FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免氯(lv)仿(fang)）是(shi)通(tong)用型 microRNA快速提(ti)取(qu)試劑盒（Cat#R015）的(de)升(sheng)級(ji)版，專用於(yu)提取(qu)各種動(dong)物組織(zhi)、細胞(bao)的(de)miRNA（包含(han) miRNA 的(de)總 RNA），提(ti)取(qu)過程(cheng)不(bu)再(zai)需要使用氯(lv)仿(fang)，並(bing)采用獨(du)you的(de) gDNA 過濾(lv)器(qi)，高(gao)效(xiao)濾(lv)除基因組，得到包(bao)含(han) miRNA 的(de)總 RNA
動(dong)物組織(zhi)/細胞(bao)microRNA快(kuai)速提(ti)取(qu)試劑盒

諾(nuo)博萊德 動(dong)物組織(zhi)/細胞(bao)microRNA快(kuai)速提(ti)取(qu)試劑盒

FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit動物組織(zhi)/細胞(bao) microRNA 快(kuai)速提(ti)取(qu)試劑盒（免氯(lv)仿(fang)）

目(mu)錄(lu)號(hao)：91409

產品內(nei)容(rong)

自(zi)備(bei)試劑

無水(shui)乙(yi)醇

保(bao)存條(tiao)件(jian)

室(shi)溫(wen)（15 ~ 25℃）

具體產品的(de)參數(shu)以(yi)收(shou)到產(chan)品說(shuo)明書的(de)參數(shu)為準

產品簡介(jie)

FlashPure Tissue/Cell miRNA Mini Kit（免氯(lv)仿(fang)）是(shi)通(tong)用型 microRNA快速提(ti)取(qu)試劑盒（Cat#R015）的(de)升(sheng)級(ji)版，專用於(yu)提取(qu)各種動(dong)物組織(zhi)、細胞(bao)的(de)miRNA（包含(han) miRNA 的(de)總 RNA），提(ti)取(qu)過程(cheng)不(bu)再(zai)需要使用氯(lv)仿(fang)，並(bing)采用獨(du)you的(de) gDNA 過濾(lv)器(qi)，高(gao)效(xiao)濾(lv)除基因組，得到包(bao)含(han) miRNA 的(de)總 RNA，可(ke)直(zhi)接用於(yu) miRNA 和 mRNA 的(de) RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、測(ce)序等。

但是(shi)，市(shi)場上常(chang)見(jian)的(de)離(li)心(xin)柱型的(de) RNA Kit/總 RNA Kit，不(bu)能(neng)有(you)效(xiao)吸附回(hui)收(shou) miRNA；Trizol 沈澱抽(chou)提法(fa)也不(bu)能(neng)有(you)效(xiao)沈澱回(hui)收(shou)全部 miRNA（生(sheng)物通(tong)上有(you)專題(ti)文(wen)章闡述）。

註意(yi)事項

1. 樣品應避(bi)免反(fan)復凍融，否則會影響 RNA 的(de)提取(qu)得率和質(zhi)量(liang)。

2. 樣品加(jia)入裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus 勻漿後(hou)，樣品可(ke)在–80℃保(bao)存(cun)壹(yi)個月以(yi)上。

3. RNA 在裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus 中(zhong)時不(bu)會被(bei) RNase 降解(jie)，但(dan)後(hou)續(xu)處理(li)過(guo)程(cheng)中(zhong)應使(shi)用不(bu)含(han) RNase 的(de)吸頭(tou)和器(qi)皿。

4. 取(qu)RNA樣本(ben)時，把新鮮組織(zhi)樣本(ben)浸(jin)入(ru) RNAsafe (RNA 樣品保(bao)存液(ye)，91115-100)中(zhong)，可(ke)在 37℃保(bao)存(cun)壹(yi)天，在 25℃保(bao)存(cun)壹(yi)周，在 4℃保(bao)存(cun)壹(yi)個月，在-20℃或(huo)者–80℃長(chang)期(qi)保(bao)存。

