與(yu)傳統(tong) Trizol 提取方(fang)法(fa)相(xiang)比，RNAzol Plus 不(bu)需(xu)要(yao)使用(yong)氯仿(fang)進(jin)行分(fen)層(ceng)，操作更(geng)簡單(dan)，且(qie)全(quan)程可(ke)在(zai)常(chang)溫(wen)進(jin)行。
RNAzol Plus Reagent是(shi)Trizol的升級版——免(mian)氯仿(fang)，具(ju)有和(he)Trizol類似(si)的適用範圍，可(ke)以(yi)從(cong)動物(wu)組織、培養(yang)細(xi)胞(bao)、植物(wu)材料(liao)、真菌(jun)、細(xi)菌(jun)及各(ge)種微生(sheng)物(wu)等(deng)樣品(pin)中(zhong)提(ti)取總(zong)RNA。
諾(nuo)博(bo)萊德(de) RNAzol Plus Reagent 核酸提取

諾博(bo)萊(lai)德(de) RNAzol Plus Reagent  核酸提取

免(mian)氯仿(fang)總(zong) RNA 提取試(shi)劑RNAzol Plus Reagent (NO Chloroform) 

目錄(lu)號(hao)：91021

產品(pin)內(nei)容

自(zi)備試(shi)劑

異丙(bing)醇(chun)、RNase-Free H2O、75%乙(yi)醇(chun)（使用(yong) RNase-Free H2O 配制）

保存條(tiao)件

在(zai)室(shi)溫下能穩(wen)定保存12個月(yue)。盡管如此(ci)，為(wei)達到(dao)最(zui)佳(jia)效(xiao)果(guo)，我(wo)們(men)建議保(bao)存在(zai)2 ~ 8℃。

具體產品(pin)的參數(shu)以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)的參數(shu)為(wei)準(zhun)

產品(pin)簡(jian)介

與(yu)傳統(tong) Trizol 提取方(fang)法(fa)相(xiang)比，RNAzol Plus 不(bu)需(xu)要(yao)使用(yong)氯仿(fang)進(jin)行分(fen)層(ceng)，操作更(geng)簡單(dan)，且(qie)全(quan)程可(ke)在(zai)常(chang)溫(wen)進(jin)行。

RNAzol Plus Reagent是Trizol的升級版——免(mian)氯仿(fang)，具(ju)有和(he)Trizol類似(si)的適用範圍，可(ke)以(yi)從(cong)動物(wu)組織、培養(yang)細(xi)胞(bao)、植物(wu)材料(liao)、真菌(jun)、細(xi)菌(jun)及各(ge)種微生(sheng)物(wu)等(deng)樣品(pin)中(zhong)提(ti)取總(zong)RNA。

本產(chan)品(pin)提取的 RNA 沒有 DNA 和(he)蛋(dan)白的汙染，可(ke)以(yi)直接(jie)用(yong)於 cDNA 克隆、RT-qPCR 檢(jian)測、mRNA 純(chun)化、體外翻譯(yi)、Northern blotting 雜(za)交、高(gao)通量(liang)測(ce)序(xu)等(deng)各(ge)種分子(zi)生(sheng)物(wu)學實驗。

RNAzol Plus 既可(ke)用(yong)於(yu)小(xiao)量樣本(ben)（50-100mg 組(zu)織、5×10⁶ 細胞(bao)）的總RNA 提(ti)取，又(you)可(ke)用(yong)於(yu)大(da)量樣本(ben)（≥1g組(zu)織、≥10⁷細胞(bao)）的總RNA提(ti)取。

註(zhu)意(yi)事項

1) RNA在(zai)裂解液RNAzol Plus中(zhong)時(shi)不(bu)會(hui)被(bei)RNase降解，但提(ti)取後繼續處(chu)理過程中(zhong)應使用(yong)不(bu)含RNase的吸(xi)頭(tou)，建議直接(jie)購(gou)買GeneBetter商(shang)品(pin)化(hua)的RNase-Free的吸(xi)頭(tou)。研(yan)缽用(yong)水(shui)徹di洗凈，在(zai)150℃烘(hong)幹即(ji)可(ke)。

2) 樣品(pin)應避免(mian)反復(fu)凍(dong)融，否則會(hui)影(ying)響(xiang) RNA 的提取得率和(he)質量(liang)。

3) 樣品(pin)加(jia)入裂解液RNAzol Plus勻漿(jiang)後，樣品(pin)可(ke)在(zai)–80℃保(bao)存壹個月(yue)以(yi)上(shang)。

4) 取 RNA 樣本(ben)時(shi)，把(ba)新(xin)鮮組織樣本(ben)浸(jin)入 RNAsafe (RNA樣品(pin)保(bao)存液，91115-100)中(zhong)，可(ke)在(zai) 37℃保(bao)存壹天，在(zai) 25℃保(bao)存壹周，在(zai) 4℃保(bao)存壹個月(yue)，在(zai)-20℃或(huo)者(zhe)–80℃長(chang)期(qi)保存。

