酵母(mu)總(zong)RNA提取試劑(ji)盒(he)適(shi)用於(yu)從酵母(mu)樣(yang)本中提(ti)取總(zong)RNA，提取的(de)RNA可直接用於(yu)RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通(tong)轉(zhuan)錄(lu)組測(ce)序、RACE等。

諾博(bo)萊德 酵母(mu)總(zong)RNA提取試劑(ji)盒(he)

Yeast Total RNA Mini Kit酵(jiao)母總(zong) RNA 快速提(ti)取試劑(ji)盒(he)

目(mu)錄(lu)號(hao)：91110

產品內容

自(zi)備(bei)試劑(ji)

無水(shui)乙醇、β-巰(qiu)基(ji)乙醇

具(ju)體(ti)產品的參(can)數(shu)以收到(dao)產品說明(ming)書(shu)的參數為(wei)準

產品簡介

適(shi)用於(yu)從酵母(mu)樣(yang)本中提(ti)取總(zong)RNA，提取的(de)RNA可直接用於(yu)RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通(tong)轉(zhuan)錄(lu)組測(ce)序、RACE等。

產品特點

1. 高(gao)質(zhi)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提(ti)取全(quan)過程(cheng)僅需 30 min！

操作步(bu)驟(zhou)

① 第壹(yi)次(ci)使(shi)用前(qian)，請(qing)先在漂(piao)洗(xi)液(ye) RW，詳(xiang)見(jian)瓶身(shen)的標簽。

②操作前(qian)，在(zai)裂解液(ye) RLT 中(zhong)加(jia)入(ru) 1% 的(de) β-巰基(ji)乙醇，例如 1ml RLT 中加入(ru)10 μl β-巰(qiu)基(ji)乙醇。此裂解液(ye)最(zui)好現用現配。配好的(de) RLT 可在 4℃放(fang) 30 天(tian)。

③吸取使(shi)用量的緩沖液(ye) SE 加(jia)入(ru)β-巰(qiu)基(ji)乙醇至終濃(nong)度 0.2%，備用。

提(ti)示(shi)：所有離心步驟(zhou)必(bi)須(xu)在室(shi)溫（15~25℃）下進(jin)行。

1. 小量酵母(mu)培(pei)養細胞(bao)：

a．收(shou)集(ji) 1 ml（約(yue) 107細胞(bao)）處於(yu)對(dui)數(shu)生(sheng)長期(qi)酵(jiao)母(mu)培(pei)養物到 1.5 ml 離(li)心管，12,000 rpm 離心(xin)30sec，盡(jin)可能(neng)吸棄上(shang)清(qing)。

b．加入100μl緩沖液(ye)SE中(zhong)（確(que)認(ren)已(yi)經加(jia)入(ru) 0.2% β-巰基(ji)乙醇），輕(qing)柔(rou)吹(chui)打充(chong)分重懸(xuan)細胞(bao)；根(gen)據酵(jiao)母量加入(ru)約(yue) 20 μl Lytic Enzyme 儲(chu)液(ye)，充(chong)分顛倒(dao)混勻，37℃溫育(yu) 15~30 min 消化(hua)細胞(bao)壁(bi)，中間可(ke)顛倒數次幫助(zhu)消化(hua)。

註意：如果(guo)破(po)壁效(xiao)果(guo)不(bu)好導(dao)致(zhi)產量低(di)，可(ke)以加大 lytic Enzyme 用量來(lai)提(ti)高(gao)酶(mei)工(gong)作濃(nong)度，還可(ke)以(yi)延(yan)長消化(hua)時間或者(zhe)提(ti)高(gao)溫度到 45℃來(lai)提(ti)高(gao)效(xiao)果(guo)，不(bu)適(shi)合(he) Lytic Enzyme 消化(hua)的酵(jiao)母(mu)可選用其它方(fang)法如0.5mm 玻璃珠(zhu)渦(wo)旋(xuan)擊(ji)打 ，反復凍融(rong)等(deng)。

c．加入 380 μl 裂解液(ye) RLT（確(que)認(ren)已(yi)加(jia)入 1% β-巰基(ji)乙醇），吹(chui)打混勻後(hou)用手劇(ju)烈振蕩(dang) 20 sec，充(chong)分裂解。

註意：壹般(ban)加(jia)入裂解液(ye)後(hou)充(chong)分渦(wo)旋(xuan)吹(chui)打後(hou)應(ying)該見(jian)不(bu)到(dao)明(ming)顯(xian)團塊或者(zhe)不(bu)溶(rong)物,極(ji)少數情況下如(ru)果(guo)有明顯(xian)團塊或者(zhe)不(bu)溶(rong)物可以(yi)將裂(lie)解物13,000rpm 離心(xin) 3 min,沈澱(dian)不(bu)能(neng)裂(lie)解的碎(sui)片或者(zhe)不(bu)溶(rong)物, 將裂(lie)解物上清(qing)全部(bu)轉到(dao)壹(yi)個新(xin)離心(xin)管再(zai)進(jin)行下壹(yi)步(bu)。

