植物(wu)總(zong)RNA提(ti)取試劑(ji)盒：本試劑(ji)盒是同(tong)類產品(pin)中適(shi)應性最guang泛(fan)，不但(dan)可(ke)以(yi)提取小(xiao)麥(mai)、玉米、水(shui)稻(dao)、大(da)豆、番茄(qie)、煙草、擬南(nan)芥(jie)等(deng)簡(jian)單植物(wu)，也可以(yi)提取茶(cha)樹(shu)葉(ye)片、棉(mian)花葉(ye)片、葡萄葉(ye)片、楊(yang)樹(shu)葉(ye)片、番薯(shu)葉(ye)片、花(hua)生葉(ye)片、香(xiang)蕉葉(ye)片、荔(li)枝葉(ye)片、白松葉(ye)片等(deng)多(duo)糖(tang)多(duo)酚含(han)量(liang)壹般(ban)的(de)植(zhi)物(wu)。

諾博萊(lai)德 植物(wu)總(zong)RNA提(ti)取試劑(ji)盒

植物(wu)總(zong) RNA 提(ti)取試劑(ji)盒FlashPure Plant Total RNA Mini Kit

目錄號：91019

產品(pin)內(nei)容

保(bao)存溫度(du)

室溫（15 ~ 25℃）保(bao)存，有(you)效期 12 個月。

具(ju)體(ti)產品(pin)的(de)參(can)數以(yi)收到(dao)產品(pin)說明書(shu)的(de)參(can)數為準

產品(pin)簡(jian)介(jie)

適(shi)用於(yu)提(ti)取絕(jue)大(da)多(duo)數植物(wu)根(gen)、莖、葉(ye)、花的(de)總(zong)RNA，RNA可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)RT， RT-PCR，RT-qPCR，RACE，普(pu)通轉(zhuan)錄組測序(xu)等。

本試劑(ji)盒是同(tong)類產品(pin)中適(shi)應性最guang泛(fan)，不但(dan)可(ke)以(yi)提取小(xiao)麥(mai)、玉米、水(shui)稻(dao)、大(da)豆、番茄(qie)、煙草、擬南(nan)芥(jie)等(deng)簡(jian)單植物(wu)，也可以(yi)提取茶(cha)樹(shu)葉(ye)片、棉(mian)花葉(ye)片、葡萄葉(ye)片、楊(yang)樹(shu)葉(ye)片、番薯(shu)葉(ye)片、花(hua)生葉(ye)片、香(xiang)蕉葉(ye)片、荔(li)枝葉(ye)片、白松葉(ye)片等(deng)多(duo)糖(tang)多(duo)酚含(han)量(liang)壹般(ban)的(de)植(zhi)物(wu)。

如果(guo)遇到(dao)果(guo)實(shi)、種(zhong)子、中草藥，例(li)如：多(duo)糖(tang)多(duo)酚巨高的(de)作(zuo)物(wu)種(zhong)子（小(xiao)麥(mai)/玉米/大(da)豆/水(shui)稻(dao)）、葡萄果(guo)實(shi)、藍莓(mei)果(guo)實(shi)、百(bai)合鱗莖(jing)、土豆(dou)塊莖(jing)；或(huo)者(zhe)次級代謝(xie)產物(wu)巨(ju)豐富(fu)的(de)葛(ge)根(gen)、虎(hu)杖(zhang)、雪蓮(lian)等藥用(yong)植物(wu)，請(qing)選(xuan)擇R513-果(guo)實(shi)種(zhong)子總(zong)RNA提(ti)取試劑(ji)盒。

產品(pin)特(te)點(dian)

1. 無(wu)毒(du)：免氯仿(fang)、免β-巰基乙醇(chun)！

2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提(ti)取全過程(cheng)僅(jin)需(xu) 20 分(fen)鐘！

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

a. 自備(bei)試劑(ji)：無水(shui)乙醇(chun)。

b. 提取過程(cheng)使(shi)用 RNase-Free 的(de)吸(xi)頭(tou)；研缽(bo)用水(shui)徹(che)di洗(xi)凈(jing)，烘(hong)箱(xiang)烘(hong)幹即可；

c. 樣品(pin)加(jia)入(ru)裂解(jie)液 PRL 勻漿(jiang)後(hou)，可在(zai)–80℃保(bao)存壹個月(yue)以(yi)上(shang)。

d. 取 RNA 樣(yang)本(ben)時(shi)，把新(xin)鮮組(zu)織樣本浸入(ru) RNAsafe ( RNA 樣品(pin)保(bao)存液， 91115-100 ) 中，可(ke)在(zai) 37℃保(bao)存壹天，在(zai) 25℃保(bao)存壹周，在(zai) 4℃保(bao)存壹個月(yue)，在(zai)-20℃或(huo)者(zhe)–80℃長期保(bao)存。

操(cao)作步驟

提示：所有(you)離心(xin)步驟必須(xu)在(zai)室溫（15 ~37℃）下(xia)進行(xing)。

第(di)壹(yi)次使用(yong)前(qian)，請(qing)先(xian)在(zai)漂洗液 RW 中加(jia)入(ru)無水(shui)乙醇(chun)，加(jia)入(ru)體(ti)積詳見標簽(qian)

1. 材(cai)料處理：

a．取 500 μl 裂(lie)解(jie)液 PRL，轉(zhuan)入(ru) 1.5 ml 離心(xin)管(guan)中，再加(jia)入(ru) 50 μl 糖酚去(qu)除(chu)劑(ji) PAD，混勻備(bei)用(yong)。

註(zhu)意(yi)：對於(yu)幼(you)嫩的(de)農(nong)作物(wu)葉(ye)片等(deng)簡單(dan)樣本，不加(jia)糖(tang)酚去(qu)除(chu)劑(ji) PAD，RNA

