適(shi)用(yong)於快速提取果(guo)實、種子(zi)、中(zhong)草(cao)藥的(de)總(zong) RNA，gDNA 過(guo)濾(lv)器能高(gao)效(xiao)濾(lv)除 gDNA， RNA 可直(zhi)接(jie)用(yong)於 RT、RT-PCR、RT-qPCR、普(pu)通轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)、RACE、芯片等。
果(guo)實/種子(zi)總(zong)RNA快速提取試(shi)劑(ji)盒(he)

諾博(bo)萊(lai)德(de) 果(guo)實/種子(zi)總(zong)RNA快速提取試(shi)劑(ji)盒(he)

果(guo)實/種子(zi)總(zong) RNA 提取試(shi)劑(ji)盒(he)Fruit / Seed Total RNA Mini Kit

目錄號(hao)：91513

產品內(nei)容

保(bao)存條(tiao)件

室(shi)溫(wen)（15 ~ 25℃），有效(xiao)期(qi) 12 個(ge)月。

自備(bei)試(shi)劑(ji)

無水乙醇，β-巰(qiu)基乙醇

具體(ti)產品的參數以收到產品說(shuo)明書(shu)的參(can)數(shu)為(wei)準

產品簡介

適用(yong)於快速提取果(guo)實、種子(zi)、中(zhong)草(cao)藥的(de)總(zong) RNA，gDNA 過(guo)濾(lv)器能高(gao)效(xiao)濾(lv)除 gDNA， RNA 可直(zhi)接(jie)用(yong)於 RT、RT-PCR、RT-qPCR、普(pu)通轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)、RACE、芯片等。

成功案(an)例(li)：稻谷種子(zi)、玉(yu)米(mi)種(zhong)子(zi)、小(xiao)麥種(zhong)子(zi)、葡(pu)萄(tao)果(guo)實、板栗、櫻(ying)桃(tao)、草(cao)莓(mei)、芒(mang)果(guo)、百(bai)合(he)鱗(lin)莖、唐(tang)菖(chang)蒲的球(qiu)莖、中(zhong)草(cao)藥的(de)塊(kuai)根...

如果(guo)遇(yu)到(dao)果(guo)實、種子(zi)、中(zhong)草(cao)藥，例(li)如：多(duo)糖(tang)多(duo)酚(fen)巨高(gao)的(de)作物(wu)種子(zi)（小(xiao)麥/玉(yu)米(mi)/大(da)豆/水稻(dao)）、葡(pu)萄(tao)果(guo)實、藍莓(mei)果(guo)實、百合(he)鱗(lin)莖、土(tu)豆塊(kuai)莖；或(huo)者次(ci)級代(dai)謝(xie)產物(wu)巨豐(feng)富的葛(ge)根、虎杖、雪蓮等藥用(yong)植物(wu)，請選(xuan)擇 91513-果(guo)實種子(zi)總(zong)RNA 提取試(shi)劑(ji)盒(he)。

產品特(te)點(dian)

1. 高質(zhi)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效(xiao)：提取全(quan)過程(cheng)僅(jin)需(xu) 30min！

註(zhu)意事項

1. 如果(guo) FSL 有析出或者(zhe)沈澱，請(qing)將(jiang)其(qi)置於 65℃水浴中(zhong)，重(zhong)新(xin)溶解(jie)後(hou)使(shi)用(yong)。

2. 樣(yang)品應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)，否則(ze)會影響 RNA 的(de)提取得率和質(zhi)量(liang)。

操(cao)作步驟：

重要(yao)提示：

① 第壹次(ci)使用(yong)前(qian)請先(xian)在(zai)漂(piao)洗液 RW 中(zhong)加(jia)入無水乙醇，加(jia)入量(liang)詳見(jian)瓶身標簽。

② 操(cao)作前(qian)，取 1ml 裂(lie)解(jie)液 FSL 至 2.0ml 離(li)心管內(nei)，加(jia)入 5%的 β-巰(qiu)基乙醇

（例(li)如：1ml FSL 加(jia) 50μl β-巰(qiu)基乙醇），顛(dian)倒(dao)混(hun)勻(yun)後(hou)，65℃水浴中(zhong)預熱(re)。多(duo)個(ge)樣(yang)本(ben)按比例(li)放(fang)大(da)準備(bei)。

③ β-巰(qiu)基乙醇是(shi)裂(lie)解(jie)液 FSL 的關鍵(jian)成(cheng)分(fen)，必要(yao)的時候可以提高終(zhong)濃度到(dao)10～20%，來(lai)防止(zhi)樣(yang)品褐化(hua)。如果(guo)碰(peng)到(dao)特(te)別復(fu)雜的(de)植(zhi)物(wu)，可以嘗(chang)試(shi)在(zai)裂(lie)解(jie)液中(zhong)再加(jia)入 PVP40 至終(zhong)濃度 2%。

