適用於快(kuai)速從福爾馬(ma)林(lin)固定、石蠟包埋(mai)組織樣品(pin)中提取(qu)總(zong)RNA，提取(qu)的(de)RNA，可(ke)用(yong)於(yu)RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測(ce)序、RACE等(deng)。
石蠟包埋組織總(zong)RNA提取(qu)試劑盒(he)

諾(nuo)博萊(lai)德(de) 石蠟包(bao)埋組織總(zong)RNA提取(qu)試劑盒(he)

FlashPure FFPE Total RNA Mini Kit石(shi)蠟(la)包(bao)埋(mai)組織總(zong) RNA 快(kuai)速提取(qu)試劑盒(he)

目(mu)錄號(hao)：91310

產(chan)品(pin)內(nei)容(rong)

自(zi)備試劑

無水乙(yi)醇、二(er)甲苯

保(bao)存(cun)條件(jian)

室溫(wen)（15 ~ 25℃）

具(ju)體產(chan)品(pin)的(de)參(can)數(shu)以收到產品(pin)說(shuo)明書(shu)的(de)參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)

產(chan)品(pin)簡介

適(shi)用(yong)於(yu)快(kuai)速從福爾馬(ma)林(lin)固定、石蠟包埋(mai)組織樣品(pin)中提取(qu)總(zong)RNA，提取(qu)的(de)RNA，可(ke)用(yong)於(yu)RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉錄組測(ce)序、RACE等(deng)。

產(chan)品(pin)特(te)點(dian)

1. 高(gao)質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高(gao)效：提取(qu)全(quan)過(guo)程(cheng)僅(jin)需 30 min！

操(cao)作(zuo)步驟

第壹(yi)次(ci)使用前，請(qing)先(xian)在漂(piao)洗液 RW 和(he) 70%乙(yi)醇中加入指ding量(liang)無水乙(yi)醇，詳見(jian)瓶身(shen)的(de)標(biao)簽。

提示：所(suo)有(you)離(li)心(xin)步驟必(bi)須(xu)在室溫(wen)（15~25℃）下(xia)進行(xing)。

1. 修(xiu)整(zheng)去(qu)除(chu)過(guo)量(liang)包埋(mai)組織外石(shi)蠟，並(bing)切成(cheng) 5~20 μm 厚切片(pian)，開(kai)始(shi)的(de) 2~3片(pian)拋(pao)棄不用。

2. 收(shou)集總(zong)厚度不超過(guo)■40 μm 的(de)石(shi)蠟(la)切(qie)片(pian)到壹(yi)個(ge) 2.0 ml 離(li)心(xin)管(guan)中（例(li)如(ru)：2 片(pian) 20μm、4 片(pian) 10μm、8 片(pian) 5μm 的(de)石(shi)蠟(la)切(qie)片(pian)），或者不超過(guo)▲80 μm的(de)石(shi)蠟(la)切(qie)片(pian)到壹(yi)個(ge) 2.0 ml 離(li)心(xin)管(guan)中。

■代表(biao)處理切(qie)片(pian)總(zong)厚度≤40 μm，▲代表(biao)處理切(qie)片(pian)總(zong)厚度≤80 μm

3. 加入 1 ml 100%二(er)甲苯，渦旋(xuan)振蕩(dang) 10 sec。瞬間離心把(ba)組織全部(bu)浸(jin)入到二(er)甲苯。

4. 50℃水(shui)浴(yu) 3 min 熔解石(shi)蠟(la)，20~25℃最高(gao)速離(li)心 2 min，收集到管(guan)底(di)。

