FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是(shi)專(zhuan)用(yong)於(yu)提(ti)取細菌(jun)（G+、G-）的總(zong) RNA，采(cai)用(yong)高(gao)效的(de) gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)，不需(xu)要繁瑣(suo)的(de) DNase I 消化過(guo)程(cheng)。得到的 RNA，可直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu) RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、測(ce)序、芯(xin)片(pian)等(deng)。
細(xi)菌(jun)總(zong)RNA提取試劑盒(he)(帶gDNA過(guo)濾(lv)器(qi)）

諾(nuo)博萊德 細(xi)菌(jun)總(zong)RNA提取試劑盒(he)(帶gDNA過(guo)濾(lv)器(qi)）

FlashPure Plus Bacteria Total RNA Mini Kit細(xi)菌(jun)總(zong) RNA 快速(su)提(ti)取試劑盒(he)（含 gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)）

目(mu)錄(lu)號(hao)：91413

產(chan)品內容(rong)

自(zi)備試劑

無(wu)水(shui)乙醇(chun)

保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)

rong菌(jun)酶(mei)，常(chang)溫運輸， 4℃保存(cun)；其他(ta)組(zu)分(fen)，室(shi)溫（15 ~ 25℃）保存(cun)。

具體(ti)產(chan)品的參數(shu)以(yi)收到產(chan)品說明(ming)書的(de)參(can)數(shu)為(wei)準

產(chan)品簡(jian)介

FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是(shi)專(zhuan)用(yong)於(yu)提(ti)取細菌(jun)（G+、G-）的總(zong) RNA，采(cai)用(yong)高(gao)效的(de) gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)，不需(xu)要繁瑣(suo)的(de) DNase I 消化過(guo)程(cheng)。得到的 RNA，可直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu) RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、測(ce)序、芯(xin)片(pian)等(deng)。

產(chan)品特點

1. 無(wu)毒：免氯(lv)仿(fang)、免β-巰基乙(yi)醇(chun)！

2. 高(gao)質(zhi)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高(gao)效：提(ti)取全過(guo)程(cheng)僅(jin)需(xu) 10 min！

重(zhong)要(yao)提(ti)示：

① 第壹次使(shi)用(yong)前，請(qing)先在(zai)漂(piao)洗液 RW 中加入(ru)無(wu)水(shui)乙醇(chun)，詳見瓶身(shen)的標簽(qian)。

② 每(mei)次操作(zuo)前，請(qing)先配制添(tian)加(jia)了(le)rong菌酶(mei)或(huo)者(zhe) Lysostaphin 的 TE (PH 8.0)，終濃(nong)度(du)為(wei) 1mg/ml。

③ 所(suo)有離(li)心(xin)步驟(zhou)均需(xu)要在(zai)室(shi)溫（15~25℃）下進行(xing)。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)：

1. 離(li)心(xin)收集(ji) 1 ~ 2 ml 菌液(ye)（10⁸ ~10⁹細(xi)胞(bao)）到壹個 1.5 ml 離(li)心(xin)管(guan), 徹(che)di吸(xi)棄上清。

2. 根據(ju)細(xi)胞的(de)種類(lei)和數(shu)量(liang)，充(chong)分重懸細胞(bao)在(zai) 100 μl (5x10⁸細(xi)胞(bao)) / 200 μl

( 5x10⁸~7.5x10⁸ 細(xi)胞(bao) ) TE 中(zhong)（確(que)保(bao)rong菌酶或者(zhe) Lysostaphin 已(yi)添(tian)加(jia)至 TE 中，濃(nong)度(du)為(wei) 1mg/ml )，或者直(zhi)接(jie)用(yong) TE 重(zhong)懸後，用(yong)幹(gan)凈(jing)槍頭挑(tiao)取少(shao)許(xu)rong菌酶(mei)加入(ru)。

3. 室(shi)溫(15~25℃)溫育(yu)5min/rong菌(jun)酶(mei), 或(huo)者(zhe)37℃溫育(yu)15min/ Lysostaphin，破(po)解細胞(bao)壁。每(mei) 2 min 渦(wo)旋振(zhen)蕩 10 sec，幫(bang)助(zhu)破壁。

註(zhu)意：各(ge)種細(xi)菌(jun)破壁(bi)的難易程(cheng)度(du)不壹樣，壹般革(ge)蘭氏陰(yin)性(xing)菌(jun) E.coli 使(shi)用(yong)上面的條件(jian)就(jiu)足(zu)夠了(le)，,甚(shen)至可能(neng)省(sheng)略(lve)該步驟(zhou)，但(dan)是某(mou)些(xie)革蘭氏陽性(xing)菌(jun)如B. subtilis 難破(po)壁需(xu)要提(ti)高(gao)rong菌(jun)酶濃(nong)度(du)到 15mg/ml 和溫育(yu)時間(jian)到10min。如果金(jin)黃色葡(pu)萄(tao)qiou菌(jun)需(xu)要加(jia)入(ru) lysostaphin 到 1mg/ml，37℃溫育(yu) 15min。總(zong)之(zhi)不同細菌(jun)類(lei)型(xing)破壁(bi)難易程(cheng)度(du)不同，有的難(nan)破(po)壁的種類(lei)需(xu)要根據(ju)用(yong)戶(hu)自(zi)己(ji)的(de)具體(ti)情況(kuang)調節酶(mei)的種類(lei)、工(gong)作濃(nong)度(du)和溫育(yu)溫度、時間(jian)，此(ci)外還(hai)可(ke)以(yi)聯(lian)合(he)使(shi)用(yong)玻璃(li)珠(zhu)擊打，機(ji)械(xie)破(po)壁，蛋(dan)白(bai)酶 K 消化等(deng)方(fang)法幫(bang)助(zhu)破壁。

