適(shi)用於從(cong)超微量(liang)的(de)細胞(bao)、組(zu)織(zhi)、昆(kun)蟲、植物(wu)、細菌等(deng)樣品中(zhong)提取總 RNA。配(pei)有DNase I，在RNA吸附膜上消(xiao)化(hua)gDNA，得(de)到(dao)的(de)RNA，無gDNA殘(can)留(liu)，可(ke)直(zhi)接(jie)用於RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)、RACE等(deng)。
微量(liang)/超(chao)微量(liang)樣品總RNA快速(su)提(ti)取試劑盒(he)

諾(nuo)博萊(lai)德 微量(liang)/超(chao)微量(liang)樣品總RNA快速(su)提(ti)取試劑盒(he)

超(chao)微量(liang)總 RNA 快速(su)提(ti)取試劑盒(he)（帶 DNase I）FlashPure Total RNA micro Kit(With DNase I)

目(mu)錄(lu)號(hao)：91516

產(chan)品內容

自(zi)備試劑

無水乙(yi)醇(chun)

具(ju)體(ti)產(chan)品的(de)參數(shu)以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)參數(shu)為準

產(chan)品簡介(jie)

FlashPure Total RNA micro Kit是超微量(liang)總RNA提取的(de)專用試劑盒(he)，處(chu)理(li)範(fan)圍(wei)壹般(ban)為細(xi)胞(bao)（1~106）或(huo)者組(zu)織(zhi)（< 5mg）。

適(shi)用於從(cong)超微量(liang)的(de)細胞(bao)、組(zu)織(zhi)、昆(kun)蟲、植物(wu)、細菌等(deng)樣品中(zhong)提取總 RNA。配(pei)有DNase I，在RNA吸附膜上消(xiao)化(hua)gDNA，得(de)到(dao)的(de)RNA，無gDNA殘(can)留(liu)，可(ke)直(zhi)接(jie)用於RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)、RACE等(deng)。

產(chan)品特點(dian)

1. 特殊(shu)微量(liang) 10 μg 離心(xin)柱(zhu)設(she)計，可(ke)以(yi)最di 6μl 洗脫(tuo)，可(ke)提(ti)高(gao) RNA 的(de)濃度(du)。

2. 特殊(shu)無墊(dian)圈(quan)離心(xin)柱(zhu)設(she)計，確保離心(xin)後無液體(ti)殘(can)留(liu)和汙染，保證 RNA純度(du)。

3. 獨(du)you的(de)糖酚去除(chu)劑(ji) PAD 可(ke)以(yi)清(qing)除(chu)植物(wu)多糖多酚或(huo)者昆(kun)蟲的(de)糖原(yuan)，幾丁(ding)質(zhi)多糖等雜質(zhi)，提(ti)高(gao)富(fu)含(han)雜質(zhi)的(de)昆蟲和植物(wu) RNA 的(de)提取(qu)質(zhi)量(liang)。

4. 無毒：免(mian)氯(lv)仿(fang)、免(mian)β-巰基(ji)乙(yi)醇(chun)！

5. 高(gao)質(zhi)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

6. 高(gao)效：提(ti)取全(quan)過程(cheng)僅需(xu) 30 min！

註(zhu)意事(shi)項：

1. 所(suo)有離心(xin)步驟必須在室溫(wen)（15~25℃）下進(jin)行(xing)。

2. 部(bu)分(fen)含多糖多酚、幾丁(ding)質(zhi)多糖或(huo)者次(ci)級代(dai)謝產物(wu)豐富(fu)的(de)昆蟲樣品，或(huo)者植物(wu)樣品，提(ti)取效(xiao)果不佳(jia)（如降(jiang)解）可(ke)以(yi)嘗試在裂(lie)解(jie)液 PRL 中(zhong)添(tian)加糖(tang)酚去除(chu)劑(ji) PAD 後提取。具體(ti)添(tian)加比(bi)例(li)為(wei) 10 體(ti)積(ji)（1ml）PRL：1 體(ti)積(ji)（100μl）糖酚去除(chu)劑(ji) PAD。

3. 不(bu)是多糖多酚的(de)材料不用加糖(tang)酚去除(chu)劑(ji) PAD。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

第(di)壹次(ci)使用前請(qing)先在(zai)漂洗液 RW 中(zhong)加入指(zhi)ding量(liang)無水乙(yi)醇(chun)，詳見瓶(ping)身的(de)標(biao)簽。

提(ti)示：

(壹(yi)) 樣品裂(lie)解勻(yun)漿：

a．組(zu)織(zhi)（動物(wu)、植物(wu)、昆蟲）：≤5 mg 組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru) 300 μl 裂解液 PRL，勻漿至(zhi)無明顯(xian)組(zu)織(zhi)塊(kuai)。

b．貼(tie)壁細胞(bao)：無需消(xiao)化(hua)，完quan吸棄(qi)培(pei)養(yang)基(ji)後，直接在培(pei)養(yang)板(ban)/皿(min)中(zhong)加入裂(lie)解液 PRL 裂解細胞(bao)，並(bing)用移(yi)液槍反復吹(chui)打(da)，幫助(zhu)裂(lie)解(jie)。

（≤10⁵ 細(xi)胞(bao)加 100μl 裂(lie)解液 PRL，≤10⁶ 細胞(bao)加 300μl 裂(lie)解液 PRL）。

c．懸(xuan)浮細胞(bao)：離心(xin)沈澱(dian)細(xi)胞(bao)(≤500 x g)，完quan去除(chu)上(shang)清(qing)後用裂解(jie)液PRL 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。可(ke)短(duan)暫(zan)渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩。

d．其(qi)它(ta)組(zu)織(zhi)：其(qi)他難(nan)裂解(jie)的(de)組(zu)織(zhi)，細(xi)菌，酵(jiao)母(mu)，植物(wu)勻漿需(xu)配(pei)合(he)高(gao)速珠(zhu)磨均質(zhi)儀器和適(shi)合(he)裂(lie)解珠(zhu)（玻(bo)璃珠(zhu)，鋼珠(zhu)，鋯珠(zhu)等）。