④ 所(suo)有離心步驟均需(xu)要(yao)在(zai)室(shi)溫(wen)（15℃～25℃）下(xia)進(jin)行(xing)。

1. 材料(liao)處(chu)理：

a．將植(zhi)物(wu)樣(yang)本(ben)在(zai)液氮(dan)中(zhong)迅速研磨(mo)成(cheng)細粉(fen)。

b．轉移(yi) 30～200 mg 細粉(fen)至(zhi) 65℃預熱(re)的(de)裂(lie)解(jie)液 FSL（已加(jia)有 β-巰(qiu)基乙醇）中(zhong)，立(li)即(ji)劇(ju)烈渦(wo)旋(xuan)震(zhen)蕩 30 Sec，充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)。

註(zhu)意：水分(fen)多(duo)的(de)樣(yang)品（如草(cao)莓(mei)、西(xi)瓜(gua)果(guo)肉(rou)）投(tou)入 150～200 mg； 水分(fen)含量(liang)少(shao)的樣(yang)品（如成(cheng)熟的(de)小(xiao)麥/玉(yu)米(mi)/大(da)豆種(zhong)子(zi)）投(tou)入 30～40 mg； 澱粉(fen)含量(liang)高的(de)塊(kuai)莖投(tou)入 40～80mg；葉片投(tou)入 50～100 mg。

c．短暫(zan)回(hui)放(fang)至(zhi) 65℃水浴 5 min，中(zhong)間偶(ou)爾顛倒(dao) 1～2 次(ci)，幫助(zhu)裂(lie)解(jie)。

d．將裂(lie)解(jie)物(wu) 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沈澱不(bu)能(neng)裂(lie)解(jie)的(de)碎(sui)片。

e．轉移(yi)上清(qing)（約 800~900 μl）至新(xin)的(de) 2.0 ml 離(li)心管中(zhong)，加(jia)入 0.5 倍體(ti)積的(de)無(wu)水乙醇（約(yue) 400~450 μl），吹打混(hun)勻(yun)。

2. 每次(ci)轉移≤750 μl 上清(qing)混(hun)合(he)液至 gDNA 過(guo)濾(lv)器中(zhong)（過(guo)濾(lv)器放(fang)入收集管），13,000 rpm 離心 2 min，倒(dao)棄濾(lv)液。重復(fu)此過(guo)程(cheng)，直(zhi)到混(hun)合(he)液全(quan)部轉(zhuan)入gDNA 過濾(lv)器。此時(shi)，絕大(da)部分(fen) gDNA 被濾(lv)除，RNA和少(shao)量(liang)gDNA殘留被吸(xi)附(fu)在(zai)膜(mo)上。

3. 取出步驟2的gDNA過(guo)濾器，放(fang)入壹個新(xin)的(de)2.0 ml離(li)心管中(zhong)，加(jia)入500 μl 裂(lie)解(jie)液 ARL，13,000 rpm 離心 30 sec，收集濾(lv)液（RNA 在(zai)濾(lv)液中(zhong)），向濾液中(zhong)加(jia)入 250μl 無水乙醇，吹(chui)打混(hun)勻(yun)。

4. 將濾(lv)液混(hun)合(he)物(wu)加入 RNA 吸附(fu)柱中(zhong)，13,000 rpm 離(li)心 2 min，倒(dao)棄濾(lv)液。此時(shi)，RNA 被吸(xi)附(fu)在(zai)膜(mo)上。

5. 加入700μl 去蛋(dan)白(bai)液 RW1，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)1min，13,000 rpm 離(li)心30sec，倒(dao)棄濾(lv)液。

6. 加入500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒(dao)棄濾(lv)液。

7. 重復(fu)步驟6壹次(ci)。

8. 將RNA吸(xi)附(fu)柱(zhu)放(fang)回(hui)空(kong)收集管中(zhong)，13,000 rpm 離(li)心2 min，除去膜(mo)上殘留的乙醇。

9. 取出RNA吸附(fu)柱，放(fang)入 RNase-free1.5 ml 離心管中(zhong)，向 RNA 吸附(fu)膜(mo)的中(zhong)央(yang)懸空(kong)滴(di)加 30~50μl的RNase-free H₂O，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離(li)心1min。

10. 提取的(de)總(zong) RNA，可直(zhi)接(jie)用(yong)於下(xia)遊(you)實驗(yan)，或(huo)於-70℃保(bao)存，以免(mian)降解(jie)。

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