重要提示：

① 首(shou)ci使(shi)用前, 先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、70%乙(yi)醇

中(zhong)加(jia)入指(zhi)ding量(liang)無水(shui)乙(yi)醇，詳(xiang)見(jian)瓶上的(de)標(biao)簽。

② 所有(you)離(li)心(xin)步(bu)驟(zhou)均需要在室(shi)溫(wen)（15~37℃）下(xia)進(jin)行，提(ti)取(qu)效(xiao)果更(geng)佳(jia)！

操作步(bu)驟(zhou)

1. 動物組織(zhi)：

a．電動勻漿：取(qu)新鮮組織(zhi) 10~20 mg 加(jia)入 500 μl 裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus，電動勻漿，直(zhi)到無明顯(xian)組織(zhi)塊即(ji)可(ke)。

b．液(ye)氮研磨(mo)：液(ye)氮研磨(mo)組織(zhi)成細粉(fen)，取(qu) 10~20 mg 組織(zhi)細粉(fen)加(jia)入500μl 裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus，劇(ju)烈渦旋(xuan)振(zhen)蕩，直(zhi)到無明顯(xian)粉(fen)末(mo)團(tuan)即(ji)可(ke)。

c． 將(jiang)裂解(jie)物 13,000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，沈澱不(bu)能(neng)裂解(jie)的(de)碎片。下(xia)接(jie)操作步(bu)驟(zhou) 3。

2. 細胞(bao)

a. 懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)：離(li)心(xin)收(shou)集細胞(bao)，加(jia) 500 μl 裂解(jie)液(ye) MRL Plus（<8x10⁶ 細胞(bao)）, 吹打混勻，劇(ju)烈渦旋(xuan)振(zhen)蕩20秒(miao)，充分裂解(jie)。

b. 貼(tie)壁細胞(bao)：不(bu)需要消化，吸(xi)棄(qi)培養基後，直(zhi)接在培養皿中加(jia)裂解(jie)液(ye)MRL Plus（每(mei)<8x106細胞(bao)加(jia)500μl 裂解(jie)液(ye) MRL Plus）進(jin)行消(xiao)化(hua)、裂(lie)解(jie)； 或(huo)者，先用yi酶(mei)消(xiao)化(hua)後離(li)心(xin)收(shou)集細胞(bao)，然(ran)後加(jia)入裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus，吹打混勻，劇(ju)烈渦旋(xuan)振(zhen)蕩 20 秒(miao)，充分裂解(jie)。

c. 下(xia)接(jie)操作步(bu)驟(zhou) 3。

3. 將(jiang)裂解(jie)勻漿物（或(huo)離(li)心(xin)得到的(de)上清(qing)）全部加(jia)入 gDNA 過(guo)濾(lv)器(qi)中(zhong)（過濾(lv)器(qi)放(fang)入收(shou)集管中），13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min，保留濾(lv)液(ye)（RNA 在濾(lv)液(ye)中(zhong)）。

4. 向(xiang)濾(lv)液(ye)中(zhong)加(jia)入 1.25 倍(bei)體(ti)積(ji)的(de)無水(shui)乙(yi)醇，用移液(ye)器(qi)吹打混勻。

5. 每(mei)次(ci)轉(zhuan)移≤750 μl濾(lv)液(ye)混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離(li)心(xin)1min，此時，RNA 被(bei)吸附在膜(mo)上，棄(qi)濾(lv)液(ye)。重復此(ci)過(guo)程(cheng)，直(zhi)到溶(rong)液(ye)全部上柱(zhu)。

6. 加(jia)入 700 μl Wash Solution 1（檢(jian)查(zha)是(shi)否已(yi)加(jia)入乙(yi)醇），室(shi)溫(wen)放(fang)置 1 min, 13,000 rpm 離(li)心(xin)30sec，棄(qi)濾(lv)液(ye)。