操作步驟

提示(shi)：所有離心步驟均需要在(zai)室(shi)溫（15 ~37℃）下進(jin)行，提(ti)取效(xiao)果(guo)更(geng)佳！

1. 材料(liao)處(chu)理：

a．植物(wu)組織（植(zhi)物(wu)、真菌(jun)）：取新(xin)鮮(xian)植(zhi)物(wu)組織在(zai)液氮中(zhong)充(chong)分(fen)研(yan)磨或(huo)將(jiang)植(zhi)物(wu)組織jian碎後在(zai) RNAzol Plus 中(zhong)研(yan)磨。每(mei)20-50mg組(zu)織加(jia)0.5ml裂解液RNAzol Plus，劇(ju)烈(lie)渦旋(xuan)震蕩20 sec，混勻。

b．動物(wu)組織：取新(xin)鮮(xian)或(huo)-70℃凍(dong)存組織，每(mei)15-50mg 組(zu)織加(jia) 0.5ml裂解液 RNAzol Plus，用勻漿(jiang)儀進(jin)行勻漿(jiang)處(chu)理。或(huo)將(jiang)組(zu)織在(zai)液氮中(zhong)磨碎後加(jia)入RNAzol Plus，劇(ju)烈(lie)渦旋(xuan)震蕩 20 sec，混勻。

c． 單(dan)層(ceng)貼壁培養(yang)細(xi)胞(bao)：吸(xi)去培養(yang)液，加(jia)入適量裂解液RNAzol Plus，每(mei)10 cm² 加(jia) 0.5ml 裂解液RNAzol Plus，（例(li)如：3.5cm培養(yang)皿(min)加(jia)0.5ml RNAzol Plus）, 用(yong)移液器反(fan)復(fu)吹(chui)打(da)幾次(ci)，裂解細胞(bao)。

d．細胞(bao)懸液（動物(wu)細胞(bao)、植物(wu)、酵母(mu)、細(xi)菌(jun)）：離心收集(ji)細胞(bao)，棄上(shang)清，每(mei)5×10⁶ 個細(xi)胞(bao)加(jia)0.5ml裂解液RNAzol Plus。加(jia)裂解液 RNAzol Plus 前不(bu)要(yao)洗滌細胞(bao)，以免(mian)降解 mRNA。

e．血(xue)液（血(xue)液、血(xue)漿、血(xue)清）：每(mei) 200 ul（低(di)於 200 ul 時(shi)，可(ke)用(yong) RNase-free H2O 補(bu)足）血(xue)液、血(xue)漿、血(xue)清等(deng)液體樣本(ben)，加(jia)入 0.5 ml RNAzol Plus後，劇(ju)烈(lie)渦旋(xuan)震混勻 。

2. 加(jia)入200 ul RNase-free H2O(RNAzol Plus 體積的0.4倍(bei))，蓋好(hao)管蓋，劇(ju)烈(lie)振(zhen)蕩混勻，室(shi)溫放置5min。

3. 室(shi)溫 12,000 rpm離心15 min，樣品(pin)將(jiang)分(fen)為(wei)二(er)層(ceng)，下層(ceng)沈澱(dian)和(he)上(shang)層(ceng)水(shui)相(xiang)，RNA主要(yao)在(zai)上(shang)層(ceng)水(shui)相(xiang)(約(yue)630 ul)中(zhong)，轉(zhuan)移500 ul水(shui)相(xiang)到(dao)壹新的離心管中(zhong)。

註(zhu)意(yi)：提取微(wei)量(liang)樣本(ben)時(shi)，如果(guo)不(bu)出現分(fen)層(ceng)，則轉(zhuan)移全(quan)部(bu)上(shang)清。

4. 在(zai)得到(dao)的水(shui)相(xiang)溶(rong)液中(zhong)加(jia)入等(deng)體積的異丙(bing)醇(chun)，顛(dian)倒混勻，室(shi)溫放置 10 min。

5. 室(shi)溫 12,000 rpm 離心 10 min，通常(chang)可(ke)以(yi)看(kan)到(dao)白(bai)色(se)沈(chen)澱(dian)，棄(qi)上(shang)清。

（離心前 RNA 沈(chen)澱(dian)通常是(shi)看不(bu)見的，離心後在(zai)管(guan)側(ce)或(huo)管(guan)底成薄(bo)片(pian)狀(zhuang)沈澱(dian)。）

6. 加(jia)入 1ml 75%乙(yi)醇(chun)洗滌沈澱，渦旋(xuan)震蕩 15 sec,讓(rang)沈(chen)澱(dian)懸浮起(qi)來，並上下顛(dian)倒數(shu)次(ci)。

7. 室(shi)溫 12,000 rpm 離心 3 分鐘，倒出上清，註(zhu)意(yi)不(bu)要(yao)倒出沈澱(dian)，剩余的少量(liang)液體短暫(zan)離心，然後用槍頭(tou)吸(xi)出，註(zhu)意(yi)不(bu)要(yao)吸(xi)棄沈(chen)澱。

8. 可(ke)選步驟：重復步驟6和(he)7壹次，可(ke)增(zeng)加(jia)純(chun)度。

9. 室(shi)溫放置約(yue)1分鐘，晾(liang)幹。加(jia)入50~100 ul的RNase-Free ddH2O，吹(chui)打(da)混勻，充(chong)分(fen)溶解RNA。

10. 得到(dao)的RNA，可(ke)立(li)即(ji)用(yong)於(yu)下遊(you)實驗，或(huo)於(yu)-70℃保(bao)存，防止降解。

相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin)：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用於所有qPCR儀)

諾博(bo)萊(lai)德(de) RNAzol Plus Reagent  核酸提取