適(shi)用於快(kuai)速提取各(ge)種動物(wu)組(zu)織(zhi)、細(xi)胞的(de)總(zong) RNA，采用 gDNA 過(guo)濾器(qi)，高(gao)效濾除(chu)gDNA，不(bu)需要(yao)繁瑣的(de)DNase I消(xiao)化(hua)過(guo)程，提取的(de)RNA，可(ke)直(zhi)接用於RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通轉(zhuan)錄組(zu)測序、RACE、芯片等(deng)。
諾(nuo)博(bo)萊德(de) 高效動物組(zu)織(zhi)/細(xi)胞總RNA提(ti)取試劑(ji)盒(he)

諾(nuo)博(bo)萊德(de) 高效動物組(zu)織(zhi)/細(xi)胞總RNA提(ti)取試劑(ji)盒(he) 

高(gao)效動物組(zu)織(zhi)/細(xi)胞總 RNA 提(ti)取試劑(ji)盒(he)FlashPure Plus Tissue/Cell Total RNA Mini Kit 

目(mu)錄號：91451

產(chan)品內(nei)容(rong)

自(zi)備試(shi)劑(ji)

無(wu)水(shui)乙醇(chun)

保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)

室(shi)溫（15 ~ 25℃），有(you)效期(qi) 12 個月(yue)。

具(ju)體產(chan)品的(de)參(can)數(shu)以收到(dao)產品說明(ming)書的(de)參(can)數(shu)為(wei)準

產(chan)品簡(jian)介(jie)

適(shi)用於快(kuai)速提取各(ge)種動物(wu)組(zu)織(zhi)、細(xi)胞的(de)總(zong) RNA，采用 gDNA 過(guo)濾器(qi)，高(gao)效濾除(chu)gDNA，不(bu)需要(yao)繁瑣的(de)DNase I消(xiao)化(hua)過(guo)程，提取的(de)RNA，可(ke)直(zhi)接用於RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通轉(zhuan)錄組(zu)測序、RACE、芯片等(deng)。

產(chan)品特(te)點(dian)

1. 無(wu)毒：免氯仿、免(mian)β-巰基(ji)乙(yi)醇(chun)！

2. 高(gao)質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高(gao)效：提取全(quan)過程僅需 10 min！

重(zhong)要(yao)提示：

① 第(di)壹(yi)次使(shi)用前，請(qing)先在(zai)漂(piao)洗液(ye) RW 中加入無(wu)水(shui)乙醇(chun)，詳(xiang)見瓶身(shen)標(biao)簽(qian)。

② 所(suo)有(you)離(li)心步(bu)驟均需要(yao)在(zai)室(shi)溫（15~25℃）下進行(xing)。

③ 肝臟、脾(pi)臟、腎(shen)臟、胰(yi)腺、心(xin)臟的(de)樣(yang)本(ben)投入量不(bu)要(yao)超過 10 mg。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟：

1. 動(dong)物組(zu)織(zhi)：

a．電(dian)動勻漿(jiang)：取新(xin)鮮(xian)組(zu)織(zhi) 10~25 mg，加入 500μl 裂解(jie)液(ye) ACL Plus，電(dian)動(dong)勻漿(jiang)，直(zhi)到(dao)無(wu)明(ming)顯組(zu)織(zhi)塊即(ji)可(ke)。

b．液(ye)氮(dan)研(yan)磨：在(zai)液(ye)氮(dan)中研(yan)磨組(zu)織(zhi)成(cheng)細粉(fen)，取 10~25 mg 組(zu)織(zhi)細(xi)粉(fen)加入500μl裂解(jie)液(ye) ACL Plus，劇(ju)烈渦(wo)旋振(zhen)蕩 20 sec，充(chong)分(fen)裂解(jie)。

c． 將(jiang)勻漿(jiang)後裂解(jie)物(wu) 13，000 rpm 離(li)心 3 min。

d．下接步(bu)驟 3。

2. 細(xi)胞

a．懸浮細胞(bao)：離(li)心收(shou)集細胞，加入500 μl裂解(jie)液(ye) ACL Plus（<7x106 細(xi)胞(bao)），吹打(da)混勻，劇烈渦(wo)旋振(zhen)蕩 20 sec，充(chong)分(fen)裂解(jie)。

b．貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)：吸(xi)棄細胞(bao)培養基(ji)，可(ke)以直接在(zai)培養皿(min)中加裂解(jie)液(ye) ACL Plus進行(xing)消(xiao)化(hua)、裂解(jie)；或(huo)先(xian)用yi酶消(xiao)化後離(li)心收(shou)集細胞，再(zai)加入裂解(jie)液(ye)，每<7x106細胞(bao)加入 500 μl 裂解(jie)液(ye) ACL Plus，吹(chui)打(da)混勻，渦(wo)旋振(zhen)蕩至無(wu)明(ming)顯細(xi)胞團，使其充(chong)分(fen)裂解(jie)。

貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)培養數(shu)量表：

3. 將(jiang)裂解(jie)物(wu)上清(qing)或者裂解(jie)物(wu)全(quan)部加到 DNA 清(qing)除(chu)/RNA 吸附(fu)通(tong)用柱(zhu)中（以下簡(jian)稱通用柱(zhu)），13,000 rpm 離(li)心 1 min，丟(diu)棄通用柱(zhu)的(de)內(nei)管(guan)，

保(bao)留濾液(ye)（RNA 在(zai)濾液(ye)中）。

4. 向(xiang)濾液(ye)中加入0.5倍體積（通(tong)常(chang)為(wei) 250 μl）的(de)無(wu)水(shui)乙醇(chun)，吹(chui)打(da)混勻。

5. 將(jiang)濾液(ye)混合(he)物全(quan)部加入壹(yi)個通用柱(zhu)中，13,000 rpm 離(li)心1 min，倒棄(qi)

濾液(ye)。此(ci)時，RNA被吸附(fu)在(zai)膜上。

6. 加入700μl去(qu)蛋(dan)白液(ye) RW1,室(shi)溫(wen)放置(zhi)1min,13,000 rpm 離(li)心 30 sec，

倒棄(qi)濾液(ye)。

7. 加入500μl漂洗(xi)液(ye) RW，13,000 rpm 離(li)心 30 sec，倒棄(qi)濾液(ye)。

8. 重(zhong)復步(bu)驟 7。

9. 把(ba)通用柱(zhu)放回(hui)收(shou)集管(guan)中，13,000 rpm 離(li)心 2 min，徹di除(chu)去(qu)膜上殘(can)留(liu)

的(de)乙(yi)醇(chun)。

10. 取出(chu)通用柱(zhu)，放入新(xin)的(de) RNase-free 1.5 ml 離(li)心管(guan)中，向(xiang)吸附(fu)膜的(de)中央

懸空(kong)滴(di)加 30-50μl RNase-Free H2O（事先(xian)在(zai) 70-90℃水(shui)浴中加熱可(ke)提(ti)

高(gao)產量），室溫放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離(li)心 1 min。

11. 得(de)到的(de) RNA，可(ke)直(zhi)接用於下遊(you)實驗(yan)，或(huo)於-70℃保(bao)存(cun)，以免降解(jie)。

附(fu)錄(lu)：

壹(yi)、免液(ye)氮(dan)直(zhi)接研(yan)磨（自(zi)動研(yan)磨儀）——適用於新(xin)鮮(xian)樣本(ben)

a. 在(zai) 2.0 ml 液(ye)氮(dan)研(yan)磨管(guan)中加入 4 mm 兩粒，加 500 μl 裂解(jie)液(ye) ACL

plus，放進 20 mg 左(zuo)右的(de)樣(yang)本(ben)，設(she)置(zhi) 65 個頻(pin)率，震蕩 2 min。

b. 將(jiang)裂解(jie)物(wu) 13,000 rpm 離(li)心 3 min，沈澱(dian)不(bu)能裂解(jie)的(de)碎(sui)片。

二(er)、液(ye)氮(dan)研(yan)磨（自(zi)動研(yan)磨儀）:

a. 把(ba)研(yan)磨模塊丟到液(ye)氮(dan)中預(yu)冷，直到(dao)沒有(you)氣(qi)泡(pao)冒出(chu)視為(wei)預冷完畢。

b. 在(zai) 2.0 ml 液(ye)氮(dan)研(yan)磨管(guan)中放入 3mm 鋼珠 3 粒，放進 20-30mg 樣本(ben)，

投入液(ye)氮(dan)中預(yu)冷。

c. 把(ba)預冷好的(de)離(li)心管(guan)插(cha)入研(yan)磨模塊中，放進研(yan)磨儀，設(she)置(zhi) 55 個頻(pin)率，

震蕩 30~60 sec。（以北京赫(he)得(de)研(yan)磨儀——京 N9548 為(wei)例(li)）

d. 研(yan)磨完成(cheng)後，馬上加 500 μl 裂解(jie)液(ye) ACL Plus，劇(ju)烈渦(wo)旋振(zhen)蕩,充(chong)分(fen)

混勻。

e. 將(jiang)裂解(jie)物(wu) 13,000 rpm 離(li)心 3 min，沈澱(dian)不(bu)能裂解(jie)的(de)碎(sui)片。

相(xiang)關產品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用於所(suo)有(you)qPCR儀)

 諾(nuo)博(bo)萊德(de) 高效動物組(zu)織(zhi)/細(xi)胞總RNA提(ti)取試劑(ji)盒(he)