本(ben)試劑(ji)盒采用(yong)堿裂解(jie)法(fa)裂解(jie)細(xi)胞(bao)，根(gen)據(ju)離心吸附(fu)柱在高鹽狀(zhuang)態下(xia)特異(yi)性(xing)地結合(he)溶(rong)液(ye)中(zhong)的DNA的(de)原(yuan)理(li)特異(yi)性(xing)提(ti)取(qu)質粒(li)DNA。 離心吸附(fu)柱中(zhong)采用(yong)的矽(gui)基(ji)質材料能高效(xiao)、專(zhuan)壹地吸附(fu)DNA，可最大(da)限(xian)度去除雜(za)質蛋白及(ji)細(xi)胞(bao)中(zhong)其他(ta)有機化(hua)合(he)物。 使用(yong)本試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)取(qu)的(de)質粒(li)DNA可適(shi)用(yong)於各(ge)種常(chang)規操作，包括酶切(qie)、PCR、測(ce)序、連接(jie)和轉化等(deng)試驗(yan)。
質粒(li)小量提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) -常(chang)備(bei)現貨(huo)

NobleRyder NAE02 質粒(li)小量提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) Plasmid Extraction Mini Kit

產品(pin)貨號(hao)：NAE02

產品(pin)名稱(cheng)：質粒(li)小量提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) Plasmid Extraction Mini Kit

英文(wen)名稱(cheng)：Plasmid Extraction Mini Kit

產品(pin)規格(ge)：50T/100T

質粒(li)小量提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) -常(chang)備(bei)現貨(huo)

產品(pin)簡介：

儲(chu)存條件(jian)：酶附件(jian)-20℃，其它(ta)試劑(ji)RT，有效(xiao)期(qi)1年。

具體產品(pin)的參數以(yi)收(shou)到產品(pin)說明書的參數為準

本試(shi)劑盒(he)采用(yong)堿裂解(jie)法(fa)裂解(jie)細(xi)胞(bao)，根(gen)據(ju)離心吸附(fu)柱在高鹽狀(zhuang)態下(xia)特異(yi)性(xing)地結合(he)溶(rong)液(ye)中(zhong)的DNA的(de)原(yuan)理(li)特異(yi)性(xing)提(ti)取(qu)質粒(li)DNA。 離心吸附(fu)柱中(zhong)采用(yong)的矽(gui)基(ji)質材料能高效(xiao)、專(zhuan)壹地吸附(fu)DNA，可最大(da)限(xian)度去除雜(za)質蛋白及(ji)細(xi)胞(bao)中(zhong)其他(ta)有機化(hua)合(he)物。 使用(yong)本試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)取(qu)的(de)質粒(li)DNA可適(shi)用(yong)於各(ge)種常(chang)規操作，包括酶切(qie)、PCR、測(ce)序、連接(jie)和轉化等(deng)試驗(yan)。

使用(yong)前請(qing)先(xian)在漂洗液(ye)中(zhong)加(jia)入(ru)無水(shui)乙(yi)醇，加(jia)入(ru)體積(ji)請(qing)參照瓶體上(shang)的(de)標(biao)簽(qian)。溶液(ye)Ⅰ在(zai)使用(yong)前先(xian)加(jia)入(ru)RNaseA（將(jiang)試(shi)劑(ji)盒(he)中(zhong)提(ti)供的(de) RNaseA 全(quan)部加(jia)入(ru)），混勻(yun)，置於(yu) 2-8℃保存。如非指明(ming)，所(suo)有離心步(bu)驟(zhou)均為使用(yong)臺(tai)式(shi)離心機(ji)在室(shi)溫下(xia)離心。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)（僅供參考(kao)）:

1. 取(qu) 1-5mL 細(xi)菌培(pei)養(yang)物，12000rpm 離心 1min，盡(jin)量吸除上(shang)清(qing)（菌液(ye)較(jiao)多時可以通過(guo)多次(ci)離心將(jiang)菌體沈(chen)澱收集(ji)到壹個離心管(guan)中(zhong)）。

