適(shi)用(yong)於(yu)快速提取各(ge)種(zhong)植物根、莖(jing)、葉、花的總RNA，采(cai)用(yong)gDNA過濾器，高效(xiao)濾除gDNA，得(de)到(dao)的總(zong)RNA可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通(tong)轉(zhuan)錄(lu)組測序、RACE等(deng)。
多糖多酚植物總(zong)RNA快速提取試(shi)劑(ji)盒(he)

諾博(bo)萊(lai)德 多糖多酚植物總(zong)RNA快速提取試(shi)劑(ji)盒(he)

多糖多酚植物總(zong) RNA 提取試(shi)劑(ji)盒(he)（gDNA 過濾(lv)器）Polysaccharide/polyphenol Plant Total RNA Mini Kit

目錄(lu)號(hao)：91318

產(chan)品內(nei)容

自備試劑

無水乙(yi)醇(chun)

保存(cun)條件(jian)

室(shi)溫(wen)（15 ~ 25℃）下(xia)，存(cun)放 12 個(ge)月(yue)，不(bu)影響(xiang)使(shi)用(yong)效(xiao)果。

具(ju)體產(chan)品的(de)參數(shu)以收(shou)到(dao)產(chan)品說明書的(de)參數(shu)為(wei)準(zhun)

產(chan)品簡(jian)介(jie)

適(shi)用(yong)於(yu)快速提取各(ge)種(zhong)植物根、莖(jing)、葉、花的總RNA，采(cai)用(yong)gDNA過濾器，高效(xiao)濾除gDNA，得(de)到(dao)的總(zong)RNA可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通(tong)轉(zhuan)錄(lu)組測序、RACE等(deng)。

成功(gong)案例：棉花、海棠、黑(hei)加侖(lun)、煙草、擬南芥(jie)、虎杖(zhang)、大(da)豆、草莓(mei)、冬(dong)青(qing)、月(yue)季花雌蕊(rui)、薔薇(wei)、沙(sha)棘(ji)、冬(dong)棗、蘆薈(hui)、仙(xian)人(ren)掌(zhang)、報(bao)春(chun)花、水稻(dao)、玉(yu)米(mi)、唐菖(chang)蒲(pu)、櫻(ying)桃、白玉(yu)蘭(lan)、毛白楊(yang)、櫻(ying)花、葡萄、百合花、百合葉子(zi)雌蕊(rui)雄蕊(rui)、紫(zi)菜(cai)、綠藻、香(xiang)蕉(jiao)、水仙(xian)花、青(qing)花菜(cai)、地(di)被(bei)菊(ju)、蘋果、梅(mei)花、番茄(qie)、石(shi)斛、毛(mao)桃(tao)、苧(zhu)麻、慈姑(gu)、葛(ge)根、甘肅桃、玫瑰(gui)花、檳榔果、甜(tian)糖(tang)菊(ju)、矽藻(zao)、牡丹、胡(hu)楊、油(you)桐果(guo)、梨(li)子(zi)皮(pi)、板栗(li)花序、青(qing)皮(pi)雲杉(shan)、紅(hong)樹(shu)根、鐵線蕨、黃(huang)瓜(gua)、小麥、番木(mu)瓜(gua)、甘薯(shu)、紫(zi)薯(shu)、油(you)松(song)、油(you)茶、馬(ma)尾(wei)松(song)、蕪(wu)菁、毛果(guo)楊(yang)、木(mu)薯(shu)、大(da)葉落地(di)生(sheng)根、山(shan)杏(xing)、旱(han)柳、案(an)樹(shu)、琵(pi)琶花果、麻風樹(shu)，沙(sha)生(sheng)槐、蕎麥...

