適(shi)用(yong)於快速提取新鮮血液(ye)的(de)總RNA，RNA可直接(jie)用(yong)於RT，RT-PCR，RT qPCR，普(pu)通轉(zhuan)錄組(zu)測序、RACE等(deng)。
全血RNA快速提取試(shi)劑(ji)盒 (免lv仿)

諾(nuo)博萊德 全(quan)血RNA快速提取試(shi)劑(ji)盒 (免lv仿)

FlashPure Blood Total RNA Mini Kit血液(ye)總(zong) RNA 提取試(shi)劑(ji)盒（離心柱(zhu)型）

目錄號：91016

產(chan)品(pin)內容(rong)

自備試(shi)劑(ji)

無水乙醇(chun)、β-巰(qiu)基乙醇(chun)

保存條(tiao)件(jian)

室溫（15 ~ 25℃）下，存放(fang) 12 個月(yue)，不(bu)影(ying)響使(shi)用(yong)效(xiao)果。

具(ju)體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參(can)數以(yi)收到(dao)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書的(de)參(can)數為準

產(chan)品(pin)簡(jian)介

適(shi)用(yong)於快速提取新鮮血液(ye)的(de)總RNA，RNA可直接(jie)用(yong)於RT，RT-PCR，RT qPCR，普(pu)通轉(zhuan)錄組(zu)測序、RACE等(deng)。

產(chan)品(pin)特(te)點

1. 高效(xiao)：提取全(quan)過(guo)程(cheng)僅需(xu) 20 min！

2. 高質(zhi)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)

提示(shi)：所有離心步驟(zhou)均(jun)需(xu)要(yao)在室溫（15 ~37℃）下進行(xing)。

① 第(di)壹次使(shi)用(yong)前(qian)，請先在漂(piao)洗(xi)液(ye) RW 和(he) 70%乙醇(chun)中加入(ru)指(zhi)ding量(liang)無水乙醇(chun)。

② 操(cao)作(zuo)前(qian)，用(yong) RNase-Free H2O 將 10X 紅細(xi)胞裂解液(ye) RLB 稀(xi)釋到(dao) 1X。

③ 操(cao)作(zuo)前(qian)，在裂解液(ye) RLT 中(zhong)加入(ru) β-巰(qiu)基乙醇(chun)至終(zhong)濃度 1%，如 1ml RLT中加入(ru) 10μl β-巰(qiu)基乙醇(chun)。此裂解液(ye)最(zui)好(hao)現(xian)用(yong)現(xian)配。配好(hao)的(de) RLT 4℃可放置(zhi)壹個月(yue)。

1. 在適(shi)合(he)大小的 RNase free 離心管(guan)中加入(ru) 1 體(ti)積（<1.5 ml）加入(ru)各種抗(kang)凝(ning)劑新鮮血液(ye) (顛倒混勻(yun)後)和 3 體(ti)積的(de)紅細(xi)胞裂解液(ye) RLB，顛倒混勻(yun)，可輕(qing)彈管(guan)壁,確保混(hun)勻(yun)。

2. 室溫放置(zhi) 10 分鐘(zhong)（期間應該(gai)顛倒輕(qing)彈混(hun)勻(yun)數次(ci)幫(bang)助裂解紅(hong)細(xi)胞）。

註意(yi)：如(ru)果 RNA 降(jiang)解嚴(yan)重，可在冰(bing)上(shang)裂解，時(shi)間可以(yi)長(chang)壹些以(yi)充(chong)分(fen)裂解。

3. 12,000 rpm 離心 20 秒，倒棄紅(hong)色(se)上(shang)清，並(bing)小心的盡可能多(duo)的吸棄上(shang)清

（註意(yi)不(bu)要吸(xi)到(dao)管(guan)底的細(xi)胞團(tuan)），留(liu)下(xia)完(wan)整(zheng)的(de)管(guan)底白細(xi)胞團(tuan)。

