FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是(shi)專(zhuan)用(yong)於(yu)提(ti)取(qu)細(xi)菌(jun)（G+、G-）的總 RNA，全(quan)新的裂(lie)解液沒有任何味(wei)道，提(ti)取(qu)過(guo)程(cheng)也(ye)不需(xu)要(yao)使(shi)用(yong)氯仿，提(ti)取(qu)的產(chan)量(liang)和(he)純(chun)度媲美(mei)進(jin)口壹(yi)xian品(pin)牌。得(de)到的 RNA，可(ke)直(zhi)接用(yong)於(yu) RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、全(quan)轉(zhuan)錄組測序(xu)、芯片(pian)等(deng)。
細(xi)菌(jun)總RNA提取(qu)試劑(ji)盒

諾(nuo)博(bo)萊(lai)德 細(xi)菌(jun)總RNA提取(qu)試劑(ji)盒 

FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit細(xi)菌(jun)總 RNA 快(kuai)速提取(qu)試劑(ji)盒（免lv仿）

目錄號：91018

產(chan)品(pin)內容

自備試劑(ji)

無(wu)水(shui)乙醇(chun)

保存條件

rong菌酶，常溫運(yun)輸(shu)， 4℃保存(cun)；其(qi)他組分，室溫（15 ~ 25℃）保(bao)存(cun)。

具體(ti)產(chan)品(pin)的參數(shu)以(yi)收到(dao)產(chan)品(pin)說明書的參數(shu)為準

產(chan)品(pin)簡(jian)介(jie)

FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是(shi)專(zhuan)用(yong)於(yu)提(ti)取(qu)細(xi)菌(jun)（G+、G-）的總 RNA，全(quan)新的裂(lie)解液沒有任何味(wei)道，提(ti)取(qu)過(guo)程(cheng)也(ye)不需(xu)要(yao)使(shi)用(yong)氯仿，提(ti)取(qu)的產(chan)量(liang)和(he)純(chun)度媲美(mei)進(jin)口壹(yi)xian品(pin)牌。得(de)到的 RNA，可(ke)直(zhi)接用(yong)於(yu) RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、全(quan)轉(zhuan)錄組測序(xu)、芯片(pian)等(deng)。

產(chan)品(pin)特(te)點

1. 無(wu)毒(du)：免氯仿、免β-巰(qiu)基乙醇(chun)！

2. 高(gao)質(zhi)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高(gao)效(xiao)：提取(qu)全(quan)過(guo)程(cheng)僅(jin)需 10 min！

註意事項

1. 樣品(pin)應避(bi)免反(fan)復凍融，否則會影響 RNA 的提(ti)取(qu)得率(lv)和(he)質(zhi)量(liang)。

2. 樣品(pin)加(jia)入裂(lie)解液 BRL Plus 勻漿(jiang)後(hou)，樣品(pin)可(ke)在–80℃保存壹(yi)個(ge)月(yue)以(yi)上(shang)。

3. 提取(qu)過(guo)程(cheng)應使(shi)用(yong)不含(han) RNase 的吸頭和(he)器(qi)皿(min)。

重要(yao)提示(shi)：

① 第(di)壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)前，請(qing)先在(zai)漂(piao)洗(xi)液 RW 中(zhong)加入(ru)無(wu)水(shui)乙醇(chun)，詳見(jian)瓶(ping)身(shen)的標(biao)簽。

② 每次(ci)操(cao)作(zuo)前(qian)，請(qing)先配制(zhi)添加了(le)rong菌(jun)酶或(huo)者(zhe) Lysostaphin 的 TE (PH 8.0)，終(zhong)濃度為 1mg/ml。

③ 所有離心步(bu)驟(zhou)均需(xu)要(yao)在室(shi)溫（15~25℃）下進(jin)行。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

1. 離心收集 1~2 ml 菌液(ye)(108~109細(xi)胞(bao))到(dao)壹(yi)個(ge) 1.5 ml 離(li)心(xin)管(guan), 盡(jin)可能徹(che)di吸棄(qi)上(shang)清(qing)。

2. 根據(ju)細(xi)胞(bao)的種(zhong)類(lei)和(he)數(shu)量(liang)，充分重懸(xuan)細(xi)胞(bao)在(zai) 100 μl ( 5x108細(xi)胞(bao) ) / 200 μl

( 5x108~7.5x108細(xi)胞(bao) ) TE 中(zhong)（確保(bao)已添加rong菌酶或(huo)者(zhe) Lysostaphin 至TE 中，濃度為 1mg/ml )，或者(zhe)直接(jie)用(yong) TE 重懸(xuan)後，用(yong)幹凈(jing)槍頭(tou)挑(tiao)取(qu)少許(xu)rong菌(jun)酶加(jia)入。

