適(shi)用(yong)於(yu)快(kuai)速提取(qu)各(ge)種(zhong)動物組織(zhi)、細(xi)胞(bao)、昆(kun)蟲(chong)的總 RNA，gDNA 過(guo)濾(lv)器高效(xiao)濾(lv)除(chu) gDNA，RNA 可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu) RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序、RACE 等(deng)。
諾博(bo)萊德 動物組織(zhi)細(xi)胞(bao)昆(kun)蟲(chong)總RNA快(kuai)速提取(qu)試(shi)劑盒

諾博(bo)萊德(de) 動(dong)物組織(zhi)細(xi)胞(bao)昆(kun)蟲(chong)總RNA快(kuai)速提取(qu)試(shi)劑盒

FlashPure Plus Tissue/Cell/Insect Total RNA Mini Kit 動物組織(zhi)/細(xi)胞(bao)/昆(kun)蟲(chong)總 RNA 提(ti)取試(shi)劑盒（帶(dai) gDNA 過(guo)濾(lv)器）

目錄(lu)號(hao)：91218

產品(pin)內(nei)容

自備試(shi)劑

無水(shui)乙醇(chun)

保存(cun)條件

室溫(wen)（15~25℃），有(you)效期(qi) 12 個月。

具體(ti)產品(pin)的參(can)數(shu)以收(shou)到(dao)產品(pin)說(shuo)明(ming)書的參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)

產品(pin)簡(jian)介(jie)

適用(yong)於(yu)快(kuai)速提取(qu)各(ge)種(zhong)動物組織(zhi)、細(xi)胞(bao)、昆(kun)蟲(chong)的總 RNA，gDNA 過(guo)濾(lv)器高效(xiao)濾(lv)除(chu) gDNA，RNA 可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu) RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序、RACE 等(deng)。

產品(pin)特(te)點(dian)

1. 無毒(du)：免(mian)氯(lv)仿、免(mian)β-巰(qiu)基(ji)乙(yi)醇(chun)！

2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效(xiao)：提取(qu)全(quan)過(guo)程(cheng)僅(jin)需(xu) 10 min！

重要提(ti)示(shi)：

① 第(di)壹次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)，請先(xian)在(zai)漂洗液(ye)RW中(zhong)加(jia)入(ru)無水乙醇，詳(xiang)見(jian)標簽。

② 所有(you)離心(xin)步驟均(jun)需要在(zai)室溫(wen)（15~37℃）下(xia)進(jin)行(xing)。

③ 高豐度樣本(ben)（肝(gan)臟、脾(pi)臟、腎臟、胰(yi)腺(xian)、心(xin)臟）的投入(ru)量(liang)減半(ban)。

操作步驟：

1. 動物組織(zhi)、昆(kun)蟲(chong)：

a．電動勻漿：取新(xin)鮮組(zu)織(zhi) 10~20 mg 加入(ru) 350μl的裂解(jie)液(ye)ARL Plus，電動勻漿，直到(dao)無(wu)明(ming)顯(xian)組織(zhi)塊(kuai)即可(ke)。

b．液(ye)氮研(yan)磨(mo)：在(zai)液(ye)氮中(zhong)研(yan)磨(mo)組織成(cheng)細粉(fen)，取(qu)10~20 mg組織(zhi)細(xi)粉加(jia)入(ru)350μl裂解(jie)液(ye)ARL Plus，劇(ju)烈渦(wo)旋(xuan)振蕩20sec，充分裂解(jie)。

註意：裂解(jie) 20~30 mg 組織(zhi)，需要加(jia)入(ru) 600 μl 裂解(jie)液(ye) ARL Plus。

c． 將勻漿後裂解(jie)物13，000 rpm 離心(xin)3min。

d．下(xia)接(jie)步驟 3。

2. 細胞(bao)

a．懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞：收(shou)集(ji)<107懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞到壹個 1.5ml 離心(xin)管；

貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)（培養(yang)皿(min)培養(yang)）：完(wan)quan吸棄(qi)培養(yang)基(ji)後，直接(jie)在(zai)培養(yang)皿(min)中加入裂解(jie)液(ye)ARL Plus進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua)、裂解(jie)；

貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)（細胞瓶培(pei)養(yang)）：應(ying)該(gai)先用(yong)胰(yi)蛋bai酶(mei)消(xiao)化(hua)後(hou)吹打下(xia)來(lai)收(shou)集(ji)。

b．13,000 rpm 離心(xin) 10 sec，完(wan)quan吸棄(qi)上清(qing)，留下(xia)細(xi)胞(bao)團。

c．輕彈(dan)管(guan)底使(shi)細(xi)胞松(song)散(san)，然(ran)後(hou)加(jia)入(ru)350μl（<5x106 細胞）或600μl（5x106-1x107細胞）裂解(jie)液(ye) ARL Plus，渦(wo)旋(xuan)振蕩，充分混(hun)勻。

d．下(xia)接(jie)步驟 3。

貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)培養(yang)數(shu)量表(biao)：（細(xi)胞(bao)數(shu)量＞1x107，請酌(zhuo)情(qing)增(zeng)加裂解(jie)液(ye)的用(yong)量）

