堿性(xing)條(tiao)件下，蛋白(bai)質中半(ban)胱(guang)an酸、胱(guang)an酸、色(se)an酸、酪an酸以及肽鍵，能將(jiang) Cu2+還原成(cheng)Cu+；2 分(fen)子的BCA 與(yu)Cu+結(jie)合(he)，生成(cheng)紫(zi)色(se)絡(luo)合(he)物，在 540-595nm 有吸(xi)收(shou)峰，562nm 處(chu)吸(xi)收(shou)峰zui強(qiang)。
BCA 法(fa)蛋白(bai)含量測定(ding)試劑(ji)盒(he)-常備(bei)現貨(huo)

BCA 法(fa)蛋白(bai)含量測定(ding)試劑(ji)盒(he)說(shuo)明(ming)書

分光(guang)光度(du)法(fa) 50 管/48 樣(yang)

BCA 法(fa)蛋白(bai)含量測定(ding)試劑(ji)盒(he)-常備(bei)現貨(huo)

正式(shi)測定(ding)之(zhi)前選擇 2-3 個預(yu)期差(cha)異(yi)大的樣(yang)本(ben)做預(yu)測定(ding)。測定(ding)意義：

樣品可(ke)溶(rong)性(xing)蛋白(bai)質含量常常用(yong)於(yu)酶活(huo)性(xing)計算(suan)。此外(wai)，可(ke)溶(rong)性(xing)蛋白(bai)質含量也用(yong)於(yu)食品等質量分析。

測定(ding)原理：

堿性(xing)條(tiao)件下，蛋白(bai)質中半(ban)胱(guang)an酸、胱(guang)an酸、色(se)an酸、酪an酸以及肽鍵，能將(jiang) Cu²⁺還原(yuan)成(cheng)Cu⁺；2 分子的BCA 與(yu)Cu⁺結(jie)合(he)，生成(cheng)紫(zi)色(se)絡(luo)合(he)物，在 540-595nm 有吸(xi)收(shou)峰，562nm 處(chu)吸(xi)收(shou)峰zui強(qiang)。

自備儀器和(he)用品：

臺(tai)式離(li)心機(ji)、恒溫水浴(yu)鍋、可(ke)見(jian)分(fen)光光(guang)度(du)計、移(yi)液器(qi)、1 ml 玻璃比(bi)色皿(min)和(he)蒸餾水(shui)

組(zu)成(cheng)：

工(gong)作(zuo)液(ye)配(pei)制(zhi)：臨(lin)用(yong)前請根(gen)據(ju)擬(ni)用(yong)工(gong)作(zuo)液(ye)體(ti)積（樣本(ben)數×1 ml），將(jiang)試劑(ji)A 和(he)B 按照 50：1 的(de)比(bi)例(li)混(hun)合(he)，蓋(gai)緊(jin)後(hou)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)。

樣品中可(ke)溶(rong)性(xing)蛋白(bai)質提(ti)取：

1、液體(ti)樣品：澄(cheng)清無(wu)色(se)液體(ti)樣品可(ke)以直(zhi)接(jie)測定(ding)。。

2、組(zu)織(zhi)樣(yang)品：按照組(zu)織(zhi)質(zhi)量（g）：提(ti)取液(ye)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi)稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru) 1ml提(ti)取液(ye)（自備，根(gen)據(ju)需(xu)要選用酶提(ti)取緩(huan)沖液或者蒸(zheng)餾水(shui)或(huo)者生理鹽水）冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿，8000g，4℃離心 10min，取上清(qing)，即待測液(ye)。

3 、細(xi)菌、真(zhen)菌：按照細(xi)胞數量（104 個）： 細(xi)菌、細(xi)胞：按照細(xi)胞數量（104 個）：提(ti)取液(ye)體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建(jian)議(yi) 500 萬細(xi)胞加(jia)入(ru) 1ml 提(ti)取液(ye)），冰浴(yu)超聲(sheng)波破(po)碎(sui)細(xi)胞（功(gong)率 300w，超聲 3秒(miao)，間隔 7 秒(miao)，總(zong)時(shi)間 3min）；然後(hou) 8000g，4℃，離(li)心(xin) 10min，取上清(qing)置(zhi)於(yu)冰上待測。

測定(ding)步(bu)驟(zhou)：

分光(guang)光度(du)計/酶標(biao)儀預熱(re) 30 min，調(tiao)節(jie)波(bo)長到(dao) 562 nm，蒸餾水(shui)調(tiao)零(ling)。

工(gong)作(zuo)液(ye)置(zhi)於(yu) 60℃水浴(yu)預熱(re) 30 min。

註意(yi)：空白(bai)管和(he)標準管只(zhi)需(xu)要做(zuo)壹次。計算(suan)公(gong)式：

Cpr (mg/ml) = C 標準品×（A 測定(ding)管－A 空(kong)白(bai)管）÷（A 標(biao)準管－A 空(kong)白(bai)管）

= 0.5×（A 測定(ding)管－A 空(kong)白(bai)管）÷（A 標(biao)準管－A 空(kong)白(bai)管）

Cpr (mg/g)= C 標準品×（A 測定(ding)管－A 空(kong)白(bai)管）÷（A 標(biao)準管－A 空(kong)白(bai)管）÷ W

= 0.5×（A 測定(ding)管－A 空(kong)白(bai)管）÷（A 標(biao)準管－A 空(kong)白(bai)管）÷ W W: 樣(yang)本(ben)質量，g

註意(yi)事項：

BCA 法(fa)蛋白(bai)含量測定(ding)試劑(ji)盒(he)，適用(yong)於(yu)測定(ding)蛋白(bai)濃度(du)在 20-5000μg/ml 樣(yang)品。測定(ding)前取 1-2 個(ge)樣做(zuo)預實(shi)驗(yan)，若A 測定(ding)管－A 空(kong)白(bai)管﹥1.5，需(xu)將(jiang)樣本(ben)用提(ti)取液(ye)稀釋後(hou)再(zai)測定(ding)，以確(que)保(bao)測定(ding)的準確(que)性(xing)。

BCA 法(fa)蛋白(bai)含量測定(ding)試劑(ji)盒(he)-常備(bei)現貨(huo)