3. 室溫(15~25℃)溫育(yu)5min/rong菌酶, 或(huo)者(zhe)37℃溫育(yu)15min / Lysostaphin，破解細(xi)胞(bao)壁(bi)。每(mei) 2 min 渦旋振(zhen)蕩 10 sec，幫(bang)助(zhu)破壁(bi)。

註意：各種細(xi)菌(jun)破(po)壁(bi)的難(nan)易(yi)程(cheng)度不壹(yi)樣，壹(yi)般(ban)革蘭(lan)氏陰性(xing)菌(jun) E.coli 使(shi)用(yong)上(shang)面(mian)的條件就(jiu)足(zu)夠(gou)了(le)，甚(shen)至可能(neng)省(sheng)略該(gai)步驟(zhou)，但是(shi)某(mou)些革蘭(lan)氏陽(yang)性菌如B. subtilis 難(nan)破(po)壁(bi)需要(yao)提高(gao)rong菌(jun)酶濃度到 15mg/ml 和(he)溫育(yu)時(shi)間到10min。如果(guo)金(jin)黃(huang)色葡萄qiou菌(jun)需(xu)要(yao)加入(ru) lysostaphin 到(dao) 1mg/ml，37℃溫育(yu) 15min。總之(zhi)不同(tong)細(xi)菌(jun)類(lei)型破壁(bi)難(nan)易(yi)程(cheng)度不同(tong)，有(you)的難(nan)破(po)壁的種(zhong)類(lei)

需要(yao)根據(ju)用(yong)戶自己的具體(ti)情況調(tiao)節(jie)酶的種(zhong)類(lei)、工作濃度和(he)溫育(yu)溫度、時(shi)間，此外還可(ke)以(yi)聯合使(shi)用(yong)玻璃(li)珠(zhu)擊打(da)，機(ji)械破壁(bi)，蛋(dan)白(bai)酶 K 消(xiao)化(hua)等方法幫(bang)助(zhu)破壁(bi)。

4. 加入350μl裂(lie)解液 BRL（ 如果(guo)上(shang)面(mian)使(shi)用(yong) 100 μl TE/酶 ）或(huo)者(zhe)700μl裂(lie)解液 BRL（如果(guo)上(shang)面(mian)使(shi)用(yong) 200 μl TE/酶），吹(chui)打(da)混(hun)勻後，用(yong)手劇(ju)烈振(zhen)蕩20 秒，充分裂(lie)解。

5. 加入 250 μl 無(wu)水(shui)乙醇(chun)（曾加(jia)入(ru) 100 μl TE / 350 μl BRL 管(guan)）或(huo)者(zhe) 500 μl無(wu)水(shui)乙醇(chun)（曾加(jia)入(ru)200μl TE / 700μl BRL 管(guan)），立(li)即(ji)吹(chui)打(da)混(hun)勻。

6. 每次(ci)轉(zhuan)移(yi)≤750 μl 濾(lv)液混(hun)合液(ye)至 RNA 吸附(fu)柱中（吸附(fu)柱放入收集管(guan)中(zhong)），13,000 rpm 離心 1 min，倒(dao)棄(qi)濾(lv)液。此時(shi)，RNA 被吸附(fu)在(zai)膜(mo)上(shang)，重(zhong)復此過(guo)程(cheng)，直(zhi)到溶(rong)液全(quan)部上(shang)柱。

7. 加入 700 μl 去(qu)蛋(dan)白(bai)液(ye) RW1，室(shi)溫放置 1min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒(dao)棄(qi)濾(lv)液。

8. 加入 500 μl 漂(piao)洗(xi)液 RW，13,000 rpm 離(li)心 30 sec，倒(dao)棄(qi)濾(lv)液。

9. 重復步驟(zhou) 8 壹次(ci)。

10. 將 RNA 吸附(fu)柱放回空(kong)收集管(guan)中(zhong)，13,000 rpm 離心 2 min，除去(qu)乙(yi)醇(chun)。

11. 取(qu)出 RNA 吸附(fu)柱，放入壹個(ge)新(xin)的 RNase-free 1.5 ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，向(xiang) RNA吸附(fu)膜(mo)的中(zhong)央(yang)懸空(kong)滴加(jia) 30-50 μl RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

12. 得到的 RNA，可(ke)直(zhi)接用(yong)於(yu)下遊(you)實驗(yan)，或於(yu)-70℃保(bao)存，以(yi)免降(jiang)解。

相關產(chan)品(pin)：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於(yu)所有 qPCR 儀)

細(xi)菌(jun)總RNA提取(qu)試劑(ji)盒