Pro 廣(guang)泛(fan)存在(zai)於(yu)動(dong)物、植物、微生(sheng)物和(he)培(pei)養(yang)細胞中(zhong)，逆(ni)境條件下，植物體(ti)內(nei)Pro 含量顯(xian)著(zhu)增加。Pro 增加量在(zai)壹(yi)定(ding)程度(du)上(shang)反映了抗逆(ni)性，抗旱性強的(de)品種(zhong)往往(wang)積(ji)累(lei)較多的脯(pu)an酸。因(yin)此(ci)，脯(pu)an酸增(zeng)加量可(ke)以(yi)作(zuo)為(wei)抗(kang)逆育種(zhong)的生(sheng)理指標(biao)之(zhi)壹(yi)。
脯(pu)an酸PRO含量測(ce)定(ding)試劑盒 抗逆

脯(pu)an酸（PRO）含量測(ce)定(ding)試劑盒說(shuo)明(ming)書(shu)

分光光度(du)法(fa) 50 管/48 樣(yang)

脯(pu)an酸PRO含量測(ce)定(ding)試劑盒 抗逆

正(zheng)式測(ce)定(ding)前務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預期差異較大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義(yi)：

Pro 廣(guang)泛(fan)存在(zai)於(yu)動(dong)物、植物、微生(sheng)物和(he)培(pei)養(yang)細胞中(zhong)，逆(ni)境條件下，植物體(ti)內(nei)Pro 含量顯(xian)著(zhu)增加。Pro 增加量在(zai)壹(yi)定(ding)程度(du)上(shang)反映了抗逆(ni)性，抗旱性強的(de)品種(zhong)往往(wang)積(ji)累(lei)較多的脯(pu)an酸。因(yin)此(ci)，脯(pu)an酸增(zeng)加量可(ke)以(yi)作(zuo)為(wei)抗(kang)逆育種(zhong)的生(sheng)理指標(biao)之(zhi)壹(yi)。

測(ce)定(ding)原理：

用磺(huang)基(ji)水楊(yang)酸（SA）提(ti)取Pro，加(jia)熱(re)處(chu)理後，Pro 與酸性茚三(san)酮溶液(ye)反應(ying)生(sheng)成紅色(se)；加甲(jia)苯(ben)萃(cui)取後，在 520nm 測(ce)定(ding)吸光度(du)。

組(zu)成(cheng)：

自(zi)備(bei)儀(yi)器(qi)和用(yong)品：

可(ke)見(jian)分光光度(du)計(ji)、水浴鍋(guo)、臺式(shi)離(li)心機(ji)、可(ke)調(tiao)式移液(ye)器(qi)、1 ml 玻(bo)璃比色(se)皿、冰(bing)乙(yi)酸 50ml、甲(jia)苯(ben) 50ml、研(yan)缽(bo)、冰和(he)蒸(zheng)餾水。

樣品測(ce)定(ding)的準(zhun)備(bei)：

1、細(xi)菌(jun)、細(xi)胞(bao)或(huo)組織(zhi)樣品的(de)制備(bei)：

細(xi)菌(jun)或(huo)培(pei)養(yang)細胞：先收集(ji)細菌(jun)或(huo)細胞(bao)到離(li)心管(guan)內(nei)，離(li)心後棄上(shang)清(qing)；按照細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)數量(liang)（10⁴ 個(ge)）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)（ml）為(wei) 500~1000：1 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)加入 1ml 提(ti)取液(ye)），超(chao)聲(sheng)波破碎細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)（冰浴(yu)，功(gong)率(lv) 20％或(huo) 200W，超(chao)聲(sheng) 3s，間隔 10s，重(zhong)復 30 次）；之(zhi)後置 95℃水浴振(zhen)蕩(dang)提(ti)取 10min；10000g， 25℃離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，冷(leng)卻(que)後待測(ce)。

組(zu)織(zhi)：按照(zhao)組(zu)織(zhi)質量（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g 組織(zhi)，加入 1ml 提(ti)取液(ye)），進(jin)行(xing)勻漿(jiang)；之(zhi)後置 95℃水浴振(zhen)蕩(dang)提(ti)取 10min；10000g，25℃離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，冷(leng)卻(que)後待測(ce)。

2、血(xue)清(qing)（漿(jiang)）樣品：按(an)照血(xue)清(qing)（漿(jiang)）體積(ji)（ml）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)(ml)為(wei) 1：5~10 的(de)比例(li)（建(jian)議(yi)取 0.1ml 血(xue)清(qing)（漿(jiang)）加入 1ml 提(ti)取液(ye)），充(chong)分混(hun)勻，之(zhi)後置 95℃水浴振(zhen)蕩(dang)提(ti)取 10 分鐘(zhong)，10000g，25℃離(li)心 10 分鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)，冷(leng)卻(que)後待測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟：

1、分光光度(du)計(ji)預(yu)熱(re) 30min 以(yi)上(shang)，調節(jie)波長至 520nm，蒸(zheng)餾水調零(ling)。

2、樣(yang)本(ben)測(ce)定(ding)：

取 0.5ml 樣(yang)本(ben)+0.5ml 試劑壹(yi)+0.5ml 試(shi)劑二(er) 於(yu)有蓋試管(guan)中(zhong)，置 95℃水浴中(zhong)保溫 30min（蓋緊(jin)，防(fang)止水分散(san)失(shi)），每 10min 振(zhen)蕩(dang)壹(yi)次。

待冷(leng)卻(que)後，在試(shi)管中(zhong)加(jia)入 1ml 試劑三，振(zhen)蕩(dang) 30s，靜(jing)置片刻，使色(se)素(su)轉(zhuan)至試劑三中(zhong)；吸(xi)取 0.8ml-1ml 上(shang)層(ceng)溶液(ye)於(yu) 1ml 玻(bo)璃比色(se)皿中(zhong)，於(yu) 520nm 波長處(chu)比色(se)，記錄(lu)吸光值 A。

Pro 含量計(ji)算：

1、典型(xing)回(hui)歸方程(cheng) y = 0.0521x - 0.0021 (x 為(wei)脯(pu)an酸含量，μg/ml；y 為(wei)吸(xi)光值A)

2、按照血清(qing)（漿(jiang)）體積(ji)計算(suan)

Pro 含量(μg/ml)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2）=192×(A+0.0021)

3、按(an)照蛋(dan)白濃度(du)計(ji)算(suan)

Pro 含量(μg/mg prot)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A+0.0021)÷Cpr

4、按(an)照樣本(ben)質量計(ji)算

Pro 含量(µg/g 鮮(xian)重)= [(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A+0.0021) ÷W

5、按照細菌(jun)或(huo)細胞(bao)密(mi)度(du)計(ji)算(suan)

Pro 含量(μg/10⁴ cell)=[(A+0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A+0.0021)

V1：加(jia)入反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)樣(yang)本(ben)體積(ji)，0.5ml；V2：加入提(ti)取液(ye)體(ti)積(ji)，1 ml；V3：加入血清(qing)（漿(jiang)）體積(ji)，0.1 ml； Cpr：樣本(ben)蛋(dan)白質濃度(du)，mg/ml；W：樣(yang)本(ben)質量，g；500：細(xi)菌(jun)或(huo)細胞(bao)總(zong)數，500 萬。

註(zhu)意：最di檢(jian)測(ce)限為(wei) 1μg/ml 或(huo) 1μg /g 鮮重(zhong) 或(huo) 0.01μg /mg prot

脯(pu)an酸PRO含量測(ce)定(ding)試劑盒 抗逆