裂解液(ye) RL 是 RNAzol (Trizol )，配(pei)合(he) miRNA 專用(yong)的(de)溶(rong)液(ye)體系，專用於快(kuai)速(su)提取(qu)各種(zhong)細胞(bao)、動物、植(zhi)物、真(zhen)菌(jun)、昆蟲(chong)、細菌(jun)、微生(sheng)物等(deng)樣品(pin)的(de) miRNA和(he)其(qi)它(ta)各(ge)種小(xiao) RNA(15-30 nt)。
通(tong)用型(xing)microRNA快(kuai)速(su)提取(qu)試劑盒(he)

諾博(bo)萊德(de) 通(tong)用型(xing)microRNA快(kuai)速(su)提取(qu)試劑盒(he)

Universal miRNA Mini Kit通(tong)用型(xing) microRNA 快(kuai)速(su)提取(qu)試劑盒(he)

目錄號(hao)：91015

產品(pin)內(nei)容(rong)

自(zi)備(bei)試(shi)劑

無水(shui)乙(yi)醇

保(bao)存條件(jian)

室溫（15 ~ 25℃）

具體產品(pin)的(de)參(can)數(shu)以收到(dao)產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)的(de)參(can)數(shu)為(wei)準

產品(pin)簡介

裂解液(ye) RL 是 RNAzol (Trizol )，配(pei)合(he) miRNA 專用(yong)的(de)溶(rong)液(ye)體系，專用於快(kuai)速(su)提取(qu)各種(zhong)細胞(bao)、動物、植(zhi)物、真(zhen)菌(jun)、昆蟲(chong)、細菌(jun)、微生(sheng)物等(deng)樣品(pin)的(de) miRNA和(he)其(qi)它(ta)各(ge)種小(xiao) RNA(15-30 nt)。

可以提出來包(bao)含(han) micoRNA 的(de)總 RNA，用(yong)於(yu) microRNA 的(de) RT、qPCR檢測，以及全轉錄組測序等(deng)；根據(ju)需要，也可(ke)以壹次(ci)性把(ba) microRNA 和(he)總 RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分(fen)別(bie)提出來。

但是(shi)市場上(shang)常(chang)見(jian)的(de)離(li)心柱型(xing)的(de) RNA Kit/總 RNA Kit 不(bu)能(neng)有(you)效(xiao)吸附(fu)回收miRNA，Trizol 沈澱抽(chou)提法也不(bu)能(neng)有(you)效(xiao)沈澱回收 miRNA（生(sheng)物通(tong)上(shang)有(you)專(zhuan)題(ti)文(wen)章(zhang)闡述）。

產品(pin)特(te)點(dian)

1. 本(ben)公(gong)司(si)生(sheng)產的(de) Universal miRNA Kit 質量(liang)優(you)異，可(ke)以wan美替(ti)代 Qiagen 的(de)miRNeasy Mini kit。

2. 可在(zai)常溫下提取(qu) RNA，不需(xu)要 4℃離(li)心機(ji)；亦(yi)可以兼容(rong) 4℃離(li)心機(ji)。

註(zhu)意(yi)事項(xiang)

1. 采集 RNA 樣本(ben)時(shi)，把新鮮組(zu)織(zhi)樣本(ben)浸(jin)入(ru) RNAsafe (RNA 樣(yang)品(pin)保(bao)存液(ye)，Cat#91115-100)中，可(ke)在 37℃保(bao)存壹天(tian)，可(ke)在 25℃保(bao)存壹周，可在(zai) 4℃ 保(bao)存壹個(ge)月，在(zai)-20℃或(huo)者(zhe)–80℃長期(qi)保(bao)存。

2. 樣品(pin)應(ying)避免(mian)反復(fu)凍融，否則(ze)會影(ying)響(xiang) RNA 的(de)提取(qu)得率(lv)和(he)質量(liang)。

3. 樣品(pin)加入(ru)裂解液(ye) RL（RNAzol）勻漿(jiang)後(hou)，加氯仿(fang)前，樣(yang)品(pin)可在–80℃保(bao)存壹個(ge)月以上(shang)；提取(qu)過(guo)程(cheng)中應(ying)使用(yong)不含(han) RNase 的(de)吸頭(tou)和(he)器皿(min)。

