本產(chan)品適(shi)用於快速(su)提(ti)取骨組(zu)織(zhi)細(xi)胞(bao)的總 RNA，利用多年研(yan)制(zhi)而成的骨組(zu)織(zhi)專(zhuan)用(yong)裂解液(ye)，並添加(jia)多種(zhong)成分去(qu)除骨組(zu)織(zhi)蛋(dan)白多糖(tang)，采用(yong)高(gao)效(xiao)的 gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)，不需(xu)要繁(fan)瑣的 DNase I消化(hua)，提(ti)取的 RNA，可直(zhi)接(jie)用於 RT、RT-PCR、RACE、RT-qPCR、普(pu)通(tong)轉錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)、芯(xin)片等。
骨組(zu)織(zhi)總RNA快(kuai)速(su)提(ti)取試劑盒(he)(帶(dai)gDNA過(guo)濾(lv)器(qi)）

諾(nuo)博(bo)萊德(de) 骨組(zu)織(zhi)總RNA快(kuai)速(su)提(ti)取試劑盒(he)(帶(dai)gDNA過(guo)濾(lv)器(qi)）

FlashPure Bone Total RNA Mini Kit骨組(zu)織(zhi) RNA 快(kuai)速(su)提(ti)取試劑盒(he)(帶(dai) gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi))

目(mu)錄號：91514

產(chan)品內容(rong)

自備(bei)試劑

無水乙(yi)醇

保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)

室溫(wen)（15 ~ 25℃），有效期(qi) 12 個(ge)月。

具(ju)體(ti)產(chan)品的參數以(yi)收到(dao)產(chan)品說明(ming)書(shu)的參數為(wei)準

產(chan)品簡(jian)介

骨組(zu)織(zhi)堅硬(ying)、骨細胞(bao)密度(du)低、而且外周基(ji)質(zhi)含有大(da)量黏(nian)蛋(dan)白（蛋(dan)白多糖(tang)）和 RNA 難以分離(li)，無法用(yong)傳(chuan)統(tong) Trizol 法(fa)進(jin)行(xing)高(gao)質(zhi)量(liang)提(ti)取。

本產(chan)品適(shi)用於快速(su)提(ti)取骨組(zu)織(zhi)細(xi)胞(bao)的總 RNA，利用多年研(yan)制(zhi)而成的骨組(zu)織(zhi)專(zhuan)用(yong)裂解液(ye)，並添加(jia)多種(zhong)成分去(qu)除骨組(zu)織(zhi)蛋(dan)白多糖(tang)，采用(yong)高(gao)效(xiao)的 gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)，不需(xu)要繁(fan)瑣的 DNase I消化(hua)，提(ti)取的 RNA，可直(zhi)接(jie)用於 RT、RT-PCR、RACE、RT-qPCR、普(pu)通(tong)轉錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)、芯(xin)片等。

產(chan)品特(te)點

1. 高(gao)質(zhi)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高(gao)效(xiao)：提(ti)取全過程僅需(xu) 30min！

註(zhu)意事(shi)項(xiang)

1. 如(ru)果(guo) FSL 有析出(chu)或(huo)者沈(chen)澱(dian)，請(qing)將其(qi)置(zhi)於 65℃水浴(yu)中(zhong)，重(zhong)新溶(rong)解後(hou)使(shi)用(yong)。

2. 樣(yang)品應(ying)避(bi)免(mian)反復凍融，否(fou)則(ze)會(hui)影響 RNA 的提(ti)取得(de)率(lv)和(he)質(zhi)量(liang)。

操(cao)作步驟：

提(ti)示(shi)：

① 第壹次使(shi)用(yong)前(qian)請(qing)先(xian)在(zai)漂(piao)洗液(ye) RW 中加(jia)入無水乙(yi)醇，加(jia)入量(liang)詳見(jian)瓶(ping)身(shen)標(biao)簽(qian)。

② 操(cao)作前(qian)，取 1 ml 裂解液(ye) FSL 至 2.0 ml 離(li)心(xin)管(guan)內(nei)，加(jia)入 10 %的 Boneaid，

（例(li)如(ru)：1ml FSL 加(jia) 100 μl Boneaid），顛(dian)倒(dao)混勻後(hou)，65℃水浴(yu)中(zhong)預(yu)熱。

多個(ge)樣(yang)本按(an)比(bi)例放大(da)。

③ 所(suo)有離心(xin)步驟均需(xu)要在(zai)室溫(wen)（15℃～25℃）下進行(xing)。

1. 液(ye)氮(dan)研磨法：

a．用(yong)gu鉗夾(jia)碎(sui)骨組(zu)織(zhi)，放(fang)入(ru)研缽（研缽在(zai) 180 度(du)幹烤 2 小時），在(zai)液(ye)氮(dan)中反復研磨成細粉。