4. 短(duan)暫離(li)心(xin)收集(ji)細菌(jun)，徹(che)di吸(xi)棄上清後，加入(ru) 500 μl 裂解液 BRL Plus，渦(wo)旋震(zhen)蕩(dang)或者(zhe)反復(fu)吹(chui)打，裂解細菌(jun)。

5. 將(jiang)裂解勻(yun)漿(jiang)液(ye)全(quan)部加到 gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)中(zhong)（過(guo)濾(lv)器(qi)放(fang)入(ru)收集(ji)管(guan)中(zhong)），13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min，保(bao)留濾(lv)液(ye)，（RNA 在(zai)濾(lv)液(ye)中(zhong)）。

6. 向(xiang)濾(lv)液(ye)中(zhong)加入(ru)等(deng)體(ti)積(ji)（通常(chang)為(wei) 500 μl）的(de) 70%乙(yi)醇(chun)，立即(ji)吹(chui)打混勻(yun)。

7. 每(mei)次轉移(yi)≤750 μl 濾(lv)液(ye)混(hun)合(he)物(wu)至 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)中(zhong)（吸(xi)附(fu)柱(zhu)放(fang)入(ru)收集(ji)管(guan))，13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。此(ci)時，RNA 被(bei)吸(xi)附(fu)在(zai)膜(mo)上，重復(fu)此(ci)過(guo)程(cheng)，直(zhi)到溶(rong)液(ye)全部(bu)上柱。

8. 加(jia)入(ru) 700 μl 去(qu)蛋(dan)白(bai)液 RW1,室(shi)溫放(fang)置 1min,13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

9. 加(jia)入(ru) 500 μl 漂(piao)洗液 RW，13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

10. 重(zhong)復(fu)步驟(zhou) 7。

11. 把(ba) RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)放(fang)回(hui)收集(ji)管(guan)中(zhong)，13,000 rpm 離(li)心(xin) 2 min，徹(che)di除(chu)去膜上的乙醇(chun)。

12. 取出 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)，放(fang)入(ru)新(xin)的(de) RNase-free 1.5 ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，向(xiang)吸(xi)附(fu)膜(mo)的(de)中(zhong)央部位懸空(kong)滴(di)加 30-50μl RNase-Free H2O（事先在(zai) 70-90℃水(shui)浴(yu)中(zhong)加熱(re)可提(ti)高(gao)產(chan)量(liang)），室(shi)溫放(fang)置 1 min，13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min。

13. 得到的 RNA，可直(zhi)接(jie)用(yong)於(yu)下(xia)遊(you)實驗(yan)，或於(yu)-70℃保存，以(yi)免降(jiang)解。

附(fu)錄(lu)：

壹、免液氮直接(jie)研磨（自(zi)動研磨(mo)儀）——適用(yong)於(yu)新(xin)鮮(xian)樣本(ben)

a. 在(zai) 2.0 ml 液(ye)氮研磨管(guan)中(zhong)加(jia)入(ru) 4 mm 兩(liang)粒，加 600 μl 裂解液 ARL plus，放(fang)進 20 mg 左(zuo)右的(de)樣本(ben)，設置 65 個頻(pin)率(lv)，震(zhen)蕩(dang) 2 min。

b. 將(jiang)裂解物 13,000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，沈澱不能(neng)裂解的碎(sui)片(pian)。

二、液氮研磨（自(zi)動研磨(mo)儀）:

a. 把(ba)研(yan)磨(mo)模(mo)塊丟(diu)到液氮中預(yu)冷，直到沒有氣泡冒(mao)出(chu)視(shi)為預(yu)冷完畢(bi)。

b. 在(zai) 2.0 ml 液(ye)氮研磨管(guan)中(zhong)放(fang)入(ru) 3mm 鋼(gang)珠(zhu) 3 粒，放(fang)進 20-30mg 樣本(ben)，

投(tou)入(ru)液(ye)氮中預(yu)冷。

c. 把(ba)預(yu)冷好的離(li)心(xin)管(guan)插(cha)入(ru)研(yan)磨(mo)模(mo)塊中(zhong)，放(fang)進研(yan)磨儀，設置 55 個頻(pin)率(lv)，震(zhen)蕩(dang) 30~60 sec。（以(yi)北(bei)京(jing)赫(he)得研磨(mo)儀——京 N9548 為例）

d. 研(yan)磨(mo)完成後，馬上加 600 μl 裂解液 ARL Plus，劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋振(zhen)蕩,充(chong)分混勻(yun)。

e. 將(jiang)裂解物 13,000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，沈澱不能(neng)裂解的碎(sui)片(pian)。

相關(guan)產(chan)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用(yong)於(yu)所(suo)有qPCR儀)

細(xi)菌(jun)總(zong)RNA提取試劑盒(he)(帶gDNA過(guo)濾(lv)器(qi)）