本試(shi)劑盒是同(tong)類(lei)產(chan)品中適(shi)應性(xing)最(zui)guang泛，不(bu)但(dan)可以提(ti)取(qu)小麥、玉米(mi)、水(shui)稻(dao)、大(da)豆(dou)、番茄、煙草、擬(ni)南芥等簡(jian)單(dan)植(zhi)物(wu)，也可以提(ti)取(qu)茶(cha)樹葉(ye)片(pian)、棉花葉(ye)片(pian)、葡(pu)萄葉(ye)片(pian)、楊樹葉(ye)片(pian)、番薯葉(ye)片(pian)、花生葉(ye)片(pian)、香蕉葉(ye)片(pian)、荔枝(zhi)葉(ye)片(pian)、白(bai)松(song)葉(ye)片(pian)等多糖(tang)多酚(fen)含(han)量(liang)壹般(ban)的植(zhi)物(wu)。
通用型植(zhi)物(wu)總RNA提取試(shi)劑盒(含(han)DNase I )

諾(nuo)博(bo)萊德(de) 通用型植(zhi)物(wu)總RNA提取試(shi)劑盒(含(han)DNase I )

Universal Plant Total RNA Mini Kit通用型植(zhi)物(wu)總 RNA 提取試(shi)劑盒（含(han) DNase I）

目(mu)錄(lu)號(hao)：91512

產(chan)品內容(rong)

自(zi)備試(shi)劑

無(wu)水(shui)乙(yi)醇

保(bao)存(cun)條(tiao)件

室(shi)溫（15 ~ 25℃）下(xia)，存(cun)放(fang) 12 個月，不(bu)影(ying)響(xiang)使(shi)用(yong)效(xiao)果。

具(ju)體產(chan)品的參(can)數(shu)以收到產(chan)品說明(ming)書(shu)的參(can)數(shu)為(wei)準

產(chan)品簡(jian)介(jie)

適(shi)用(yong)於(yu)提取(qu)絕大(da)多(duo)數(shu)植(zhi)物(wu)根、莖、葉(ye)、花的總RNA，配(pei)有(you)DNase I，在RNA吸(xi)附膜上消化gDNA，得到(dao)的RNA可直接(jie)用(yong)於(yu)RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序、RACE等(deng)。

本試(shi)劑盒是同(tong)類(lei)產(chan)品中適(shi)應性(xing)最(zui)guang泛，不(bu)但(dan)可以提(ti)取(qu)小麥、玉米(mi)、水(shui)稻(dao)、大(da)豆(dou)、番茄、煙草、擬(ni)南芥等簡(jian)單(dan)植(zhi)物(wu)，也可以提(ti)取(qu)茶(cha)樹葉(ye)片(pian)、棉花葉(ye)片(pian)、葡(pu)萄葉(ye)片(pian)、楊樹葉(ye)片(pian)、番薯葉(ye)片(pian)、花生葉(ye)片(pian)、香蕉葉(ye)片(pian)、荔枝(zhi)葉(ye)片(pian)、白(bai)松(song)葉(ye)片(pian)等多糖(tang)多酚(fen)含(han)量(liang)壹般(ban)的植(zhi)物(wu)。

如(ru)果遇(yu)到果(guo)實、種(zhong)子(zi)、中草藥，例如(ru)多糖(tang)多酚(fen)巨(ju)高(gao)的作物(wu)種(zhong)子(zi)（小麥/玉米(mi)/大(da)豆(dou)/水(shui)稻(dao)）、葡(pu)萄果(guo)實、藍(lan)莓果實、百合(he)鱗(lin)莖(jing)、土豆(dou)塊(kuai)莖，或(huo)者次級代謝(xie)產(chan)物(wu)巨豐富(fu)的葛(ge)根、虎杖(zhang)、雪蓮等(deng)藥用植(zhi)物(wu)，請選擇(ze)果實種(zhong)子(zi)總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(Cat#91512-50)。

產(chan)品特(te)點

1. 無(wu)毒(du)：免(mian)氯仿(fang)、免(mian)β-巰基(ji)乙(yi)醇！

2. 高(gao)質(zhi)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高(gao)效(xiao)：提(ti)取(qu)全過(guo)程(cheng)僅需(xu) 30 min！

操(cao)作(zuo)步驟

第壹次使(shi)用(yong)前(qian)請先(xian)在漂(piao)洗(xi)液(ye) RW 中加(jia)入(ru)指ding量(liang)無(wu)水(shui)乙(yi)醇，詳(xiang)見(jian)瓶身(shen)的標(biao)簽。

提(ti)示(shi)：所(suo)有(you)離心步驟必須在(zai)室溫（15~25℃）下(xia)進行(xing)。

1. 材(cai)料(liao)處(chu)理：

a．在(zai)液(ye)氮中研(yan)磨適量(liang)植(zhi)物(wu)組(zu)織成(cheng)細粉(fen)，取≤50mg 細粉(fen)加(jia)入(ru) 550 μl 裂(lie)解液 RLA，劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋震蕩(dang)30sec，充(chong)分(fen)混(hun)勻。