2. 向留有菌體沈(chen)澱的離心管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru)250μL溶液(ye)Ⅰ(請先(xian)檢查(zha)是否已加(jia)入(ru)RNase A），使用(yong)移液器或旋(xuan)渦(wo)振(zhen)蕩(dang)器(qi)che底懸浮細(xi)菌細(xi)胞(bao)沈(chen)澱。註意(yi)：如果菌塊(kuai)未(wei)che底混勻(yun)，會(hui)影響(xiang)裂解(jie)導(dao)致質粒(li)提(ti)取(qu)量(liang)和純度偏低(di)。

3. 向離心管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru)250μL溶液(ye)Ⅱ，溫和地上下(xia)翻(fan)轉6-8次(ci)使菌體充(chong)分(fen)裂解(jie)。註(zhu)意(yi)：混勻(yun)壹定要溫和，以免汙(wu)染(ran)細(xi)菌基(ji)因(yin)組(zu) DNA，此(ci)時菌液(ye)應變(bian)得(de)清(qing)亮(liang)粘(zhan)稠(chou)，作(zuo)用(yong)時間(jian)不(bu)要超過(guo) 5min，以免質粒(li)受(shou)到破(po)壞(huai)。

4. 向離心管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru)350μL溶液(ye)Ⅲ，立即(ji)溫和地上下(xia)翻(fan)轉6-8次(ci)，充分(fen)混(hun)勻(yun)，此(ci)時會(hui)出(chu)現白(bai)色(se)絮狀(zhuang)沈澱，12000rpm離心10min，用(yong)移液器小心地將(jiang)上(shang)清(qing)轉(zhuan)移到另壹個幹(gan)凈的離心管(guan)中(zhong)，盡(jin)量不(bu)要吸出(chu)沈(chen)澱。註意(yi)：溶液(ye)Ⅲ加(jia)入(ru)後(hou)應立即(ji)混合(he)，避(bi)免產生局(ju)部(bu)沈(chen)澱。如果上清(qing)中(zhong)還(hai)有微小白色(se)沈(chen)澱，可再次(ci)離心後(hou)取(qu)上(shang)清(qing)。

5. 取(qu)上(shang)壹步(bu)上清(qing)，加(jia)入(ru)0.4倍(bei)體積(ji)無水(shui)乙(yi)醇，充(chong)分混勻(yun)。（體積(ji)過(guo)多可分兩(liang)次(ci)混合(he)，然(ran)後(hou)上柱）。

6. 將(jiang)上(shang)壹步(bu)混合(he)液(ye)加(jia)入(ru)吸附(fu)柱中(zhong)(吸附(fu)柱加(jia)入(ru)收集(ji)管中(zhong))，室(shi)溫放(fang)置2min，12000rpm離心1min，倒(dao)掉收集(ji)管中(zhong)的廢(fei)液(ye)，將(jiang)吸附(fu)柱重新放(fang)回收集(ji)管中(zhong)(如果為了提(ti)高得(de)率，可將(jiang)收(shou)集(ji)管中(zhong)的液(ye)體加(jia)入(ru)吸附(fu)柱再次(ci)吸附(fu)壹次(ci))。

7. 向吸附(fu)柱中(zhong)加(jia)入(ru)750μL漂洗液(ye)(使用(yong)前請(qing)先(xian)檢查(zha)是否已加(jia)入(ru)無水(shui)乙(yi)醇)，12000rpm離心1min，棄(qi)廢(fei)液(ye)，將(jiang)吸附(fu)柱放(fang)入(ru)收集(ji)管中(zhong)。

8. 向吸附(fu)柱中(zhong)加(jia)入(ru)700μL漂洗液(ye)，12000rpm離心1min，棄(qi)廢(fei)液(ye)，將(jiang)吸附(fu)柱放(fang)入(ru)收集(ji)管中(zhong)。

9. 12000rpm 離心2min，將(jiang)吸附(fu)柱敞口(kou)置於(yu)室(shi)溫或50℃溫箱放(fang)置數分(fen)鐘(zhong)，目(mu)的(de)是將(jiang)吸附(fu)柱中(zhong)殘(can)余的(de)漂洗液(ye)去(qu)除，否則漂洗液(ye)中(zhong)的乙(yi)醇會(hui)影響(xiang)後(hou)續的(de)實(shi)驗(yan)，如(ru)酶切(qie)、PCR等(deng)。

