核蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)提(ti)供(gong)全套試劑，適(shi)用(yong)於從各(ge)種原(yuan)代(dai)或(huo)傳代(dai)動物(wu)細(xi)胞(bao)和各(ge)種動物(wu)實(shi)體(ti)組織(zhi)，如(ru)腦(nao)、脊(ji)髓、神(shen)經(jing)結(jie)或(huo)纖維、脂(zhi)肪(fang)、肝臟(zang)、消(xiao)化道(dao)、腎臟(zang)、心(xin)臟(zang)、肌肉、血管、結(jie)締(di)組織(zhi)等動物(wu)組織(zhi)中提取核(he)蛋(dan)白和(he)胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)白。提(ti)取(qu)過程簡單(dan)方便(bian)，可在(zai)1小(xiao)時(shi)內完(wan)成(cheng)。制(zhi)備的核蛋(dan)白和(he)胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)白不(bu)僅(jin)純度高，保持天(tian)然(ran)活(huo)性(xing)，而(er)且絕少交叉(cha)汙(wu)染。本試劑盒(he)含(han)有(you)的(de)du特(te)配方能(neng)夠(gou)有(you)效(xiao)溶(rong)解細(xi)胞(bao)核膜(mo)組份。
凍存樣本核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)-常(chang)備現(xian)貨

諾(nuo)博(bo)萊德(de) 凍存樣本核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)

 NobleRyder P5036 凍存樣本核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)

 產(chan)品(pin)貨(huo)號：P5036

 產(chan)品(pin)名(ming)稱：凍存樣本核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)

 產(chan)品(pin)規(gui)格(ge)：50T/100T

凍存樣本核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)-常(chang)備現(xian)貨

 產(chan)品(pin)簡介(jie)：

 中文(wen)名(ming)稱：凍存樣本核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)

 規(gui)格(ge)：100T ; 50T

 儲存條件(jian)：2-8℃，1 year

具體(ti)產品(pin)的(de)參(can)數以(yi)收到產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)的(de)參(can)數為準(zhun)

核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)提(ti)供(gong)全套試劑，適(shi)用(yong)於從各(ge)種原(yuan)代(dai)或(huo)傳代(dai)動物(wu)細(xi)胞(bao)和各(ge)種動物(wu)實(shi)體(ti)組織(zhi)，如(ru)腦(nao)、脊(ji)髓、神(shen)經(jing)結(jie)或(huo)纖維、脂(zhi)肪(fang)、肝臟(zang)、消(xiao)化道(dao)、腎臟(zang)、心(xin)臟(zang)、肌肉、血管、結(jie)締(di)組織(zhi)等動物(wu)組織(zhi)中提取核(he)蛋(dan)白和(he)胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)白。提(ti)取(qu)過程簡單(dan)方便(bian)，可在(zai)1小(xiao)時(shi)內完(wan)成(cheng)。制(zhi)備的核蛋(dan)白和(he)胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)白不(bu)僅(jin)純度高，保持天(tian)然(ran)活(huo)性(xing)，而(er)且絕少交叉(cha)汙(wu)染。本試劑盒(he)含(han)有(you)的(de)du特(te)配方能(neng)夠(gou)有(you)效(xiao)溶(rong)解細(xi)胞(bao)核膜(mo)組份。本(ben)試劑盒(he)含(han)有(you)的(de)蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)混合物，阻(zu)止(zhi)了(le)蛋(dan)白酶(mei)對(dui)蛋(dan)白的(de)降(jiang)解，為提(ti)取高純度的(de)蛋(dan)白提(ti)供(gong)了保(bao)證。本試劑盒(he)提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白可(ke)用(yong)於WesternBlotting、轉(zhuan)錄活(huo)性(xing)分(fen)析(xi)、Gelshift凝膠阻滯實(shi)驗、免(mian)疫(yi)共(gong)沈澱(dian)、酶(mei)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)等蛋(dan)白研(yan)究(jiu)。本試劑盒(he)中不(bu)含(han)有(you)EDTA，與金屬螯(ao)和層(ceng)析(xi)等下(xia)遊應(ying)用(yong)兼容。本(ben)試劑盒(he)提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白為具有天(tian)然(ran)蛋(dan)白構(gou)象(xiang)的活(huo)性(xing)蛋(dan)白。

適(shi)用(yong)樣本(ben)：動物(wu)組織(zhi)