(二(er)) 樣品清(qing)理：

此(ci)步驟為(wei)可(ke)選步驟，主(zhu)要是針對(dui)動植物(wu)組(zu)織(zhi)和細胞(bao)，若研磨勻漿後不溶(rong)物(wu)碎(sui)片太多，可(ke)將(jiang)裂(lie)解物(wu) 12,000 rpm 離心(xin) 1 min，沈澱(dian)裂(lie)解(jie)困(kun)難的(de)碎(sui)片或(huo)者不(bu)溶(rong)物(wu)，將上清(qing)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi)新(xin)的(de) 1.5ml 離心(xin)管中(zhong)。對(dui)於樣品量(liang)很低(di)（細胞(bao)數≤105）)或(huo)勻漿後能充(chong)分(fen)裂解(jie)的(de)樣品無需此步驟。

(三(san)) 樣品純化(hua)：

1. 向(xiang)裂解(jie)物(wu)或(huo)上清(qing)中(zhong)加入等(deng)體(ti)積(ji)的(de)無水乙(yi)醇(chun)到(dao)上(shang)壹步的(de)中(zhong)吹打(da)混(hun)勻。

2. 將(jiang)上壹步(bu)的(de)混(hun)合(he)液加入超微量(liang) RNA 吸附柱(zhu)（吸附柱(zhu)放(fang)入收(shou)集(ji)管中(zhong)），13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒棄(qi)濾(lv)液。此時，RNA 被吸附在膜上。

3. 加(jia)入 350 μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒棄(qi)濾(lv)液。

4. DNase I 工作液配(pei)制：取(qu) 20 μl DNase Buffer 和 2 μl DNase I 至(zhi)新(xin)的(de)RNase-Free 離心(xin)管中(zhong)，輕輕吹(chui)打(da)混(hun)勻。（處(chu)理多個(ge)樣品，按(an)照比例放大(da)）

5. 向(xiang) RNA 吸附膜中(zhong)央加入(ru) 22 μl 的(de) DNase I 工作液，室溫放置(zhi) 15 min。

6. 加(jia)入 350μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒棄(qi)濾(lv)液。

7. 加(jia)入 500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心(xin) 30 sec，倒棄(qi)濾(lv)液。

8. 重(zhong)復步(bu)驟(zhou) 7 壹(yi)次(ci)。

9. 將(jiang) RNA 吸附柱(zhu)放(fang)回空(kong)收(shou)集(ji)管中(zhong)，13,000 rpm 離心(xin) 2 min，除(chu)去膜上殘(can)留(liu)的(de)乙(yi)醇(chun)。

10. 取(qu)出 RNA 吸附柱(zhu)，放(fang)入 RNase-free1.5 ml 離心(xin)管中(zhong)，向(xiang) RNA 吸附膜的(de)中(zhong)央部位(wei)懸空(kong)滴(di)加(jia) 30-50μl RNase-free H2O，室溫(wen)放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離心(xin) 1 min。

11. 提(ti)取的(de)總 RNA，可(ke)直(zhi)接(jie)用於下遊(you)實驗，或(huo)於-70℃保存(cun)，以(yi)免(mian)降(jiang)解。

相(xiang)關(guan)產(chan)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用於所(suo)有qPCR儀)

附錄(lu)：

壹(yi)、液氮研磨（自(zi)動研磨儀）—— 適(shi)用於各(ge)種(zhong)樣本

a. 把(ba)研磨模塊(kuai)也丟(diu)到(dao)液氮中(zhong)預冷，直到(dao)沒(mei)有氣(qi)泡冒(mao)出(chu)視(shi)為預冷完畢(bi)。

b. 在(zai) 2.0 ml 液氮研磨管中(zhong)放入 3 mm 鋼(gang)珠(zhu) 3 粒，放(fang)進(jin)≤50 mg 樣本，投入液氮中(zhong)預冷。

c. 把(ba)預冷好(hao)的(de)離心(xin)管插(cha)入研磨模塊(kuai)中(zhong)，放進(jin)研磨儀，設置(zhi) 55 個(ge)頻(pin)率(lv)， 震蕩(dang) 30~60 sec。（以(yi)北(bei)京赫得(de)京 N9548 為例(li)）

d. 研磨完成(cheng)後，馬(ma)上(shang)加(jia) 550 μl 裂(lie)解液 RLA，劇(ju)烈渦(wo)旋(xuan) 30 sec，混(hun)勻。

e. 將(jiang)裂解物(wu) 13,000 rpm 離心(xin) 5~10 min，沈澱(dian)不(bu)能(neng)裂(lie)解的(de)碎(sui)片。

二(er)、免液氮直接研磨（自(zi)動研磨儀）—— 適(shi)用於新(xin)鮮(xian)樣本

a. 在(zai) 2.0 ml 液氮研磨管中(zhong)加入 5 mm 鋼(gang)珠(zhu) 1 粒，加(jia) 1 ml 裂(lie)解液 RLA，放進(jin)≤100 mg 樣本，設置(zhi) 60 個(ge)頻(pin)率(lv)，震蕩(dang) 2 min。

b. 將(jiang)裂解物(wu) 13,000 rpm 離心(xin) 5~10 min，沈澱(dian)不(bu)能(neng)裂(lie)解的(de)碎(sui)片。

微量(liang)/超(chao)微量(liang)樣品總RNA快速(su)提(ti)取試劑盒(he)