產(chan)品特點(dian)

1. 無毒：免(mian)氯(lv)仿(fang)、免(mian)β-巰(qiu)基乙(yi)醇(chun)！

2. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效(xiao)：提取全(quan)過程僅(jin)需 20min！

操作(zuo)步(bu)驟

第(di)壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)請(qing)先在(zai)漂洗液(ye) RW 中(zhong)加入(ru)指ding量無水乙(yi)醇(chun)，詳見(jian)瓶(ping)身(shen)的(de)標簽。

提示：所(suo)有(you)離心(xin)步(bu)驟必(bi)須(xu)在室(shi)溫(wen)（15 ~37℃）下(xia)進(jin)行。

1. 材料處(chu)理：

a．吸取(qu) 500 μl 裂(lie)解(jie)液(ye) PRL，轉(zhuan)入(ru) 1.5 ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，再加(jia)入(ru)50 μl糖酚去除劑(ji)PAD，混(hun)勻備(bei)用(yong)。

註意：糖酚去除劑(ji) PAD 是提取多糖、多酚、次(ci)級代(dai)謝(xie)產(chan)物多、色素(su)含量豐富的困(kun)難(nan)樣(yang)品(pin)不(bu)ke或(huo)缺的(de)成分。對於(yu)幼(you)嫩(nen)的(de)農(nong)作(zuo)物葉片等(deng)簡單(dan)樣本(ben)，不(bu)加糖酚去除劑(ji) PAD，RNA 的(de)產(chan)量可(ke)能會提高壹(yi)些(xie)。

b．液氮(dan)中(zhong)研(yan)磨(mo)植物組織成(cheng)細粉(fen)，取≤50 mg 細粉(fen)轉入(ru)上(shang)述裝(zhuang)有(you) PRL 裂(lie)解(jie)液(ye)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong), 劇烈渦旋震(zhen)蕩(dang) 30 sec，充(chong)分混勻。

冬(dong)天(tian)氣溫低(di)， 37℃搖床(chuang)放置(zhi) 3 min，可(ke)增強裂(lie)解(jie)效(xiao)果，提高產(chan)量

c．將(jiang)裂(lie)解(jie)物 13,000 rpm 離心(xin) 5 ~10 min，沈澱(dian)不(bu)能裂(lie)解(jie)的(de)碎(sui)片。

註意：使(shi)用(yong) 1ml 裂(lie)解(jie)液(ye) PRL 和 100 μl 糖(tang)酚去除劑(ji)去裂(lie)解(jie) 100 mg 樣(yang)品(pin)，RNA 產(chan)量會翻倍。

2. 小心(xin)吸取(qu)上(shang)清(qing)（壹(yi)般(ban) 480 μl，註意不(bu)要吸到(dao)沈澱(dian)）轉(zhuan)入(ru)壹(yi)個(ge)新(xin)的(de) 1.5 ml離(li)心(xin)管(guan)，加(jia)入(ru)0.5倍體積（壹(yi)般(ban) 240 μl）的無水乙(yi)醇(chun), 吹打(da)混(hun)勻。

3. 每(mei)次(ci)轉移(yi)≤750 μl 上(shang)清(qing)混合液至 gDNA 過濾(lv)器中(zhong)，13,000 rpm 離心(xin)2 min，倒棄(qi)濾(lv)液(ye)。此時，絕(jue)大部分gDNA 被濾除，RNA 和少(shao)量 gDNA殘留(liu)被吸(xi)附在膜(mo)上(shang)，重復此(ci)過程，直(zhi)到(dao)混合液全(quan)部轉入(ru)gDNA 過濾(lv)器。

4. 取出步(bu)驟3的(de)gDNA 過(guo)濾器，放入(ru)壹(yi)個(ge)新(xin)的(de) 2 ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加入(ru) 500μl裂(lie)解(jie)液(ye) PRL Plus，13,000 rpm 離(li)心(xin)1 min，收(shou)集(ji)濾(lv)液（RNA 在濾(lv)液(ye)中(zhong)），向(xiang)濾(lv)液(ye)中(zhong)加入(ru) 250μl 無水乙(yi)醇(chun)，吹打(da)混(hun)勻。