註(zhu)：

1. 蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)未開蓋使用(yong)前也(ye)可以(yi)2-8℃儲存。開蓋使用(yong)後(hou)-20℃儲存。

2. 蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)在2-8℃低(di)溫(wen)時(shi)是(shi)固(gu)體(ti)狀(zhuang)態(tai)，從冰(bing)箱(xiang)取出後(hou)恢(hui)復(fu)至(zhi)室(shi)溫或(huo)37℃短(duan)時(shi)間水(shui)浴，變成(cheng)液(ye)體(ti)狀(zhuang)態(tai)後(hou)離(li)心(xin)至(zhi)管底部(bu)再開蓋。

3. 試劑拆(chai)封後(hou)請(qing)盡(jin)快(kuai)使用(yong)完！

產(chan)品(pin)簡介(jie)：

核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)提(ti)供(gong)全套試劑，適(shi)用(yong)於從各(ge)種原(yuan)代(dai)或(huo)傳代(dai)動物(wu)細(xi)胞(bao)和各(ge)種動物(wu)實(shi)體(ti)組織(zhi)，如(ru)腦(nao)、脊(ji)髓、神(shen)經(jing)結(jie)或(huo)纖維、脂(zhi)肪(fang)、肝臟(zang)、消(xiao)化道(dao)、腎臟(zang)、心(xin)臟(zang)、肌肉、血管、結(jie)締(di)組織(zhi)等動物(wu)組織(zhi)中提取核(he)蛋(dan)白和(he)胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)白。提(ti)取(qu)過程簡單(dan)方便(bian)，可在(zai) 1 小(xiao)時(shi)內完(wan)成(cheng)。制(zhi)備的核蛋(dan)白和(he)胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)白不(bu)僅(jin)純度高，保持天(tian)然(ran)活(huo)性(xing)，而(er)且絕少交叉(cha)汙(wu)染。

本(ben)試劑盒(he)含(han)有(you)的(de)du特(te)配方能(neng)夠(gou)有(you)效(xiao)溶(rong)解細(xi)胞(bao)核膜(mo)組份。本(ben)試劑盒(he)含(han)有(you)的(de)蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)混合物，阻(zu)止(zhi)了(le)蛋(dan)白酶(mei)對(dui)蛋(dan)白的(de)降(jiang)解，為提(ti)取高純度的(de)蛋(dan)白提(ti)供(gong)了保(bao)證。

本(ben)試劑盒(he)提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白可(ke)用(yong)於 Western Blotting、轉(zhuan)錄活(huo)性(xing)分(fen)析(xi)、Gel shift 凝膠阻滯實(shi)驗、免(mian)疫(yi)共(gong)沈澱(dian)、酶(mei)活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)等蛋(dan)白研(yan)究(jiu)。

本(ben)試劑盒(he)中不(bu)含(han)有(you) EDTA，與金屬螯(ao)和層(ceng)析(xi)等下(xia)遊應(ying)用(yong)兼容。

本(ben)試劑盒(he)提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白為具有天(tian)然(ran)蛋(dan)白構(gou)象(xiang)的活(huo)性(xing)蛋(dan)白。

自(zi)備試劑和(he)儀(yi)器：

離(li)心機、振蕩(dang)器、渦(wo)旋(xuan)混勻器、移液器、冰(bing)箱(xiang)、冰盒(he)，PBS 緩沖(chong)液(ye)、蛋(dan)白定(ding)量(liang)試劑盒(he)，離(li)心(xin)管(guan)、吸(xi)頭、壹次性(xing)手(shou)套

產(chan)品(pin)特(te)點(dian)：

1. 使(shi)用(yong)方便(bian)，從細(xi)胞(bao)，組織(zhi)中提取蛋(dan)白不(bu)需經(jing)過研磨(mo)、反復(fu)凍融(rong)、超聲(sheng)破碎(sui)等前處(chu)理(li)。

2. 將(jiang)蛋(dan)白提(ti)取(qu)的時(shi)間縮(suo)短(duan)至 30 分(fen)鐘(zhong)-1 小(xiao)時(shi)。

3. 含(han)蛋(dan)白穩(wen)定(ding)劑(ji)，提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白穩(wen)定(ding)。