重要(yao)提示：

① 第(di)壹次(ci)使用(yong)前, 先(xian)在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入(ru)

指ding量(liang)無(wu)水乙(yi)醇，詳(xiang)見瓶上(shang)的(de)標(biao)簽。

② 所有(you)離(li)心步(bu)驟均需要在室溫（15~37℃）下進(jin)行(xing)，提取(qu)效(xiao)果更(geng)佳！

操作步(bu)驟（可得(de)到(dao)包(bao)含(han) miRNA 的(de)總 RNA）

1. 材料處(chu)理：

a．組織(zhi)（動物、植(zhi)物、真(zhen)菌(jun)）：將組(zu)織(zhi)在液(ye)氮中磨成(cheng)細粉(fen)。取(qu)適(shi)量(liang)細粉(fen)加

入(ru) 1 ml 裂解液(ye) RL，劇烈渦(wo)旋(xuan)震(zhen)蕩，充分(fen)混(hun)勻(yun)。

樣品(pin)投入(ru)量(liang)：動物組(zu)織(zhi)為(wei) 30~50 mg；植(zhi)物/真(zhen)菌(jun)為(wei)：50~100 mg。

b．單層貼壁(bi)培(pei)養(yang)細胞(bao)：吸去(qu)培(pei)養(yang)液(ye)，直接(jie)在培(pei)養(yang)皿(min)/瓶中加入(ru)適(shi)量(liang)裂解液(ye)RL，每(mei) 10cm2 加 1ml 裂解液(ye) RL，用移(yi)液(ye)器反(fan)復(fu)抽打(da)幾(ji)次(ci)，幫助裂解。

c． 懸(xuan)浮細胞(bao)：離(li)心收集細胞(bao)，吸棄上(shang)清(qing)，每(mei) 5×106個(ge)細胞(bao)加 1ml 裂解液(ye)RL。加裂解液(ye) RL 前不(bu)要(yao)洗(xi)滌(di)細胞(bao)，以免降(jiang)解(jie) RNA。

d．血(xue)液(ye)：取(qu)新鮮血(xue)液(ye)，加入(ru) 3 倍體積(ji)裂解液(ye) RL，充分(fen)振(zhen)蕩混勻(yun)。（推(tui)薦(jian)0.25 ml 血(xue)液(ye)+0.75 ml 裂解液(ye) RL）

2. 將裂解物在(zai)室溫下放(fang)置 5 min，使得核酸蛋(dan)白(bai)復(fu)合(he)物完(wan)quan分(fen)離(li)。

3. 加入(ru) 200μl 氯(lv)仿(fang)，劇烈振蕩 15 秒，並在室溫下放(fang)置 2 分鐘，

4. 13,000 rpm 離(li)心 10 分(fen)鐘。

5. 吸取(qu) 500 μl 上(shang)清(qing)轉入(ru)新的(de) 2.0 ml 離(li)心管(guan)中，加入(ru) 1.5 倍體積(ji)（750 μl）的(de)無水(shui)乙(yi)醇，吹打(da)混(hun)勻(yun)。

6. 每(mei)次(ci)轉移(yi)≤750 μl上(shang)清(qing)混(hun)合(he)液(ye)至RNA吸附柱中，12,000 rpm離(li)心1 min，倒棄(qi)濾液(ye)。此時(shi) RNA 被(bei)吸(xi)附(fu)在(zai)膜(mo)上(shang)，重復(fu)此過(guo)程(cheng)，直到(dao)所(suo)有(you)溶(rong)液(ye)都(dou)上(shang)柱。

7. 向 RNA 吸附(fu)柱內(nei)加入(ru) 700 μl Wash Solution 1（檢(jian)查是否已(yi)加入(ru)乙(yi)醇），12,000 rpm 離(li)心 1 min，倒棄(qi)濾液(ye)。

8. 向 RNA 吸附(fu)柱內(nei)加入(ru) 500 μl Wash Solution 2/3（是(shi)否已(yi)加入(ru)乙(yi)醇），12,000 rpm 離(li)心 1 min，倒棄(qi)濾液(ye)。

