苯bing氨(an)酸(suan)解氨(an)酶(mei)（Phenylalnine ammonialyase，PAL）試劑盒說明(ming)書

分(fen)光(guang)光度(du)法 50 管/48 樣

苯bing氨(an)酸(suan)解氨(an)酶(mei)試劑盒 抗逆(ni)

正式(shi)測(ce)定(ding)前務必(bi)取 2-3 個(ge)預期差(cha)異(yi)較大(da)的樣(yang)本(ben)做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義：

PAL（EC4. 3 1 5）廣(guang)泛(fan)存(cun)在(zai)於(yu)各種植物和少數微生(sheng)物中(zhong)，是植物體內(nei)苯bing烷(wan)類代謝(xie)的關(guan)鍵(jian)酶，與(yu)壹(yi)些(xie)重要的次(ci)生(sheng)物質如(ru)木(mu)質(zhi)素、異(yi)黃(huang)酮(tong)類植保素、黃(huang)酮(tong)類色素等合(he)成密切(qie)相關(guan)，在(zai)植(zhi)物正常生(sheng)長(chang)發育(yu)和抵禦(yu)病(bing)菌(jun)侵(qin)害過(guo)程中(zhong)起(qi)重要作用(yong)。

測(ce)定(ding)原理：

PAL 催(cui)化L-苯bing氨(an)酸(suan)裂(lie)解(jie)為(wei)反(fan)式(shi)肉(rou)桂酸(suan)和氨(an)，反(fan)式(shi)肉(rou)桂酸(suan)在(zai) 290nm 處(chu)有(you)最大(da)吸(xi)收值(zhi)，通過測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)值(zhi)升(sheng)高速(su)率計(ji)算(suan)PAL 活(huo)性。

組(zu)成：

試劑二：粉(fen)劑×3 瓶(ping)，4℃保(bao)存(cun)。臨用(yong)前每(mei)瓶加(jia)入 4ml 蒸餾(liu)水(shui)水(shui)充分溶(rong)解待(dai)用(yong)；用(yong)不完(wan)的試劑 4℃保存(cun)；

自備(bei)儀(yi)器和用(yong)品：

紫外分光光度(du)計(ji)、水(shui)浴鍋(guo)、臺式(shi)離心(xin)機、可(ke)調式移液器、1 ml 石英比(bi)色皿(min)、研(yan)缽、冰和蒸餾(liu)水(shui)。

粗(cu)酶(mei)液(ye)提取(qu)：

按照組織質(zhi)量(liang)（g）：提取(qu)液體積(ji)(ml)為 1：5~10 的比(bi)例（建議稱(cheng)取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織，加(jia)入 1ml 提取(qu)液），進行(xing)冰浴勻(yun)漿。10000g 4℃離心(xin) 10min，取上(shang)清，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟：

混勻(yun)，30℃ 準確(que)水(shui)浴30min

混(hun)勻(yun)，靜置(zhi) 10min 後(hou)，290nm 處(chu)記錄測(ce)定(ding)管吸(xi)光(guang)值(zhi) A1 和對照管吸(xi)光(guang)值(zhi)A2，△A=A1-A2。註(zhu)意：對照管只要做壹管

PAL 活(huo)性計(ji)算(suan)：

（1）  按(an)蛋白(bai)濃(nong)度計算(suan)

單(dan)位(wei)定義(yi)：每mg 組織蛋白(bai)在(zai)每(mei)ml 反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)每(mei)min 使 290nm 下(xia)吸(xi)光(guang)值(zhi)變化 0.1 為壹個(ge)酶活(huo)性單(dan)位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V 反(fan)總÷（Cpr× V 樣）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

（2）  按(an)樣(yang)本(ben)鮮重(zhong)計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)定義(yi)：每g 組織每(mei)ml 反(fan)應(ying)體系(xi)中(zhong)每(mei)min 使 290nm 下(xia)吸(xi)光(guang)值(zhi)變化 0.1 為壹個(ge)酶活(huo)性單(dan)位。

PAL（U/g 鮮重(zhong)）＝ΔA×V 反(fan)總÷(W× V 樣÷V 樣(yang)總)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V 反(fan)總：反(fan)應(ying)體系(xi)總體積(ji)，1.04ml； V 樣：加(jia)入樣本(ben)體積(ji)，0.02ml；V 樣總：加(jia)入提取(qu)液體積(ji)，1 ml；T：反(fan)應(ying)時(shi)間，30 min；Cpr：樣本(ben)蛋白(bai)質(zhi)濃度，mg/ml；W：樣本(ben)質量(liang)，g；

苯bing氨(an)酸(suan)解氨(an)酶(mei)試劑盒 抗逆(ni)