適用於提取果實(shi)、種(zhong)子、中草(cao)藥的總(zong) RNA（包括 microRNA 的總(zong) RNA），也(ye)可(ke)以(yi)壹次性(xing)分別提取出 microRNA 和(he)總 RNA（>200 nt）。
果實(shi)/種(zhong)子microRNA快(kuai)速(su)提取試劑盒

諾博(bo)萊(lai)德 果(guo)實(shi)/種(zhong)子microRNA快(kuai)速(su)提取試劑盒

果(guo)實(shi)/種(zhong)子 microRNA 快(kuai)速(su)提取試劑盒FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit

目錄號(hao)：91400

產(chan)品(pin)內容(rong)

自(zi)備試(shi)劑

無(wu)水乙(yi)醇(chun)

保存(cun)條(tiao)件

室溫(wen)（15 ~ 25℃）

具(ju)體(ti)產(chan)品(pin)的參(can)數以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)的參(can)數為準(zhun)

產(chan)品(pin)簡(jian)介

市場(chang)上(shang)常(chang)見(jian)的離(li)心(xin)柱(zhu)型(xing)的 RNA Kit/總(zong) RNA Kit，不能有(you)效(xiao)吸(xi)附(fu)回(hui)收(shou)miRNA；Trizol 抽(chou)提法(fa)也(ye)不(bu)能有(you)效(xiao)沈(chen)澱(dian)回(hui)收(shou)全(quan)部(bu) miRNA（生(sheng)物通上(shang)有(you)專題(ti)文(wen)章闡(chan)述）。

適用於提取果實(shi)、種(zhong)子、中草(cao)藥的總(zong) RNA（包括 microRNA 的總(zong) RNA），也(ye)可(ke)以(yi)壹次性(xing)分別提取出 microRNA 和(he)總 RNA（>200 nt）。

FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit 是糖(tang)酚(fen)含量巨(ju)豐(feng)富(fu)、次級代(dai)謝(xie)產(chan)物巨多(duo)的果(guo)實(shi)、種(zhong)子、中草(cao)藥等(deng)樣(yang)本 microRNA 提取的最jia選擇(ze)，還(hai)可(ke)以提取絕(jue)大多數(shu)復雜(za)植(zhi)物如(ru)棉(mian)花(hua)、楊樹(shu)、冬(dong)青、月(yue)季(ji)、丹(dan)參(can)等(deng) microRNA，當(dang)然(ran)本試(shi)劑盒也(ye)適用於擬(ni)南芥、水稻、小(xiao)麥、煙草、水(shui)稻等(deng)各種(zhong)簡單樣品(pin)。

產(chan)品(pin)特(te)點

本公司生產(chan)的 FlashPure Fruit/Seed miRNA Mini Kit 質量優(you)異(yi)，解決(jue)了(le)很(hen)多果(guo)實(shi)、種(zhong)子、中草(cao)藥等(deng)復(fu)雜(za)植(zhi)物 miRNA 難以(yi)成功(gong)提取的世(shi)紀(ji)難(nan)題(ti)。

註(zhu)意事(shi)項

1. 如(ru)果(guo) FSL 有(you)析出或者沈澱(dian)，請(qing)將(jiang)其(qi)置(zhi)於(yu) 65℃水(shui)浴中，重新溶解後(hou)使用。

2. Wash Solution 2/3 加入乙(yi)醇(chun)使用幾天後(hou)，可(ke)能出現沈(chen)澱(dian)晶(jing)體(ti)，並不(bu)影響使用，取其(qi)上(shang)清(qing)使用即可(ke)。

3. 所(suo)有(you)離(li)心(xin)步(bu)驟(zhou)均(jun)需(xu)要(yao)在室溫(wen)（15~37℃）下進行。

4. 樣品(pin)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟：

重(zhong)要提示(shi)：

① 第(di)壹次使用前(qian)，請(qing)先(xian)在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中加入無(wu)水(shui)乙醇，加入體(ti)積(ji)詳見(jian)瓶(ping)上(shang)的標簽(qian)。

② 操作(zuo)前(qian)，取 1 ml 裂解液(ye) FSL 至(zhi) 2 ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，加入 5%的 β-巰基(ji)乙(yi)醇（例(li)如(ru) 1 ml FSL 加 50 μl β-巰基(ji)乙(yi)醇），顛(dian)倒混(hun)勻後(hou)，65°C 水(shui)浴(yu)預(yu)熱(re)。