4. 紫(zi)外(wai)檢測(ce)蛋(dan)白濃(nong)度時(shi)，背(bei)景幹(gan)擾低(di)。

5. 蛋(dan)白提(ti)取(qu)液含(han)多種有(you)效(xiao)成(cheng)分(fen)，可(ke)以(yi)充(chong)分(fen)釋(shi)放(fang)胞(bao)漿(jiang)蛋(dan)白、核(he)蛋(dan)白，又可結(jie)合釋(shi)出的(de)蛋(dan)白防(fang)止(zhi)沈(chen)澱(dian)。

6. 蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)抑(yi)制了(le)蛋(dan)白的(de)降(jiang)解，蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)配方優(you)化。蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)混合物包(bao)含(han) 6種獨(du)立的(de)蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji) AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每壹種抑(yi)制劑(ji)可特(te)異(yi)性(xing)抑(yi)制某(mou)壹(yi)種或(huo)幾種蛋(dan)白酶(mei)活(huo)性(xing)。該混合物優(you)化的(de)組成(cheng)使(shi)其(qi)可以(yi)抑(yi)制幾(ji)乎所(suo)有(you)重(zhong)要(yao)的(de)蛋(dan)白酶(mei)活(huo)性(xing)，包(bao)括si氨酸(suan)蛋(dan)白酶(mei)、半guang氨酸(suan)蛋(dan)白酶(mei)、天(tian)冬氨酸蛋(dan)白酶(mei)、丙(bing)氨(an)酰-氨基(ji)肽(tai)酶(mei)等。

使(shi)用(yong)方法(fa)：

壹(yi)、使用(yong)註(zhu)意事項(xiang)：

1. 旋(xuan)帽(mao)離(li)心(xin)管(guan)裝的試劑在(zai)開蓋前請短(duan)暫離(li)心，將(jiang)蓋(gai)內壁(bi)上的液(ye)體(ti)甩至(zhi)管(guan)底，避(bi)免開蓋時(shi)液體(ti)灑落。

2. 實(shi)驗過(guo)程中的所有(you)試劑須(xu)預(yu)冷；所(suo)有(you)器具須放(fang)-20℃冰(bing)箱(xiang)預(yu)冷。整個(ge)過程須保(bao)持樣(yang)品(pin)處(chu)於(yu)低(di)溫(wen)。

3. 蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)儲存期(qi)間溶(rong)液(ye)如(ru)果(guo)出現(xian)沈澱(dian)，不(bu)影響使用(yong)，溶解(jie)後(hou)正常(chang)使用(yong)。

4. 如(ru)果(guo)試劑盒(he)不(bu)能(neng)短(duan)時(shi)間內用(yong)完，蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)混合物不(bu)可(ke)以(yi)壹次全(quan)部(bu)加入(ru)提取(qu)液(ye)。

5. 可(ke)以(yi)根據自己(ji)實(shi)驗需要(yao)加入(ru)其(qi)它蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)單(dan)品(pin)。

6. Western 實(shi)驗內參(can)可(ke)以(yi)選用(yong) Lamin A、Lamin B、TBP、Histon H3。

二(er)、操作(zuo)步驟

1. 提(ti)取液準備：

每200ul冷的(de)蛋(dan)白提(ti)取(qu)液B中加入(ru)2ul蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)混合物，充(chong)分(fen)混勻後(hou)置冰(bing)上備用(yong)。

【註(zhu)】：

1) 根據需要(yao)處(chu)理(li)的(de)樣品(pin)數量(liang)準(zhun)備蛋(dan)白提(ti)取(qu)液，蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)混合物不(bu)可(ke)以(yi)壹次全(quan)部(bu)加入(ru)提取(qu)液(ye)。磷(lin)酸酶(mei)抑(yi)制劑(ji)可以(yi)壹次加入(ru)。

2) 加過蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)的提取液壹周(zhou)內未使(shi)用(yong)完，再次使(shi)用(yong)前需要(yao)再次加入(ru)蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)。

3) 以(yi)下(xia)步驟中使用(yong)的蛋(dan)白提(ti)取(qu)液為此(ci)步配制(zhi)好(hao)的(de)含(han)蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)的提取液。

2. 2、樣(yang)本解凍後(hou)，取(qu)適(shi)量(liang)組織(zhi)樣(yang)本用(yong)手術(shu)jian刀(dao)盡(jin)可(ke)能剪碎(sui)，加冷 PBS，用(yong)組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)器勻(yun)漿(jiang)至(zhi)無(wu)明顯肉眼(yan)可(ke)見(jian)固(gu)體(ti)。

