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| 品(pin)牌(pai) | NobleRyder/諾(nuo)博(bo)萊德 | 貨(huo)號(hao) | 71400 |
|---|---|---|---|
| 規(gui)格 | 500次(ci)/5ml | 供(gong)貨(huo)周(zhou)期(qi) | 現貨(huo) |
| 主(zhu)要用途 | 適(shi)用(yong)於(yu)DNA或(huo)cDNA的(de)靶序(xu)列檢(jian)測、基(ji)因(yin)表(biao)達分(fen)析(xi)、拷貝數分(fen)析(xi)、SNP分(fen)型(xing)等(deng)。 | 應(ying)用(yong)領域 | 環(huan)保,化(hua)工,生物產業(ye),農(nong)林牧(mu)漁,制(zhi)藥/生(sheng)物制(zhi)藥 |
諾(nuo)博(bo)萊德 2×UniversalprobeqPCR Mix(UDG+)熒光(guang)定(ding)量(liang)
2x Universal Probe qPCR Mix (UDG+)
目(mu)錄號:71400
產品內容(rong)
Components | 71400-500 500 rxns(20μl/rxn) | 71400-2500 2500rxns(20μl/rxn) |
2x Universal Probe qPCR Mix (UDG+) | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)
-20℃保(bao)存(cun),有(you)效(xiao)期(qi) 24 個月(yue)。使(shi)用前,充(chong)分(fen)融(rong)解,輕輕顛倒混(hun)勻,短期(qi)使用(yong)可(ke)放(fang)在(zai) 4 ℃,避(bi)免反復(fu)凍(dong)融(rong)。
具體(ti)產品的(de)參(can)數以收(shou)到(dao)產品說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)參(can)數為準
產品簡介
2x Universal Probe qPCR Mix(UDG+)是(shi)探(tan)針(zhen)法專用的(de)qPCR試劑(ji),為(wei)2x預混(hun)液,試劑(ji)中(zhong)引(yin)入了dNTP/UDG防(fang)汙(wu)染(ran)系統(tong),可消除(chu)擴增(zeng)產物汙(wu)染(ran)對(dui)qPCR的(de)影(ying)響(xiang)。適(shi)用(yong)於(yu)DNA或(huo)cDNA的(de)靶序(xu)列檢(jian)測、基(ji)因(yin)表(biao)達分(fen)析(xi)、拷貝數分(fen)析(xi)、SNP分(fen)型(xing)等(deng)。
其(qi)核(he)心(xin)組(zu)分(fen)是(shi)全(quan)新(xin)的(de)Hotmaster Taq DNA聚(ju)合酶(mei),配(pei)合精(jing)心(xin)優(you)化(hua)的(de)Buffer體(ti)系(xi),有(you)效(xiao)抑制非(fei)特異性擴(kuo)增,可(ke)對(dui)寬廣(guang)濃度範圍(wei)的(de)模板進(jin)行準確(que)定(ding)量(liang),獲(huo)得(de)穩(wen)定可靠的(de)qPCR結(jie)果(guo),具有(you)靈敏度高、特異性強、穩(wen)定性好(hao)等特點(dian)。
預(yu)混(hun)液中(zhong)已(yi)添(tian)加有(you)通用型(xing)ROX,適(shi)用(yong)於(yu)各種(zhong)qPCR儀,使(shi)用(yong)時不需要額外(wai)添(tian)加ROX來(lai)校正(zheng)儀器(qi)。
操(cao)作步驟(zhou):
1. 將(jiang)DNA模板、引(yin)物、探(tan)針(zhen)、2 x Universal Probe qPCR Mix、RNase-Free H2O溶(rong)解並(bing)置(zhi)於(yu)冰(bing)上備(bei)用。
2. 冰(bing)上配(pei)制qPCR反應(ying)體(ti)系(xi):(以(yi)20μl反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)為(wei)例)
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal Probe qPCR Mix (UDG+) | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Probe (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1) 推(tui)薦(jian)模板加(jia)樣(yang)量(liang)為1-2μl / 20μl反應(ying)體(ti)系(xi),cDNA原液(ye)≤總(zong)反應(ying)體(ti)系(xi)的(de)10%,基因(yin)組DNA的(de)量為(wei)10-100 ng。因不(bu)同種(zhong)類的(de)DNA模板中(zhong)含有(you)的(de)靶基(ji)因拷貝數不同(tong),可對(dui)模板進(jin)行梯(ti)度稀釋(shi),以確(que)定(ding)最(zui)佳(jia)的(de)模板使(shi)用量(liang)。
2) 通常引(yin)物濃度為0.25 μM,就(jiu)可以得(de)到(dao)較(jiao)好(hao)的(de)結(jie)果(guo),反應(ying)效(xiao)果(guo)不佳時可在(zai)0.1 - 1.0 μM範(fan)圍(wei)內進(jin)行(xing)調整。擴(kuo)增(zeng)效(xiao)率(lv)不高的(de)情況(kuang)下,可(ke)提(ti)高引物濃度;發(fa)生(sheng)非(fei)特異性反(fan)應(ying)時,可降(jiang)低(di)引物濃度,由此(ci)優(you)化(hua)反應(ying)體(ti)系(xi)。
3. qPCR反(fan)應(ying)程(cheng)序
註(zhu)意(yi):
1) 本(ben)產品兼(jian)容(rong)性(xing)強,絕(jue)大(da)多(duo)數情況(kuang)下使(shi)用(yong)二(er)步法(fa)和三步法(fa)均可(ke)獲(huo)得(de)良(liang)好(hao)效(xiao)果(guo)。壹(yi)般(ban)來(lai)說,二(er)步法(fa)擴(kuo)增(zeng)特異性高(gao),三步法(fa)擴(kuo)增(zeng)效(xiao)率(lv)高。如果(guo)融(rong)鏈曲(qu)線較(jiao)差,可(ke)以嘗(chang)試兩步法(fa)擴(kuo)增(zeng)或提(ti)高退(tui)火溫度;如果(guo)因使用(yong)Tm值較(jiao)低(di)的(de)引物等(deng)原因(yin),得(de)不到(dao)良(liang)好(hao)的(de)實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)時,可嘗(chang)試加長延(yan)伸(shen)時間(jian)或者進(jin)行(xing)三步法(fa)PCR擴(kuo)增(zeng)。
2) 根據引物的(de)Tm值進(jin)行退(tui)火&延(yan)伸(shen)(退(tui)火)溫度的(de)設(she)定;
3) 延(yan)伸(shen)(退(tui)火&延(yan)伸(shen))時間(jian)的(de)設(she)置還需(xu)要根據您(nin)所(suo)使(shi)用(yong)的(de)qPCR儀所(suo)需(xu)要的(de)最(zui)短數據采集時間(jian)自行調整。
4) 融(rong)解曲(qu)線分(fen)析(xi)請(qing)以所使用的(de)熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀推(tui)薦(jian)的(de)程序(xu)進行(xing)設(she)定。
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2×UniversalprobeqPCR Mix(UDG+)熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)