9. 重復(fu)步(bu)驟 8 壹次(ci)。

10. 將 RNA 吸(xi)附(fu)柱放回空(kong)收集管(guan)中，12,000 rpm 離(li)心 2 min，除去(qu)乙(yi)醇。

11. 取(qu)出 RNA 吸(xi)附柱，放入(ru)新的(de) RNase-Free 1.5 ml 離(li)心管(guan)中，向吸附(fu)膜(mo)的(de)中央(yang)部位(wei)懸(xuan)空滴加50~100μl RNase-Free ddH2O，室溫放置1min，12,000rpm離(li)心1min，管(guan)底(di)即(ji)：包含(han)microRNA的(de)總RNA。

12. 得到(dao)的(de) RNA，可直接(jie)用於(yu)下遊(you)實(shi)驗(yan)，或(huo)於-70℃保(bao)存，避免(mian) RNA 降解(jie)。

附：microRNA 富(fu)集方法（僅(jin)僅(jin)提取(qu) microRNA，不包(bao)含(han)>200 nt 其(qi)它(ta)總(zong)RNA 成份(fen)。壹般不(bu)推(tui)薦(jian)）

註(zhu)意(yi)：當非(fei)特(te)異(yi)擴增較(jiao)多(duo)或(huo)者(zhe)擴增背(bei)景較(jiao)高時(shi)，可以嘗試使(shi)用富(fu)集方法提取(qu)的(de)microRNA。

1. 按照(zhao)前面(mian)標(biao)準操作步(bu)驟 1 ~ 4 操作，直到(dao)得(de)到(dao)上(shang)清(qing)。

2. 吸取(qu) 500 μl 上(shang)清(qing)至新的(de) 2.0 ml 離(li)心管(guan)，加入(ru)等(deng)體積(ji) 70％乙(yi)醇（必須是室溫的(de)），吹打(da)混(hun)勻(yun)。

3. 吸取(qu) 700 μl 上(shang)清(qing)混(hun)合(he)液(ye)，加入(ru)壹個(ge) RNA 吸附(fu)柱中，12,000 rpm 離(li)心 1min，收集濾液(ye)。並將濾(lv)液(ye)轉移(yi)至壹個(ge)新的(de)離(li)心管(guan)，然(ran)後(hou)把(ba) RNA 吸附柱放回空(kong)的(de)收集管(guan)內(nei)，再加入(ru)剩(sheng)下的(de)混合(he)物，離(li)心，收集濾液(ye)。

此時(shi)，濾液(ye)含(han)有(you) microRNA, RNA 吸(xi)附(fu)柱的(de)膜(mo)上(shang)是(shi)去(qu)除了 microRNA 的(de)總RNA（mRNA、tRNA、rRNA），如(ru)果(guo)有(you)需(xu)要(yao)，可(ke)以按照(zhao)前(qian)面(mian)標(biao)準操作步(bu)驟7－11 操作，漂(piao)洗(xi)、洗(xi)脫，得到(dao)去(qu)除了 microRNA 的(de)總 RNA。

4. 較(jiao)精(jing)確估(gu)計濾液(ye)體積(ji)，加入(ru) 0.65 倍體積(ji)無(wu)水(shui)乙(yi)醇（必須是室溫的(de)），吹打(da)混(hun)勻(yun)，不(bu)要(yao)離(li)心。

5. 將≤750 μl 濾(lv)液(ye)混合(he)物加入(ru) microRNA 吸(xi)附柱中， 12,000 rpm 離(li)心 1min，micoRNA 被(bei)吸(xi)附(fu)在(zai)膜(mo)上(shang)，倒棄(qi)廢液(ye)。重復(fu)此過(guo)程(cheng)，直到(dao)所(suo)有(you)濾(lv)液(ye)混合(he)物都(dou)上(shang)柱。

6. 按照(zhao)前面(mian)標(biao)準操作步(bu)驟 7－11 操作漂(piao)洗(xi)，洗(xi)脫得到(dao)富(fu)集的(de) microRNA。

相(xiang)關(guan)產(chan)品(pin)：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（P418-25 + P419-500）

通(tong)用型(xing)microRNA快(kuai)速(su)提取(qu)試劑盒(he)