10. 將(jiang)吸附(fu)柱放(fang)入(ru)壹個幹(gan)凈的離心管(guan)中(zhong)，向吸附(fu)膜(mo)中(zhong)央懸空滴(di)加(jia)50-200μL經(jing)65℃水(shui)浴(yu)預(yu)熱(re)的洗脫(tuo)液(ye)，室(shi)溫放(fang)置2min，12000rpm離心1min。

11. 為了增(zeng)加(jia)質粒(li)的(de)回收效(xiao)率(lv)，可將(jiang)得(de)到的洗脫(tuo)液(ye)重新加(jia)入(ru)吸附(fu)柱中(zhong)，室(shi)溫放(fang)置 2min，12000rpm 離心1min。

質粒(li)小量提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) -常(chang)備(bei)現貨(huo) 

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

1. 使用(yong)前請(qing)先(xian)檢查(zha)溶液(ye)Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現混(hun)濁，如有混濁現象(xiang)，可在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)加(jia)熱(re)幾分(fen)鐘(zhong)，待溶液恢復澄清(qing)後(hou)再使用(yong)。溶液(ye)Ⅱ、溶(rong)液(ye)Ⅲ、漂洗液(ye)使用(yong)後(hou)應立即(ji)擰(ning)緊(jin)蓋子(zi)。

2. 洗脫(tuo)緩(huan)沖液體積(ji)不(bu)應少於50μL，體積(ji)過(guo)小影響(xiang)回收效(xiao)率(lv)；洗脫(tuo)液(ye)的pH值對(dui)洗脫(tuo)效(xiao)率(lv)也(ye)有影晌，若(ruo)需(xu)要用(yong)水(shui)做洗脫(tuo)液(ye)應保證其pH值在(zai)8.0左(zuo)右(you)(可用(yong)NaOH將(jiang)水(shui)的(de)pH值調至(zhi)此(ci)範圍)，pH 值低(di)於(yu)7.0會(hui)降(jiang)低(di)洗脫(tuo)效(xiao)率(lv)，DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降(jiang)解(jie)。

3. 如果所(suo)提(ti)質粒(li)為低拷(kao)貝(bei)質粒(li)或(huo)大(da)於(yu)10kb的(de)大(da)質粒(li)，應加(jia)大(da)菌體使用(yong)量，使用(yong)5-10mL過(guo)夜(ye)培養(yang)物，同(tong)時按照比例增(zeng)加(jia)溶(rong)液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用(yong)量，吸附(fu)和洗脫(tuo)時(shi)可以適(shi)當的延(yan)長時間，以(yi)增(zeng)加(jia)提(ti)取(qu)效(xiao)率(lv)。

4. DNA 濃度及純(chun)度檢測(ce)：得(de)到的質粒(li)DNA純(chun)度與(yu)樣品(pin)保存時間、操作(zuo)過(guo)程中(zhong)的剪(jian)切(qie)力(li)等(deng)因(yin)素有關。得(de)到的 DNA 可用(yong)瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)疑(yi)膠(jiao)電泳和紫(zi)外(wai)分(fen)光光度計檢(jian)測(ce)濃度與(yu)純(chun)度。DNA 應在OD260處(chu)有顯著吸收(shou)峰(feng)，OD260值(zhi)為1相(xiang)當於大(da)約(yue)50ug/mL雙鏈DNA、40ug/mL單鏈DNA。OD260/OD280比值(zhi)應為 1.7-1.9，如果洗脫(tuo)時(shi)不(bu)使用(yong)洗脫(tuo)緩(huan)沖液，而使用(yong)去離子(zi)水(shui)，比值(zhi)會(hui)偏(pian)低(di)，因(yin)為pH值和離子(zi)存在會(hui)影響(xiang)吸光值(zhi)，但(dan)並(bing)不(bu)表(biao)示(shi)純(chun)度低。

產品(pin)訂購(gou)信息(xi)：

NAE02  質粒(li)小量提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) Plasmid Extraction Mini Kit  50T

NAE02  質粒(li)小量提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒(he) Plasmid Extraction Mini Kit  100T