【註(zhu)】：

1) 細(xi)胞(bao)樣本(ben)直接(jie)按(an)下(xia)面的(de)第四步驟開始操作(zuo)。

3. 勻(yun)漿(jiang)液(ye)在4℃，1000×g條件(jian)下(xia)離心(xin)3分鐘(zhong)，棄(qi)上清，收(shou)集沈澱(dian)。

4. 每20-40ul細(xi)胞(bao)沈澱(dian)體(ti)積中加入(ru)200ul冷的(de)提(ti)取液(ye)A，高速渦(wo)旋(xuan)振蕩 15 秒(miao)或(huo)吹打(da)混勻，置2-8℃條件(jian)振蕩(dang)20-30分(fen)鐘(zhong)。

【註(zhu)】：

1) 提(ti)取液A 處(chu)理(li)後(hou)細(xi)胞(bao)體(ti)積應減(jian)少，否則(ze)延(yan)長提取液A 振(zhen)蕩(dang)處(chu)理(li)時(shi)間。

2) 使(shi)用(yong)振蕩(dang)器/搖(yao)床的較(jiao)低(di)轉(zhuan)速，提取(qu)液(ye)能輕微晃動即(ji)可(ke)。

3) 沒(mei)有振(zhen)蕩條件(jian)也可(ke)以(yi)不(bu)振(zhen)蕩(dang)，稍(shao)微延(yan)長提取液的(de)處(chu)理(li)時(shi)間，中間每隔幾分鐘(zhong)用(yong)移液器吹打(da)混勻即(ji)可(ke)。

4) 或(huo)者按每20-50mg 組織(zhi)重(zhong)量加200 μl 試劑A。

5. 在(zai)4℃，2000×g條件(jian)下(xia)離心(xin)10分鐘(zhong)，棄(qi)上清，收(shou)集沈澱(dian)。

6. 在(zai)沈澱(dian)中加入(ru)80-200ul冷的(de)蛋(dan)白提(ti)取(qu)液B，高速渦(wo)旋(xuan)振蕩15秒(miao)。

【註(zhu)】：

1) 提(ti)取液用(yong)量根據實(shi)驗細(xi)胞(bao)數量(liang)情(qing)況(kuang)調整，細(xi)胞(bao)數量(liang)多則(ze)多加。也可(ke)根據預(yu)實(shi)驗時(shi)最(zui)終蛋(dan)白濃(nong)度實(shi)際情(qing)況(kuang)調整。

2) 加提取(qu)液B 前(qian)，必(bi)須(xu)盡(jin)可(ke)能吸(xi)幹(gan)提取液(ye)A。否(fou)則(ze)會(hui)影響核蛋(dan)白純度。

3) 對(dui)核蛋(dan)白純度要(yao)求(qiu)較(jiao)高時(shi)，也可(ke)以(yi)用(yong)PBS 將(jiang)沈(chen)澱(dian)洗(xi)滌(di)壹(yi)次。PBS 重(zhong)懸沈澱(dian)，2000×g 離(li)心(xin)5 分鐘(zhong)後(hou)收(shou)集沈澱(dian)再加提取(qu)液B。

7. 置2-8℃條件(jian)振蕩(dang)30-40分(fen)鐘(zhong)。

【註(zhu)】：

1) 使(shi)用(yong)振蕩(dang)器/搖(yao)床的較(jiao)低(di)轉(zhuan)速，提取(qu)液(ye)能輕微晃動即(ji)可(ke)。

2) 沒(mei)有振(zhen)蕩條件(jian)也可(ke)以(yi)不(bu)振(zhen)蕩(dang)，稍(shao)微延(yan)長提取液的(de)處(chu)理(li)時(shi)間，中間每隔幾分鐘(zhong)用(yong)移液器吹打(da)混勻即(ji)可(ke)。