的(de)產量(liang)可能會(hui)提(ti)高壹些(xie)。

b．液氮中研磨(mo)適(shi)量(liang)植物(wu)組(zu)織成細(xi)粉(fen)，取≤50 mg 細(xi)粉(fen)轉(zhuan)入(ru)上(shang)述裝有(you)裂解(jie)

液 PRL 的(de) 1.5 ml 離(li)心(xin)管(guan)中,劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋震(zhen)蕩(dang) 30 sec，充(chong)分(fen)混勻。

（冬天氣溫低(di)，37℃搖床振(zhen)蕩 3 min，可(ke)增強(qiang)裂解(jie)效(xiao)果(guo)，提(ti)高產量(liang)）

c． 將裂(lie)解(jie)物(wu) 13,000 rpm 離(li)心(xin) 5-10 分(fen)鐘，沈(chen)澱(dian)不(bu)能裂(lie)解(jie)的(de)碎(sui)片(pian)。

註(zhu)意(yi)：使(shi)用(yong) 1 ml 的(de)裂(lie)解(jie)液 PRL 和 100 μl 糖(tang)酚去(qu)除(chu)劑(ji)去(qu)裂(lie)解 100 mg 樣品，RNA 產量(liang)會(hui)翻(fan)倍(bei)。

2. 小(xiao)心吸(xi)取上(shang)清（壹(yi)般(ban) 480 μl，註(zhu)意(yi)不(bu)要(yao)吸到(dao)沈(chen)澱(dian)）轉(zhuan)入(ru)壹個(ge)新(xin)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中，加(jia)入(ru) 0.5 倍(bei)上(shang)清體(ti)積的(de)無(wu)水(shui)乙醇(chun)（例(li)如：480 μl 上(shang)清，加(jia)入(ru) 240 μl無水(shui)乙醇(chun)），此時(shi)可(ke)能出來(lai)沈(chen)澱(dian)，用(yong)移液器吹(chui)打混勻，不需要(yao)離心。

3. 轉(zhuan)移上(shang)清混合液至 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)中，13,000 rpm 離(li)心 2 min，倒(dao)棄濾(lv)液。

註：吸(xi)附(fu)柱(zhu)的(de)容積(ji)為 750 μl，如果(guo)混合液超(chao)過此(ci)體(ti)積，請(qing)分(fen)兩(liang)次上(shang)柱。

4. 加(jia)入(ru)700 μl 去(qu)蛋(dan)白液RW1，室溫放置1min , 13,000 rpm離(li)心30 sec，倒(dao)棄濾(lv)液。

5. 加(jia)入(ru) 500 μl 漂洗液 RW, 13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒(dao)棄濾(lv)液。

6. 重(zhong)復(fu)步驟 5。

7. 將 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)放回空(kong)收集(ji)管中，13,000 rpm 離(li)心 2 min，除(chu)去(qu)吸(xi)附(fu)膜(mo)上(shang)殘留(liu)的(de)乙醇(chun)。

8. 取出 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)，放入(ru) 1.5 ml RNase-free 離心(xin)管(guan)中，向(xiang) RNA 吸附(fu)膜(mo)的(de)中央懸空(kong)滴(di)加(jia) 30~50 μl 的(de) RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離(li)心 1 min。

9. 提(ti)取的(de) RNA 可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)，或(huo)於(yu)-70℃保(bao)存，避免 RNA 降(jiang)解(jie)。

附(fu)錄：

壹、免液氮直(zhi)接(jie)研磨(mo)（自動研磨(mo)儀(yi)）——適(shi)用於(yu)新(xin)鮮樣(yang)本(ben)

a. 在(zai)2.0ml 液氮研磨(mo)管中加(jia)入(ru)4 mm兩(liang)粒(li)，加(jia)600μl裂(lie)解(jie)液 ARL，

放進20 mg左(zuo)右(you)的(de)樣(yang)本(ben)，設(she)置(zhi)65個(ge)頻率(lv)，震(zhen)蕩(dang)2 min。

b. 將裂(lie)解(jie)物(wu)13,000 rpm 離(li)心(xin)3 min，沈(chen)澱(dian)不(bu)能裂(lie)解(jie)的(de)碎(sui)片(pian)。

二、液氮研磨(mo)（自動研磨(mo)儀(yi)）:

a. 把研磨(mo)模塊丟(diu)到(dao)液氮中預(yu)冷，直(zhi)到(dao)沒(mei)有(you)氣泡(pao)冒(mao)出視(shi)為預冷完畢(bi)。

b. 在(zai)2.0 ml液氮研磨(mo)管中放入(ru)3mm 鋼珠3粒(li)，放進20-30mg樣(yang)本(ben)，投(tou)入(ru)液氮中預(yu)冷。

c. 把預冷(leng)好(hao)的(de)離(li)心(xin)管(guan)插(cha)入(ru)研磨(mo)模塊中，放進研磨(mo)儀(yi)，設(she)置(zhi) 55 個(ge)頻率(lv)， 震(zhen)蕩(dang) 30~60 sec。（以(yi)北京赫得(de)研磨(mo)儀(yi)——京 N9548 為例(li)）

d. 研磨(mo)完成後(hou)，馬(ma)上(shang)加(jia)600μl裂(lie)解(jie)液ARL，劇烈(lie)渦(wo)旋振(zhen)蕩(dang),充(chong)分(fen)混勻。

e. 將裂(lie)解(jie)物(wu) 13,000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，沈(chen)澱(dian)不(bu)能裂(lie)解(jie)的(de)碎(sui)片(pian)。

植(zhi)物(wu)總(zong)RNA提(ti)取試劑(ji)盒相關(guan)產品(pin)：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用於(yu)所(suo)有(you)qPCR儀(yi))