3. 將裂解(jie)物上清(qing)或者(zhe)裂解(jie)物全(quan)部(bu)加(jia)到(dao)gDNA 過(guo)濾(lv)器上（過(guo)濾(lv)器放在(zai)收(shou)集(ji)管內(nei)），立刻(ke) 13,000 rpm 離心(xin)1 min，保留(liu)濾(lv)液(ye)（RNA 在(zai)濾(lv)液(ye)中(zhong)）。

4. 向濾(lv)液(ye)中(zhong)加(jia)入(ru)等體積（350μl / 600μl）的70%乙醇(chun)，吹打混(hun)勻。

5. 每(mei)次(ci)吸取(qu)≤750μl濾(lv)液(ye)混(hun)合物轉入(ru)壹個RNA吸附(fu)柱中（吸(xi)附(fu)柱放入(ru)收(shou)集(ji)管中(zhong)），13,000 rpm離心(xin)1min，倒棄濾(lv)液(ye)。此時，RNA被(bei)吸附(fu)在(zai)膜(mo)上，重(zhong)復此過程(cheng)，直(zhi)到溶(rong)液(ye)全(quan)部(bu)上(shang)柱。

6. 加入(ru)700μl去蛋白液(ye) RW1,室溫(wen)放(fang)置(zhi) 1min,13,000 rpm 離心(xin)30sec，倒棄濾(lv)液(ye)。

7. 加入(ru)500μl漂洗液(ye) RW，13,000 rpm 離心(xin)30sec，倒棄濾(lv)液(ye)。

8. 重復(fu)步驟7。

9. 把(ba)RNA吸(xi)附(fu)柱放回(hui)收(shou)集(ji)管中(zhong)，13,000rpm 離心(xin)2min，徹(che)di除(chu)去膜(mo)上的乙醇(chun)。

10. 取出(chu)RNA吸附(fu)柱，放入(ru)壹個RNase-free 1.5ml離心(xin)管中(zhong)，向吸附(fu)膜(mo)的中央(yang)部(bu)位懸(xuan)空滴(di)加(jia)30-50μl RNase-Free H2O，室溫(wen)放(fang)置(zhi)1 min，13,000rpm離心(xin) 1 min。

11. 得(de)到的 RNA，可直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)，或於(yu)-70℃保存(cun)，以免(mian)降解(jie)。

附(fu)錄(lu)： 

壹、免(mian)液(ye)氮直(zhi)接(jie)研磨(mo)（自動研磨(mo)儀）——適用(yong)於(yu)新鮮(xian)樣本(ben)

a. 在(zai) 2.0 ml 液(ye)氮研(yan)磨(mo)管中加入(ru)4mm 兩(liang)粒(li)，加600μl裂解(jie)液(ye)ARL plus，放(fang)進(jin)20 mg 左(zuo)右(you)的樣本(ben)，設(she)置(zhi)65個頻率(lv)，震(zhen)蕩2min。

b. 將裂解(jie)物 13,000 rpm 離心(xin) 3 min，沈澱(dian)不能裂解(jie)的碎片(pian)。

二、液(ye)氮研(yan)磨(mo)（自動研磨(mo)儀）:

a. 把(ba)研(yan)磨(mo)模(mo)塊(kuai)丟(diu)到(dao)液(ye)氮中(zhong)預(yu)冷(leng)，直(zhi)到(dao)沒有(you)氣(qi)泡(pao)冒(mao)出(chu)視為(wei)預(yu)冷(leng)完(wan)畢。

b. 在(zai)2.0ml液(ye)氮研(yan)磨(mo)管中放入(ru)3mm 鋼珠3粒(li)，放進(jin)20-30mg 樣本(ben)，投入(ru)液(ye)氮中(zhong)預(yu)冷(leng)。

c. 把(ba)預(yu)冷(leng)好(hao)的離心(xin)管插入研(yan)磨(mo)模(mo)塊(kuai)中，放(fang)進(jin)研(yan)磨(mo)儀，設(she)置(zhi) 55 個頻率(lv)， 震(zhen)蕩 30~60 sec。（以北京(jing)赫(he)得(de)研磨(mo)儀——京 N9548 為(wei)例）

d. 研磨(mo)完(wan)成(cheng)後，馬(ma)上加(jia) 600 μl 裂解(jie)液(ye) ARL Plus，劇(ju)烈渦(wo)旋(xuan)振蕩,充分

混(hun)勻。

e. 將裂解(jie)物 13,000 rpm 離心(xin) 3 min，沈澱(dian)不能裂解(jie)的碎片(pian)。

相(xiang)關產品(pin)：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用(yong)於(yu)所有(you)qPCR儀)

 動物組織(zhi)細(xi)胞(bao)昆(kun)蟲(chong)總RNA快(kuai)速提取(qu)試(shi)劑盒