3) 此(ci)步驟蛋(dan)白提(ti)取(qu)液處(chu)理(li)產(chan)物中有時(shi)會出現(xian)少量透(tou)明膠狀(zhuang)物，屬(shu)正常(chang)現(xian)象。該透明膠狀(zhuang)物為含(han)有基(ji)因組DNA等的蛋(dan)白復(fu)合物。不(bu)檢測(ce)和基(ji)因組DNA結(jie)合特(te)別(bie)緊(jin)密的(de)特(te)定(ding)蛋(dan)白的(de)情(qing)況(kuang)下(xia)，可以(yi)直接(jie)離(li)心(xin)取(qu)上清進(jin)行後(hou)續(xu)實(shi)驗即(ji)可(ke)；如(ru)果(guo)需要(yao)檢測(ce)和基(ji)因組結(jie)合特(te)別(bie)緊(jin)密的(de)蛋(dan)白，則(ze)可(ke)以(yi)通過(guo)超聲(sheng)處(chu)理(li)，300w/10秒(miao)間隔10秒(miao)，超聲(sheng)3分鐘(zhong)，隨(sui)後(hou)離(li)心(xin)取(qu)上清用(yong)於後(hou)續(xu)實(shi)驗。檢測(ce)壹些(xie)常見的(de)轉(zhuan)錄因子，例(li)如NF-kappaB、p53等時(shi)，不(bu)必(bi)進(jin)行超聲(sheng)處(chu)理(li)。如(ru)果(guo)引(yin)入(ru)其(qi)他外(wai)源性(xing)蛋(dan)白質(zhi)不(bu)影響下(xia)遊實(shi)驗的(de)話(hua)，也可(ke)以(yi)加入(ru)DNase處(chu)理(li)。

8. 在(zai)4℃，12000×g條件(jian)下(xia)離心(xin)10分鐘(zhong)。棄(qi)沈澱(dian)，收(shou)集上清。

9. 將(jiang)上清吸(xi)入(ru)另(ling)壹預(yu)冷的(de)幹(gan)凈(jing)離心(xin)管(guan)，即(ji)可(ke)得到核(he)蛋(dan)白。

10. 將(jiang)上述蛋(dan)白提(ti)取(qu)物定(ding)量(liang)後(hou)分(fen)裝(zhuang)於(yu)-80℃冰箱(xiang)保存(cun)備用(yong)或(huo)直接(jie)用(yong)於下(xia)遊實(shi)驗。

【註(zhu)】：

1) 建(jian)議(yi)用(yong)BCA 法進(jin)行蛋(dan)白定(ding)量(liang)。

2) 蛋(dan)白樣(yang)品(pin)-80℃存(cun)放(fang)壹(yi)年(nian)沒(mei)有問(wen)題(ti)。註(zhu)意不(bu)要(yao)被(bei)蛋(dan)白酶(mei)水(shui)解掉，不(bu)要(yao)被(bei)細(xi)菌(jun)汙(wu)染。

註(zhu)意事項(xiang)：

1. 正式(shi)實(shi)驗前(qian)請(qing)選取(qu)幾個(ge)樣(yang)本(ben)做預(yu)實(shi)驗，以(yi)優化實(shi)驗條件(jian)，取得優(you)良(liang)實(shi)驗效(xiao)果(guo)。

2. 螺(luo)旋蓋微量(liang)試劑管(guan)裝的試劑在(zai)開蓋前請短(duan)暫離(li)心，將(jiang)蓋(gai)和(he)管內壁(bi)上的液(ye)體(ti)離心(xin)至管底，避免開蓋時(shi)試劑損(sun)失(shi)。

3. 禁(jin)止(zhi)與其(qi)他品(pin)牌(pai)的(de)試劑混用(yong)，否則(ze)會(hui)影響使用(yong)效果(guo)。

4. 樣(yang)品(pin)或(huo)試劑被(bei)細(xi)菌(jun)或(huo)真菌汙(wu)染或(huo)試劑交叉(cha)汙(wu)染可能會導(dao)致錯(cuo)誤(wu)的結(jie)果(guo)。

5. 最(zui)好(hao)使(shi)用(yong)壹次性(xing)吸(xi)頭、管、瓶(ping)或(huo)玻(bo)璃器皿(min)，可重(zhong)復(fu)使(shi)用(yong)的玻(bo)璃器皿(min)必(bi)須(xu)在(zai)使(shi)用(yong)前清(qing)洗(xi)並(bing)徹di清除殘留清潔(jie)劑。

6. 實(shi)驗後(hou)完(wan)成(cheng)後(hou)所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)及接觸(chu)過的器皿(min)應按(an)照規(gui)定(ding)程序處(chu)理(li)。

凍存樣本核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)-常(chang)備現(xian)貨

產(chan)品(pin)訂(ding)購(gou)信息(xi)：

P5036  凍存樣本核(he)蛋(dan)白提(ti)取(qu)試劑盒(he)  50T/100T