過氧化(hua)氫(qing)酶（Catalase，CAT）試劑盒說(shuo)明書

分光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管(guan)/48 樣(yang)

正式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必取 2-3 個(ge)預(yu)期差(cha)異較(jiao)大(da)的(de)樣(yang)本做預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意(yi)義：

CAT(EC 1.11.1.6)廣(guang)泛存在(zai)於動(dong)物、植(zhi)物、微(wei)生物和培養(yang)細(xi)胞中(zhong)，是(shi)最主要(yao)的(de)H2O2 清除(chu)酶，在(zai)活(huo)性氧清(qing)除系統中(zhong)具(ju)有重(zhong)要(yao)作(zuo)用。

測(ce)定(ding)原(yuan)理：

H2O2 在(zai) 240nm 下(xia)有特征吸(xi)收峰，CAT 能(neng)夠(gou)分解H2O2，使反(fan)應(ying)溶(rong)液(ye) 240nm 下(xia)的(de)吸(xi)光(guang)度隨(sui)反(fan)應(ying)時間(jian)而(er)下降，根(gen)據吸(xi)光(guang)度的(de)變化(hua)率可計算出(chu)CAT 活(huo)性。

組成：

過(guo)氧化(hua)氫(qing)酶試劑盒 抗(kang)逆(ni)

自備儀(yi)器(qi)和用(yong)品：

紫外分光(guang)光(guang)度計(ji)、臺(tai)式(shi)離(li)心機(ji)、可調式移(yi)液器(qi)、1ml 石(shi)英(ying)比(bi)色皿、研(yan)缽、冰(bing)和蒸(zheng)餾水(shui)

粗(cu)酶液提取：

1、細(xi)菌、細胞或組織樣(yang)品的(de)制(zhi)備(bei)：

細菌或培養(yang)細(xi)胞：先收集(ji)細菌或細胞到(dao)離(li)心管(guan)內(nei)，離(li)心後(hou)棄(qi)上清；按照(zhao)細(xi)菌或細胞數(shu)量(liang)（104 個(ge)）：提(ti)取(qu)液(ye)體積（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議 500 萬細(xi)菌或細胞加入 1ml 提(ti)取液(ye)），超(chao)聲(sheng)波破碎細菌或細胞（冰(bing)浴(yu)，功率 20％或 200W，超聲 3s，間(jian)隔 10s，重(zhong)復 30 次）；8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

組織：按(an)照組織質量(liang)（g）：提(ti)取(qu)液(ye)體積(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例(li)（建(jian)議稱(cheng)取約 0.1g 組織，加入 1ml 提(ti)取液(ye)），進行冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)。8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測(ce)。

2、血(xue)清（漿(jiang)）樣(yang)品：直接(jie)檢(jian)測(ce)。

測(ce)定(ding)步(bu)驟(zhou)：

1、分光(guang)光(guang)度計(ji)預(yu)熱 30min 以(yi)上(shang)，調節波(bo)長(chang)至(zhi) 240nm 處，蒸餾(liu)水(shui)調(tiao)零(ling)。

2、測(ce)定(ding)前(qian)將CAT 檢(jian)測(ce)工作(zuo)液 37℃（哺乳動(dong)物）或 25℃（其它(ta)物種(zhong)）水(shui)浴(yu) 10min。

3、在(zai) 1ml 石(shi)英(ying)比(bi)色皿中(zhong)加入 35μl 樣(yang)本和 1ml 工作(zuo)液，混勻(yun)，室溫下立(li)即(ji)測(ce)定(ding) 240nm 下(xia)的(de)初始(shi)吸(xi)光(guang)值(zhi)A1和 1min 後(hou)的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)A2，計(ji)算ΔA=A1-A2

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：出(chu)現(xian)負值(zhi)怎(zen)麽辦(ban)？

檢(jian)查反(fan)應(ying)過程是(shi)否(fou)產(chan)生氣泡(pao)，氣泡(pao)多(duo)說(shuo)明酶活(huo)性太(tai)高(gao)，氣泡(pao)影響(xiang)產(chan)生了(le)負值(zhi)，可以(yi)將樣(yang)本用提(ti)取(qu)液稀釋 10 倍(bei)後(hou)再檢(jian)測(ce)。如(ru)果(guo)稀釋樣(yang)本或反(fan)應(ying)體系沒(mei)有產(chan)生氣泡(pao)仍然(ran)出(chu)現(xian)較(jiao)小的(de)負值(zhi)，說(shuo)明該樣(yang)本測(ce)不(bu)到(dao)該酶活(huo)。

CAT 活(huo)性計算：

1、血(xue)清（漿(jiang)）CAT 活(huo)力的(de)計算:

單位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)毫升血(xue)清（漿(jiang)）每(mei)分鐘催(cui)化(hua) 1nmol H2O2 降(jiang)解定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力單位(wei)。

CAT(nmol/min/ml)= [ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣(yang)÷T=678×ΔA 2、組織、細(xi)菌或細胞中(zhong) CAT 活(huo)力計算：

（1） 按樣(yang)本蛋(dan)白濃度計算：

單位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)mg 組織蛋(dan)白每分鐘催(cui)化(hua) 1nmol H2O2 降(jiang)解定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力單位(wei)。

CAT(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣(yang)×Cpr) ÷T=678×ΔA÷Cpr

（2） 按樣(yang)本鮮重(zhong)計(ji)算：

單位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei)g 組織每(mei)分鐘催(cui)化(hua) 1nmol H2O2 降(jiang)解定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力單位(wei)。

CAT(nmol/min /g 鮮重(zhong))=[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)÷T=678×ΔA÷W

（3）   按(an)細菌或細胞密度計算：

單位(wei)的(de)定(ding)義(yi)：每(mei) 1 萬個(ge)細(xi)菌或細胞每(mei)分鐘催(cui)化(hua) 1nmol H2O2 降(jiang)解定(ding)義(yi)為(wei)壹(yi)個(ge)酶活(huo)力單位(wei)。

CAT(nmol/min /10⁴ cell)＝[ΔA×V 反(fan)總(zong)÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總）÷T =1.356×ΔA

V 反(fan)總(zong)：反(fan)應(ying)體系總體積，1.035×10^-3 L；ε：H2O2 摩爾消光(guang)系數(shu)，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：比(bi)色皿光(guang)徑， 1cm；V 樣(yang)：加入樣(yang)本體積，0.035 ml；V 樣(yang)總：加入提(ti)取液(ye)體積，1 ml；T：反(fan)應(ying)時間(jian)，1 min；W：樣(yang)本質量(liang)，g；Cpr：樣(yang)本蛋(dan)白質濃(nong)度(du)，mg/ml；500：細(xi)胞或細菌總數(shu)，500 萬。

過(guo)氧化(hua)氫(qing)酶試劑盒 抗(kang)逆(ni)