冬(dong)天氣(qi)溫低(di)， 37℃搖床(chuang)放(fang)置(zhi) 3 min，可增強裂(lie)解效果(guo)，提高(gao)產(chan)量(liang)

b．將(jiang)裂(lie)解物 13,000 rpm 離(li)心 5~10 min，沈(chen)澱不(bu)能裂(lie)解的碎片(pian)。

註(zhu)意：使(shi)用(yong) 1ml 裂(lie)解液 RLA 去(qu)裂(lie)解≤100 mg 樣品，RNA 產(chan)量(liang)會翻倍。

2. 小心吸(xi)取上(shang)清（約(yue) 480 μl，註意不(bu)要吸(xi)到(dao)沈澱）轉(zhuan)入(ru)壹個新的離心管(guan)中，加(jia)入(ru) 0.5 倍體積(ji)（約(yue) 240 μl）的無(wu)水(shui)乙(yi)醇, 吹(chui)打混(hun)勻。

3. 將(jiang)≤750μl 上(shang)清混(hun)合(he)液(ye)加(jia)入(ru) RNA 吸附(fu)柱(zhu)中，13,000 rpm 離(li)心 2 min，倒(dao)棄濾液(ye)。此時(shi)，RNA 被(bei)吸(xi)附在膜上(shang)。重復(fu)此(ci)過(guo)程(cheng)，直到溶(rong)液(ye)全部(bu)上(shang)柱。

4. 加(jia)入(ru) 350 μl 去蛋(dan)白(bai)液(ye) RW1，室溫放(fang)置(zhi) 1min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒(dao)棄濾液(ye)。

5. DNase I 工(gong)作(zuo)液配(pei)制(zhi)：取 45μl DNase Buffer 和 5μl DNase I 至(zhi)新的RNase-Free 離心管(guan)中，輕(qing)輕吹(chui)打混(hun)勻。（處理多個樣品，按(an)照(zhao)比例放(fang)大(da)）

6. 向(xiang) RNA 吸(xi)附膜(mo)中央加(jia)入(ru) 50μl 的 DNase I 工作(zuo)液，室溫放(fang)置(zhi) 15 min。

7. 加(jia)入(ru) 350μl 去蛋(dan)白(bai)液(ye) RW1，13,000 rpm 離心 30 sec，倒(dao)棄濾液(ye)。

8. 加(jia)入(ru) 500μl 漂(piao)洗(xi)液(ye) RW，13,000 rpm 離(li)心 30 sec，倒(dao)棄濾液(ye)。

9. 重復(fu)步驟 8 壹次。

10. 將(jiang) RNA 吸(xi)附柱(zhu)放(fang)回(hui)空(kong)收集(ji)管(guan)中，13,000 rpm 離(li)心 2 min，除(chu)去膜(mo)上殘(can)留的乙醇(chun)。

11. 取(qu)出(chu) RNA 吸(xi)附(fu)柱，放(fang)入(ru) RNase-free1.5 ml 離心管(guan)中，向(xiang) RNA 吸附膜的中央部位懸(xuan)空(kong)滴加(jia) 30-50μl RNase-free H2O，室溫放(fang)置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

12. 提(ti)取(qu)的總 RNA，可直接(jie)用(yong)於(yu)下(xia)遊(you)實驗，或(huo)於(yu)-70℃保(bao)存(cun)，以免(mian)降解。

相關產(chan)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於(yu)所(suo)有(you)qPCR儀(yi))

附(fu)錄(lu)：

壹(yi)、液(ye)氮研磨（自(zi)動研(yan)磨(mo)儀(yi)）—— 適(shi)用於(yu)各種(zhong)樣本

a. 把(ba)研(yan)磨模塊(kuai)也丟(diu)到(dao)液氮中預冷，直到沒有(you)氣(qi)泡(pao)冒(mao)出(chu)視(shi)為(wei)預冷完(wan)畢(bi)。

b. 在(zai)2.0ml液(ye)氮研磨管(guan)中放(fang)入(ru) 3 mm 鋼珠(zhu) 3 粒，放(fang)進≤50 mg 樣本，投(tou)入(ru)液氮中預冷。

c. 把(ba)預冷好(hao)的離心管(guan)插(cha)入(ru)研磨(mo)模塊(kuai)中，放(fang)進研磨儀(yi)，設(she)置 55 個頻率， 震蕩(dang) 30~60 sec。（以北京赫得京 N9548 為(wei)例）

d. 研(yan)磨(mo)完(wan)成(cheng)後，馬(ma)上(shang)加(jia) 550 μl 裂(lie)解液 RLA，劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋 30 sec，混(hun)勻。

e. 將(jiang)裂(lie)解物 13,000 rpm 離(li)心 5~10 min，沈(chen)澱不(bu)能裂(lie)解的碎片(pian)。

二、免(mian)液(ye)氮直接(jie)研(yan)磨(mo)（自(zi)動研(yan)磨(mo)儀(yi)）—— 適(shi)用於(yu)新鮮(xian)樣本

a. 在(zai) 2.0 ml 液(ye)氮研磨管(guan)中加(jia)入(ru) 5 mm 鋼珠(zhu) 1 粒，加(jia) 1 ml 裂(lie)解液 RLA，放(fang)進≤100 mg 樣本，設置 60 個頻率，震蕩(dang) 2 min。

b. 將(jiang)裂(lie)解物 13,000 rpm 離(li)心 5~10 min，沈(chen)澱不(bu)能裂(lie)解的碎片(pian)。

通用型植(zhi)物(wu)總RNA提取試(shi)劑盒(含(han)DNase I )