註意(yi)：離心後在管(guan)底應該(gai)見到(dao)白色(se)的(de)白細(xi)胞團(tuan)，也(ye)可能有壹些紅(hong)細(xi)胞殘(can)片和白細(xi)胞團(tuan)在 壹起，但(dan)是(shi)如果看(kan)到(dao)的是(shi)大部分的(de)紅色(se)細(xi)胞團(tuan)，說(shuo)明(ming)紅(hong)細(xi)胞裂解很(hen)不充(chong)分，應(ying)該(gai)再加入(ru)紅(hong)細(xi)胞裂解液(ye)，重懸(xuan)後重復步驟(zhou) 2，3。

註意(yi)：上(shang)清盡可能的吸棄，殘(can)留過(guo)多(duo)會稀(xi)釋裂解液(ye)，造成裂解結(jie)合(he)異(yi)常(chang)，產(chan)量(liang)純度(du)降(jiang)低。

4. 渦旋(xuan)或者輕(qing)彈管(guan)壁將白細(xi)胞沈(chen)澱(dian)完(wan)ding松(song)散(san)重懸(xuan)，加入(ru) 350 μl（< 0.5 ml全(quan)血）或者 600 μl（0.5~1.5ml 全血）裂解液(ye) RLT，吹(chui)打(da)混勻後用(yong)手(shou)劇烈(lie)振(zhen)蕩(dang) 20 秒，充分裂解。

註意(yi)：病(bing)人正常(chang)血樣白細(xi)胞數量(liang)為 4000-7000/μl，如果(guo)血樣中白(bai)細(xi)胞數量(liang)可能大幅增加，應(ying)該(gai)適(shi)當減少(shao)處(chu)理(li)量(liang)。或者按照 350 μ（l < 2x106 白細(xi)胞）或者 600 μl（2x106~1x107白細(xi)胞）的(de)比(bi)例(li)加裂解液(ye) RLT。

5. 用(yong)吸(xi)頭吹(chui)打(da)混勻幫(bang)助裂解，或者劇烈(lie)渦(wo)旋(xuan)震蕩(dang)，直到(dao)得到(dao)滿意(yi)勻(yun)漿(jiang)結(jie)果。(或者電(dian)動(dong)勻(yun)漿30秒)，可以(yi)剪(jian)切 DNA，降(jiang)低粘稠度和提高產(chan)量(liang)。

6. 向(xiang)裂解物(wu)中加入(ru)等(deng)體(ti)積（壹般(ban) 350 μl / 600 μl）的 70%乙醇(chun)，吹(chui)打(da)混勻。

7. 每(mei)次(ci)轉(zhuan)移(yi)≤700 μl 混(hun)合(he)物(wu)至壹個 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)中（吸(xi)附(fu)柱(zhu)放入(ru)收集(ji)管(guan)中），13,000 rpm 離心 1 min，RNA 被吸附(fu)在膜上(shang)，倒棄濾(lv)液(ye)。重復此過(guo)程(cheng)，直(zhi)到(dao)溶液(ye)全(quan)部上(shang)柱(zhu)。

8. 加 700 μl 去蛋(dan)白(bai)液(ye) RW1，室溫放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾(lv)液(ye)。

9. 加入(ru) 500 μl 漂(piao)洗(xi)液(ye) RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾(lv)液(ye)。

10. 重復步驟(zhou) 9。

11. 將 RNA 吸附(fu)柱(zhu)放回(hui)收集(ji)管(guan)中，13,000 rpm 離心 2 min，除去膜上(shang)乙醇(chun)。

12. 取出(chu) RNA 吸附(fu)柱(zhu)，放入(ru)壹個新的(de) RNase - free1.5 ml 離心管(guan)中，向(xiang)吸附(fu)膜的(de)中央部(bu)位(wei)懸(xuan)空(kong)滴(di)加 30-50 μl RNase free H2O（事先(xian)在 70-90℃水(shui)浴(yu)中加熱(re)可提高產(chan)量(liang)）， 室溫放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

13. 提取的(de) RNA 可直接(jie)用(yong)於下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)，或於-70℃保存，避(bi)免 RNA 降(jiang)解。

相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin)：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於所(suo)有qPCR儀(yi))

全血RNA快速提取試(shi)劑(ji)盒 (免lv仿)