5. 小(xiao)心吸棄上清二(er)甲苯，註(zhu)意(yi)不要吸到沈(chen)澱(dian)。

6. 加入 1 ml 無水乙(yi)醇，渦旋(xuan)振蕩(dang)，最高(gao)速離(li)心 2 min，小(xiao)心吸棄上清乙(yi)醇。

7. 加入 1ml 無水乙(yi)醇，重復(fu)步驟 6 壹(yi)遍，盡(jin)可(ke)能(neng)吸棄所有(you)乙(yi)醇。

8. 室溫(wen)或者 37℃晾幹乙(yi)醇 10 min，或直(zhi)到所有(you)乙(yi)醇揮發(fa)幹。

乙(yi)醇完quan晾(liang)幹非常(chang)重要，微(wei)量(liang)的(de)乙(yi)醇殘留(liu)也(ye)會(hui)導致(zhi) RNA 產(chan)量(liang)降(jiang)低(di)。

9. 加入■150 μl ▲240 μl 裂解液(ye) PKD，渦旋(xuan)振蕩(dang)（或者吹(chui)打(da)），充分重(zhong)懸組織沈(chen)澱(dian)，短暫(zan)離心收集液(ye)體到管(guan)底(di)，加入 10 μl 蛋(dan)白(bai)酶 K，吹(chui)打(da)混勻。

10. 55℃孵育 15min，然(ran)後 80 ℃孵育 15min。

55℃孵育後(hou)，可以將(jiang)離(li)心(xin)管(guan)取(qu)出(chu)放(fang)置在室溫(wen)，等(deng)水浴(yu)鍋(guo)溫(wen)度升(sheng)到 80℃後

再放(fang)入水浴(yu)鍋(guo)，精確(que)的(de)孵育 15min。即使(shi) 2min 的(de)延長也(ye)可(ke)能(neng)導致(zhi) RNA

的(de)部(bu)分(fen)降(jiang)解。

11. 加入■320 μl ▲500 μl 結(jie)合(he)液(ye) RBC，充分吹(chui)打(da)混勻，調節(jie)結(jie)合(he)條件(jian)。

12. 轉移(yi)混合(he)液(ye)至(zhi) gDNA 過(guo)濾(lv)器中，14,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，收集濾(lv)液(ye)

（RNA 在濾液(ye)中）。

應避(bi)免吸到較大(da)的(de)未(wei)消(xiao)化(hua)完quan的(de)絮(xu)團物質上(shang)柱(zhu)，以免堵塞(sai)離(li)心柱(zhu)。

13. 加入■720 μl ▲1200 μl 無水乙(yi)醇到濾過(guo)液(ye)中，吹(chui)打(da)混勻。

14. 將(jiang)≤750 μl 濾(lv)液(ye)混合液(ye)加入 RNA 吸附(fu)柱(zhu)中，13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，倒棄濾液。此時，RNA 被吸附(fu)在膜上。重復(fu)此過(guo)程(cheng)，直(zhi)到溶液(ye)全(quan)部上(shang)柱(zhu)。

15. 加入 500 μl 漂(piao)洗液 RW，13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，倒棄濾液。

16. 重(zhong)復(fu)步驟 15 壹(yi)次(ci)。

17. 將(jiang) RNA 吸附(fu)柱(zhu)放(fang)回空(kong)收(shou)集管(guan)中，13,000 rpm 離(li)心(xin) 2 min，除去(qu)乙(yi)醇。

18. 取(qu)出(chu) RNA 吸附(fu)柱(zhu)，放(fang)入 RNase~free1.5 ml 離心(xin)管(guan)中，向(xiang) RNA 吸附(fu)膜的(de)中央懸空(kong)滴(di)加 30 μl 的(de) RNase~free H2O，室溫(wen)放(fang)置 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

19. 提取(qu)的(de)總(zong) RNA，可直(zhi)接(jie)用於下(xia)遊(you)實驗，或於~70℃保(bao)存(cun)，以免降(jiang)解。

相(xiang)關(guan)產品(pin)：

71118~100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710~100 Script III All~in~one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600~500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於(yu)所(suo)有(you)qPCR儀(yi))

石(shi)蠟(la)包(bao)埋(mai)組織總(zong)RNA提取(qu)試劑盒(he)