多(duo)個(ge)樣(yang)本請(qing)按(an)比(bi)例(li)放(fang)大(da)。

③ β-巰基(ji)乙(yi)醇是裂解液(ye) FSL 的關鍵(jian)成(cheng)分，必(bi)要的時(shi)候，可以(yi)提高(gao)終(zhong)濃(nong)度到(dao)10~20%，來(lai)防(fang)止(zhi)樣品(pin)褐(he)化(hua)。如(ru)果(guo)碰(peng)到(dao)特(te)別復(fu)雜(za)的植(zhi)物，可以(yi)嘗試(shi)在裂解液(ye)中(zhong)再(zai)加入 PVP40 至(zhi)終濃(nong)度 2%。

1. 材料處(chu)理(li)：

a．在液氮中研磨(mo)植物組織(zhi)成細(xi)粉(fen)，轉(zhuan)移(yi) 30～200 mg 細(xi)粉(fen)至(zhi) 65℃預(yu)熱(re)的裂解液(ye) FSL（已(yi)加有(you) β-巰基(ji)乙(yi)醇）中(zhong)，立即劇(ju)烈渦旋震(zhen)蕩(dang) 30 Sec，充分混(hun)勻。

註意：水分多(duo)的樣(yang)品(pin)（如(ru)草(cao)莓、西(xi)瓜果肉(rou)）投入 150～200 mg；水(shui)分含(han)量少的樣(yang)品(pin)（如(ru)成(cheng)熟的小(xiao)麥/玉米/大豆(dou)種(zhong)子）投入 30～40 mg；澱(dian)粉(fen)含(han)量高(gao)的塊莖投入 40～80mg；葉(ye)片(pian)投入 50～100 mg。

b．短暫回(hui)放(fang)至(zhi) 65℃水浴 5 min，中間(jian)偶(ou)爾(er)顛(dian)倒 1-2 次，幫(bang)助裂解。

c． 將(jiang)裂解物 13,000 rpm 離(li)心(xin) 5～10 min，沈(chen)澱(dian)不(bu)能裂解的碎(sui)片(pian)。

d．轉(zhuan)移(yi)上清(qing)有(you) 800～900 μl。

2. 小(xiao)心吸取 600 μl 裂解物上清(qing)轉入壹個(ge) gDNA 過濾器(qi)中（過濾器(qi)放(fang)入(ru)收(shou)集(ji)管中），13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min，保留濾液(ye)（RNA 在濾液(ye)中），並把濾液(ye)轉移(yi)至(zhi)壹個(ge) RNase-Free 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，備(bei)用。 把 gDNA 過濾器(qi)放(fang)入(ru)空(kong)收(shou)集管，再(zai)把剩(sheng)余(yu)的上(shang)清(qing)轉入 gDNA 過濾器(qi)，再(zai)次 13,000 rpm 離(li)心(xin)1 min，保留濾液(ye)備用。

3. 向兩(liang)管(guan)濾液(ye)中分別加入 1.25 倍(bei)體(ti)積(ji)的無(wu)水乙(yi)醇(chun) (例(li)如(ru)：600 μl 濾液(ye)加750 μl 無水(shui)乙(yi)醇)，吹打(da)混(hun)勻(yun)。

4. 每次轉(zhuan)移(yi)≤750 μl濾液(ye)混合(he)液至(zhi)RNA吸附柱中(zhong)，13,000 rpm離(li)心(xin)1min，此(ci)時(shi) RNA 被(bei)吸附(fu)在膜上，倒棄(qi)濾液(ye)。重復(fu)此過程，直到(dao)溶液全(quan)部(bu)上(shang)柱(zhu)。

5. 加入 700 μl Wash Solution 1（檢查是否已加入乙(yi)醇(chun)!），室溫(wen)放(fang)置(zhi) 1 min,13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，棄(qi)濾液(ye)。

6. 加入 500 μl Wash Solution 2/3（請(qing)檢查是否已加入無(wu)水(shui)乙醇!），13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，棄(qi)濾液(ye)。

7. 重復步(bu)驟 6。

8. 將(jiang) RNA 吸(xi)附(fu)柱放(fang)回(hui)空(kong)收(shou)集管中，13,000 rpm 離(li)心(xin) 2 min，除(chu)去膜上殘(can)留的乙(yi)醇。

9. 取出 RNA 吸(xi)附柱，放(fang)入(ru)壹個(ge) RNase-free 1.5 ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，向(xiang)吸(xi)附膜的中(zhong)央懸(xuan)空(kong)滴加 30～50 μl 的 RNase-free H2O，室溫(wen)放(fang)置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min，管(guan)底(di)即包含 miRNA 的總(zong) RNA。

10. 提取的 RNA，可(ke)直接用於下遊(you)實(shi)驗(yan)，或於(yu)-70℃保存(cun)，以(yi)免降解。

相(xiang)關產(chan)品(pin)：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾法(fa)）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾法(fa)）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

果(guo)實(shi)/種(zhong)子microRNA快(kuai)速(su)提取試劑盒