註(zhu)意：研(yan)磨時，要不斷補(bu)加(jia)液(ye)氮(dan)，保證樣(yang)本的研(yan)磨在(zai)液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)。

b．轉(zhuan)移(yi) 100 mg 細粉至 65℃預(yu)熱(re)的裂(lie)解液(ye) FSL（已(yi)加(jia)有 Boneaid）中，立即劇烈渦旋(xuan)震蕩 30 Sec，充(chong)分混(hun)勻。

c． 下接(jie)步驟 3。

2. 其(qi)它(ta)骨組(zu)織(zhi)破碎方(fang)法(fa)：

a． 取100mg骨組(zu)織(zhi)加(jia)入1 ml預(yu)熱(re)的裂(lie)解液(ye)FSL（已(yi)加(jia)有 Boneaid）， 高(gao)速(su)均質儀(yi)粉碎勻漿(jiang)。或(huo)者取 100 mg 液(ye)氮(dan)冷凍(dong)包埋(mai)切(qie)片粉碎的骨頭加(jia)入 1 ml 裂(lie)解液(ye) FSL（已(yi)加(jia)有 Boneaid）粉碎勻漿(jiang)。

b． 下接(jie)步驟 3。

3. 短暫回(hui)放(fang)至 65℃水(shui)浴(yu) 10 min，中間偶(ou)爾顛(dian)倒(dao) 1～2 次，幫助裂(lie)解。

4. 將(jiang)裂解物 13,000 rpm 離(li)心(xin) 5 ~10 min，沈(chen)澱(dian)不能(neng)裂(lie)解的碎(sui)片。

5. 轉(zhuan)移(yi)上清(qing)至壹個(ge)新的 2.0 ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入 0.5 倍(bei)上清(qing)體(ti)積的無水乙(yi)醇，吹(chui)打(da)混勻。

6. 每次轉(zhuan)移(yi)≤750 μl 上清(qing)混(hun)合(he)液(ye)至 gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)中（過(guo)濾(lv)器(qi)放入(ru)收集(ji)管(guan)），13,000 rpm 離(li)心 2 min，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。此時(shi)，絕大(da)部(bu)分 gDNA 被(bei)濾(lv)除，RNA 和少量 gDNA 殘(can)留被(bei)吸(xi)附在(zai)膜(mo)上，重(zhong)復此(ci)過程，直(zhi)到混(hun)合(he)液(ye)全部(bu)轉(zhuan)入(ru) gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)。

7. 取出步驟 6 的 gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)，放入(ru)壹個(ge)新的 2.0 ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加(jia)入500 μl 裂(lie)解液(ye) PRL Plus，13,000 rpm 離心(xin) 1 min，收集(ji)濾(lv)液(ye)（RNA 在(zai)濾(lv)液(ye)中），向(xiang)濾(lv)液(ye)中加(jia)入 250μl 無水乙(yi)醇，吹(chui)打(da)混勻。

8. 將(jiang)濾(lv)液(ye)混合(he)物加(jia)入 RNA 吸(xi)附柱中(zhong)，13,000 rpm 離(li)心(xin) 2 min，倒棄濾(lv)液(ye)。此時(shi)，RNA 被吸(xi)附在(zai)膜(mo)上。

9. 加(jia)入 700 μl 去(qu)蛋(dan)白液(ye) RW1，室溫(wen)放置(zhi) 1min，13,000 rpm 離心 30 sec，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

10. 加(jia)入 500 μl 漂(piao)洗液(ye) RW，13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒棄濾(lv)液(ye)。

11. 重(zhong)復步(bu)驟 10 壹次。

12. 將(jiang) RNA 吸(xi)附柱放(fang)回(hui)空(kong)收集(ji)管(guan)中(zhong)，13,000 rpm 離心(xin) 2 min，除去(qu)膜(mo)上殘留的乙(yi)醇。

13. 取出 RNA 吸(xi)附柱，放(fang)入(ru) RNase-free1.5 ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，向(xiang) RNA 吸(xi)附膜的中(zhong)央(yang)懸(xuan)空(kong)滴(di)加(jia) 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室溫(wen)放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離心 1 min。

14. 提(ti)取的總RNA，可直(zhi)接(jie)用於下遊實(shi)驗，或(huo)於-70℃保存(cun)，以(yi)免(mian)降(jiang)解。

相關產(chan)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用於所有 qPCR 儀(yi))

骨組(zu)織(zhi)總RNA快(kuai)速(su)提(ti)取試劑盒(he)(帶(dai)gDNA過(guo)濾(lv)器(qi)）