,絕大多數(shu)情(qing)況下(xia)使(shi)用(yong)二(er)步法(fa)和(he)三步法(fa)均可獲(huo)得(de)良(liang)好(hao)效(xiao)果。壹(yi)般來(lai)說,二(er)步法(fa)擴增(zeng)特(te)異(yi)性(xing)高(gao),三步法(fa)擴增(zeng)效(xiao)率高(gao)。如果融(rong)鏈(lian)曲線(xian)較(jiao)差(cha),可(ke)以(yi)嘗(chang)試(shi)兩(liang)步法(fa)擴增(zeng)或(huo)提(ti)高退火(huo)溫度(du);如果因(yin)使(shi)用(yong)Tm值較低(di)的引物等原因,得不(bu)到良(liang)好(hao)的(de)實驗結(jie)果時(shi),可嘗(chang)試(shi)加(jia)長(chang)延伸(shen)時(shi)間(jian)或者(zhe)進行(xing)三步法(fa)PCR擴增(zeng)。
2) 根(gen)據引物的(de)Tm值進行退(tui)火(huo)&延(yan)伸(shen)(退(tui)火(huo))溫度(du)的設(she)定(ding);
3) 延(yan)伸(shen)(退(tui)火(huo)&延(yan)伸(shen))時(shi)間(jian)的設(she)置還(hai)需(xu)要根據您(nin)所(suo)使(shi)用(yong)的(de)qPCR儀(yi)所(suo)需要的最(zui)短(duan)數(shu)據采(cai)集時間(jian)自(zi)行調(tiao)整。
4) 融(rong)解(jie)曲線(xian)分(fen)析請(qing)以所(suo)使(shi)用(yong)的(de)熒(ying)光定(ding)量(liang)PCR儀(yi)推(tui)薦的程序進(jin)行(xing)設(she)定(ding)。
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2 x Universal Probe qPCR Mix 熒(ying)光定(ding)量(liang)