5. 將(jiang)濾(lv)液(ye)混合物加(jia)入(ru) RNA 吸附柱中(zhong)，13,000 rpm 離心(xin) 2 min，此時(shi)，RNA被吸(xi)附在膜(mo)上(shang)，倒棄(qi)濾(lv)液(ye)。

6. 加入(ru) 700 μl 去蛋(dan)白(bai)液(ye) RW1，室(shi)溫(wen)放置(zhi) 1min，13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒棄(qi)濾(lv)液(ye)。

7. 加入(ru) 500 μl 漂洗液(ye) RW，13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，倒棄(qi)濾(lv)液(ye)。

8. 重復步(bu)驟 7。

9. 將(jiang) RNA 吸(xi)附柱放回(hui)空收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)，13,000 rpm 離心(xin) 2 min，除去膜(mo)上(shang)殘留(liu)的乙(yi)醇(chun)。

10. 取出 RNA 吸附柱，放入(ru) RNase-free1.5 ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，向(xiang) RNA 吸(xi)附膜(mo)的中(zhong)央(yang)懸(xuan)空滴加(jia)30~50μl的(de)RNase-free H₂O，室(shi)溫(wen)放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離心(xin) 1 min。

11. 提取的(de)總(zong)RNA，可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)下(xia)遊(you)實(shi)驗，或(huo)於(yu)-70℃保存(cun)，以免(mian)降(jiang)解(jie)。

附錄(lu)：

壹(yi)、液(ye)氮(dan)研(yan)磨(mo)（自動(dong)研(yan)磨(mo)儀）:

a. 在 2.0 ml 液(ye)氮(dan)研(yan)磨(mo)管(guan)中(zhong)放入(ru) 3 mm 鋼(gang)珠(zhu) 3 粒，放進(jin)≤50 mg 樣本(ben)，投入(ru)液氮(dan)中(zhong)預冷。把(ba)研(yan)磨(mo)模塊(kuai)也(ye)丟到(dao)液氮(dan)中(zhong)預冷，直(zhi)到(dao)沒有氣泡冒(mao)出視為(wei)預(yu)冷完(wan)畢(bi)。

b. 把預(yu)冷好(hao)的(de)離心(xin)管(guan)插(cha)入(ru)研(yan)磨(mo)模塊(kuai)中(zhong)，放進(jin)研(yan)磨(mo)儀，設置(zhi) 55 個(ge)頻(pin)率(lv)，震(zhen)蕩(dang) 30~60 sec。（以北京赫得(de)京(jing) N9548 為(wei)例）

c. 研(yan)磨(mo)完(wan)成後(hou)，馬上(shang)加 500μl 裂(lie)解(jie)液(ye) PRL 和 50 μl 糖(tang)分去除劑(ji) PAD，劇烈渦旋30 sec。

d. 將(jiang)裂(lie)解(jie)物13,000 rpm 離(li)心(xin)5~10 min，沈澱(dian)不(bu)能裂(lie)解(jie)的(de)碎(sui)片。

二、免(mian)液(ye)氮(dan)直(zhi)接(jie)研(yan)磨(mo)（自動(dong)研(yan)磨(mo)儀）——適(shi)用(yong)於(yu)新(xin)鮮(xian)樣(yang)本(ben)

a. 在2.0 ml液(ye)氮(dan)研(yan)磨(mo)管(guan)中(zhong)加入(ru)5 mm 鋼(gang)珠(zhu)1粒，加(jia)1ml裂(lie)解(jie)液(ye) PRL和100μl PAD，放進(jin)≤100 mg 樣本(ben)，設置(zhi) 60 個(ge)頻(pin)率(lv)，震(zhen)蕩(dang) 2 min。

b. 將(jiang)裂(lie)解(jie)物 13,000 rpm 離(li)心(xin) 5~10 min，沈澱(dian)不(bu)能裂(lie)解(jie)的(de)碎(sui)片。

相關產(chan)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於(yu)所(suo)有(you)qPCR儀)

多糖多酚植物總(zong)RNA快速提取試(shi)劑(ji)盒(he)