d．加入(ru) 280 μl 無水(shui) 乙醇，立(li)即吹(chui)打混勻，不(bu)要離心(xin)。

e．下接(jie)步(bu)驟 3。

2. 中(zhong)量酵母(mu)培(pei)養細胞(bao)：

a． 收(shou)集(ji) 2~3 ml（約(yue) 3X107 細胞(bao)）處於(yu)對(dui)數(shu)生(sheng)長期(qi)酵(jiao)母(mu)培(pei)養物到 1.5 ml離(li)心管（超過(guo) 1.5 ml 可(ke)分兩次在(zai)同(tong)壹個離心管內進行收集(ji)細胞(bao)），12，000rpm 離(li)心30 sec，盡可(ke)能(neng)吸棄上(shang)清(qing)。

b． 加入300 μl緩沖液(ye)SE中(zhong)（確(que)認(ren)已(yi)經加(jia)入(ru)β-巰基(ji)乙醇至終濃(nong)度0.2%），輕(qing)柔(rou)吹(chui)打充(chong)分重懸(xuan)細胞(bao)；根(gen)據酵(jiao)母量加入(ru) 50μl Lytic Enzyme 儲(chu)液(ye)，充(chong)分顛倒(dao)混勻，37℃溫育(yu) 15~30 min 消化(hua)細胞(bao)壁(bi)，中間可(ke)顛倒數次幫助(zhu)消化(hua)。

註意：如果(guo)破(po)壁效(xiao)果(guo)不(bu)好導(dao)致(zhi)產量低(di)，可(ke)以加大 lytic Enzyme 用量來(lai)提(ti)高(gao)酶(mei)工(gong)作濃(nong)度，還可(ke)以(yi)延(yan)長消化(hua)時間或者(zhe)提(ti)高(gao)溫度到 45℃來(lai)提(ti)高(gao)效(xiao)果(guo)，不(bu)適(shi)合(he)Lytic Enzyme消化(hua)的酵(jiao)母(mu)可選用其它方(fang)法如0.5mm玻璃珠(zhu)渦(wo)旋(xuan)擊(ji)打 ，反復凍融(rong)等(deng)。

c． 13,000 rpm 離心 1 min，盡可(ke)能(neng)吸棄上(shang)清(qing)。

d． 加入 350μl 裂(lie)解液(ye) RLT（確(que)認(ren)已(yi)經加(jia)入(ru) β-巰基(ji)乙醇至終濃(nong)度 1%），吹(chui)打混勻後(hou)用手劇(ju)烈振蕩(dang) 20 sec，充(chong)分裂解。

註意：壹般(ban)加(jia)入裂解液(ye)、充(chong)分渦(wo)旋(xuan)吹(chui)打後(hou)，應(ying)該見(jian)不(bu)到(dao)明(ming)顯(xian)團塊或者(zhe)不(bu)溶(rong)物。極(ji)少數情況下，如(ru)果(guo)有明顯(xian)團塊或者(zhe)不(bu)溶(rong)物，可以(yi)將裂(lie)解物13,000 rpm 離心(xin) 3 min，沈澱(dian)不(bu)能(neng)裂(lie)解的碎(sui)片或者(zhe)不(bu)溶(rong)物, 將裂(lie)解物上清(qing)全部(bu)轉到(dao)壹(yi)個新(xin)離心(xin)管再(zai)進(jin)行下壹(yi)步(bu)。

e． 加入(ru)等體積 70％乙醇（DEPC 水(shui)配制，約 350μl）立(li)即吹(chui)打混勻。

f． 下接(jie)步(bu)驟 3。

3. 將(jiang)≤750μl 上清混合液(ye)加(jia)入(ru) RNA 吸附(fu)柱中(zhong)，13,000 rpm 離心(xin) 1 min，

倒棄濾液(ye)。此時，RNA 被吸附(fu)在膜(mo)上。重復此過程(cheng)，直到溶液(ye)全(quan)部(bu)上柱(zhu)。

4. 加(jia)入(ru) 700 μl 去蛋(dan)白(bai)液(ye) RW1，室(shi)溫放(fang)置 1min，13,000 rpm 離(li)心 30 sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

5. 加(jia)入(ru) 500μl 漂(piao)洗(xi)液(ye) RW，13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

6. 重復步驟(zhou) 5 壹(yi)次(ci)。

7. 將 RNA 吸附(fu)柱放(fang)回(hui)空收集(ji)管中，13,000 rpm 離(li)心(xin) 2 min，除去乙醇。

8. 取出(chu) RNA 吸附(fu)柱，放(fang)入 RNase-free1.5 ml 離(li)心管中，向 RNA 吸附(fu)膜的(de)中央部(bu)位懸(xuan)空滴加30-50μl RNase-free H2O，室(shi)溫放(fang)置 1 min，13,000 rpm 離(li)心 1 min。

9. 提(ti)取的(de)總(zong) RNA，可直接用於(yu)下遊(you)實(shi)驗，或於(yu)-70℃保(bao)存(cun)，以(yi)免降解。

酵母(mu)總(zong)RNA提取試劑(ji)盒(he)相關產(chan)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71711-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用於(yu)所(suo)有qPCR儀)