適用(yong)於(yu)快速提(ti)取各種真菌(jun)的總(zong)RNA，gDNA過(guo)濾(lv)器能(neng)高效(xiao)濾(lv)除(chu)gDNA，提(ti)取的RNA，可(ke)直接用(yong)於(yu)RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、普(pu)通轉(zhuan)錄組測(ce)序(xu)、芯(xin)片等(deng)。
真菌(jun)總RNA提(ti)取試(shi)劑盒(帶(dai)gDNA過濾(lv)器）

諾博萊德 真菌(jun)總RNA提(ti)取試(shi)劑盒(帶(dai)gDNA過濾(lv)器）

Fungus Total RNA Mini Kit真菌(jun)總 RNA 提(ti)取試(shi)劑盒（含(han) gDNA 過濾(lv)器）

目錄(lu)號：91515

產(chan)品內容(rong)

自備試(shi)劑

無(wu)水(shui)乙醇(chun)

保存(cun)條件

室溫（15~25℃）下，存放 12 個(ge)月(yue)，不影響使用效(xiao)果(guo)。

具(ju)體(ti)產(chan)品的參(can)數(shu)以(yi)收到產(chan)品說(shuo)明書的參(can)數(shu)為(wei)準

產(chan)品簡(jian)介

適用(yong)於(yu)快速提(ti)取各種真菌(jun)的總(zong)RNA，gDNA過(guo)濾(lv)器能(neng)高效(xiao)濾(lv)除(chu)gDNA，提(ti)取的RNA，可(ke)直接用(yong)於(yu)RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、普(pu)通轉(zhuan)錄組測(ce)序(xu)、芯(xin)片等(deng)。

產(chan)品特(te)點(dian)

1. 無(wu)毒(du)：免氯仿(fang)、免 β-巰(qiu)基(ji)乙醇(chun)！

2. 高效(xiao)：提(ti)取全過(guo)程(cheng)僅(jin)需 20 min！

3. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

提(ti)示：

所有(you)離(li)心步(bu)驟(zhou)均(jun)需要(yao)在室溫（15~37℃）下進(jin)行(xing)。

第(di)壹次(ci)使用前請先(xian)在漂(piao)洗液 RW 中(zhong)加入指ding量(liang)無(wu)水(shui)乙醇(chun)，詳見(jian)瓶身的標(biao)簽(qian)。

1. 材料(liao)處(chu)理：

a．轉(zhuan)移 500 μl 裂(lie)解(jie)液 PRL 和(he) 50 μl 糖(tang)酚(fen)去(qu)除(chu)劑 PAD 至 1.5 ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，混勻(yun)備用。

註意：糖(tang)酚(fen)去(qu)除(chu)劑 PAD 是提(ti)取多糖(tang)、多(duo)酚(fen)、次級代(dai)謝(xie)產(chan)物多、色(se)素含(han)量(liang)豐富的困(kun)難(nan)樣品(pin)不ke或缺的成分。對於(yu)簡單樣(yang)本，不加(jia)糖(tang)酚(fen)去(qu)除(chu)劑PAD，RNA 產(chan)量(liang)可能(neng)會提(ti)高壹些(xie)。

b．液氮中(zhong)研磨真菌(jun)組織(zhi)成細粉(fen)，取≤50 mg 細(xi)粉(fen)轉(zhuan)入上述裝有(you) PRL 裂(lie)解(jie)液的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong), 劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋(xuan)震蕩 30 sec，充分混勻(yun)。放(fang)離心(xin)管(guan)架上(shang)，接著研磨下壹個(ge)樣(yang)本。

（冬天(tian)氣溫低， 37℃搖(yao)床放(fang)置 3 min，可增強裂解(jie)效(xiao)果(guo)，提(ti)高產(chan)量(liang)）

c． 將(jiang)裂解(jie)物 13,000 rpm 離心(xin) 5~10 min，沈澱不(bu)能(neng)裂解(jie)的碎(sui)片。

註意：使用(yong)1 ml裂解(jie)液PRL和(he)100μl糖(tang)酚(fen)去(qu)除(chu)劑PAD去(qu)裂解(jie) 100 mg 樣品(pin)，RNA 產(chan)量(liang)會翻(fan)倍(bei)。

2. 小(xiao)心(xin)吸(xi)取(qu)上清（壹般(ban) 480 μl，註意不要(yao)吸(xi)到沈澱）轉(zhuan)入壹個(ge)新的 1.5 ml離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加入 0.5 倍(bei)體(ti)積（壹(yi)般 240 μl）的無(wu)水(shui)乙醇(chun), 吹(chui)打混勻(yun)。

3. 每(mei)次(ci)轉(zhuan)移≤750 μl 上(shang)清混合液至(zhi) gDNA 過濾(lv)器中(zhong)（過濾(lv)器放(fang)入收集(ji)管(guan)）， 13,000 rpm 離心(xin) 2 min，倒棄濾(lv)液。此(ci)時，絕大部(bu)分的 gDNA 被(bei)濾(lv)除(chu)，RNA 和(he)少(shao)量(liang) gDNA 殘(can)留被吸(xi)附(fu)在膜(mo)上。重(zhong)復此(ci)過程(cheng)，直到溶(rong)液全部(bu)轉(zhuan)入 gDNA 過濾(lv)器。

4. 取出(chu)步(bu)驟(zhou) 3 的 gDNA 過(guo)濾(lv)器，放(fang)入壹個(ge)新的 2.0ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加入 500μl裂解(jie)液 PRL Plus，13,000 rpm 離(li)心 1 min，收集(ji)濾(lv)液（RNA 在(zai)濾(lv)液中(zhong)），加入 250 μl 無(wu)水(shui)乙醇(chun)，吹(chui)打混勻(yun)。

5. 將(jiang)濾(lv)液混合物轉(zhuan)入 RNA 吸(xi)附(fu)柱中(zhong)，13,000 rpm 離心 2 min，此(ci)時，RNA被(bei)吸(xi)附(fu)在膜(mo)上，倒(dao)棄(qi)濾(lv)液。

6. 加入 700 μl 去(qu)蛋白(bai)液 RW1，室溫放(fang)置 1 min，13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒(dao)棄濾(lv)液。

7. 加入 500 μl 漂洗液 RW（檢查(zha)是否已(yi)加乙醇(chun)），13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒棄濾(lv)液。

8. 重(zhong)復步(bu)驟(zhou) 7。

9. 將(jiang) RNA 吸(xi)附(fu)柱放(fang)回空(kong)收集(ji)管(guan)中(zhong)，13,000 rpm 離心 2 min，除(chu)去(qu)膜上殘(can)留的乙醇(chun)。

10. 取出(chu) RNA 吸(xi)附(fu)柱，放(fang)入 1.5 ml RNase-free 離心管(guan)中(zhong)，向(xiang) RNA 吸(xi)附(fu)膜的中(zhong)央懸空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室溫放(fang)置 1 min，13,000 rpm 離心(xin) 1 min。

11.提(ti)取的總(zong) RNA，可(ke)直接用(yong)於(yu)下遊實驗(yan)，或於(yu)-70℃保存(cun)，以(yi)免降解(jie)。

相關(guan)產(chan)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用(yong)於(yu)所有(you) qPCR 儀(yi)）

真菌(jun)總RNA提(ti)取試(shi)劑盒(帶(dai)gDNA過濾(lv)器）