7. 加(jia)入 500 μl Wash Solution 2/3（檢(jian)查(zha)是(shi)否已(yi)加(jia)入乙(yi)醇），13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，棄(qi)濾(lv)液(ye)。

8. 重復步(bu)驟(zhou) 7。

9. 將(jiang) RNA 吸附柱放回(hui)空收(shou)集管中，13,000 rpm 離(li)心(xin) 2 min，除去膜(mo)上殘留的(de)留乙(yi)醇。

10. 取(qu)出 RNA 吸附柱，放入壹(yi)個新的(de) RNase-free 1.5 ml 離(li)心(xin)管中，向(xiang) RNA吸(xi)附膜的(de)中央(yang)懸空滴加(jia) 30-50 μl RNase-free H2O， 室溫(wen)放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min，管底即(ji)包含(han) miRNA 的(de)總 RNA。

11. 得到 RNA/miRNA，可(ke)直(zhi)接用於(yu)下(xia)遊(you)實驗，或(huo)於(yu)-70℃保存(cun)，以(yi)免降解(jie)。

相(xiang)關(guan)產品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加(jia)尾(wei)法(fa)）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加(jia)尾(wei)法(fa)）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

附錄：

microRNA 富(fu)集方(fang)法(fa)（僅(jin)僅(jin)提(ti)取(qu) microRNA，不(bu)包(bao)含(han)>200 nt 其(qi)它(ta)總 RNA

成份(fen)。壹(yi)般不(bu)推(tui)薦）

註意(yi)：當非(fei)特(te)異擴(kuo)增(zeng)較多(duo)或(huo)者擴(kuo)增(zeng)背景(jing)較高(gao)時，可(ke)以(yi)嘗(chang)試使用富(fu)集方(fang)法(fa)提取(qu)的(de) microRNA。

1. 按照前面步(bu)驟(zhou) 1、2 操作，直(zhi)到得(de)到上清(qing)或(huo)者裂(lie)解(jie)物。

2. 向(xiang)上清(qing)或(huo)者裂(lie)解(jie)物中(zhong)加(jia)入 0.5 倍(bei)體(ti)積(ji)的(de)無水(shui)乙(yi)醇（必(bi)須(xu)是(shi)室溫的(de)），吹打混勻。

3. 將(jiang)全部混合液(ye)加(jia)入壹(yi)個 gDNA 過濾(lv)器(qi)中(zhong)， 13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min，收(shou)集濾(lv)液(ye)（microRNA 在濾(lv)液(ye)中(zhong)）。

此(ci)時，RNA 吸附柱的(de)膜上是(shi)去除了 microRNA 的(de)總 RNA（mRNA、tRNA、rRNA），如果有(you)需要，可(ke)以(yi)按照前面標(biao)準操作步(bu)驟(zhou) 6－10 操作，經漂(piao)洗(xi)、洗(xi)脫(tuo)後(hou)，得(de)到去(qu)除了 microRNA 的(de)總 RNA。

4. 較精(jing)確估計(ji)濾(lv)液(ye)體(ti)積(ji)，加(jia)入等體積(ji)的(de)無水(shui)乙(yi)醇（必(bi)須(xu)是(shi)室溫的(de)），吹打混勻，不(bu)要離(li)心(xin)。

5. 每(mei)次(ci)轉(zhuan)移≤750 μl濾(lv)液(ye)混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm離(li)心(xin)1 min，micoRNA 被(bei)吸附在膜(mo)上，倒棄(qi)濾(lv)液(ye)。重復此(ci)過(guo)程(cheng)，直(zhi)到所(suo)有(you)濾(lv)液(ye)混合物都(dou)上柱(zhu)。

6. 按(an)照前面標(biao)準操作步(bu)驟(zhou) 6－10，經漂(piao)洗(xi)，洗(xi)脫(tuo)後(hou)，得(de)到 microRNA。

動物組織(zhi)/細胞(bao)microRNA快(kuai)速提(ti)取(qu)試劑盒