裂(lie)解(jie)液(ye) RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是濃縮(suo)型(xing)的(de) Trizol )，配合(he) miRNA 專用(yong)的溶液(ye)體系，專(zhuan)用(yong)於從(cong)動物(wu)及人體血(xue)漿和(he)血(xue)清中(zhong)提(ti)取miRNA 和(he)其(qi)它(ta)各(ge)種小 RNA(15-30 nt )。
血(xue)清/血(xue)漿microRNA提取(qu)試劑盒(he)

諾博(bo)萊(lai)德(de) 血(xue)清/血(xue)漿microRNA提取(qu)試劑盒(he)

Serum/Plasma miRNA Mini Kit血(xue)清/血(xue)漿 microRNA 快速(su)提取(qu)試劑盒(he)

目(mu)錄(lu)號：91416

產品內容(rong)

自(zi)備試劑

無(wu)水乙(yi)醇(chun)、氯仿

保(bao)存條件

室(shi)溫（15 ~ 25℃）

具(ju)體產品的參數以(yi)收到(dao)產品說明(ming)書(shu)的(de)參數為(wei)準

產品簡介(jie)

裂(lie)解(jie)液(ye) RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是濃縮(suo)型(xing)的(de) Trizol )，配合(he) miRNA 專用(yong)的溶液(ye)體系，專(zhuan)用(yong)於從(cong)動物(wu)及人體血(xue)漿和(he)血(xue)清中(zhong)提(ti)取miRNA 和(he)其(qi)它(ta)各(ge)種小 RNA(15-30 nt )。

可以(yi)提出(chu)來(lai)包含 miRNA 的總(zong) RNA，用(yong)於 miRNA 的(de) RT、qPCR 檢(jian)測，以(yi)及全(quan)轉錄(lu)組測序(xu)等(deng)；根據(ju)需(xu)要，也(ye)可以(yi)壹次(ci)性把(ba) miRNA 和(he)總(zong) RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分(fen)別(bie)提出來(lai)。

近(jin)年(nian)來(lai)對 RNA 幹擾和(he)調(tiao)節(jie)性(xing)小 RNA 的(de)廣(guang)泛(fan)研(yan)究(jiu)迫(po)切(qie)需(xu)要壹種能有(you)效(xiao)提(ti)取(qu) 15-30 核(he)苷酸左(zuo)右大小 RNA（包括 siRNA 和(he) miRNA）的(de)試劑盒(he)。但是(shi)市場上(shang)常見(jian)的離(li)心(xin)柱(zhu)型的 RNA Kit/總(zong) RNA Kit 不(bu)能(neng)有(you)效(xiao)吸(xi)附(fu)回(hui)收(shou) miRNA，Trizol 抽提法也(ye)不(bu)能(neng)有(you)效(xiao)沈(chen)澱回收(shou) miRNA（生物(wu)通上(shang)有(you)專(zhuan)題(ti)文(wen)章(zhang)闡(chan)述），對於(yu)血(xue)清血(xue)漿樣(yang)本(ben)更(geng)是(shi)由(you)於(yu)其自身特點更難提(ti)取(qu)。

產品特點

1. Serum/Plasma miRNA Mini Kit 質(zhi)量(liang)優(you)異，可以(yi)完(wan)mei替代(dai) Qiagen 的(de)miRNeasy Serum/Plasma Kit。

2. 本(ben)品可在(zai)常溫下(xia)提(ti)取(qu) RNA，不需(xu)要 4℃離心(xin)機；亦可以(yi)兼容 4℃離心機。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)

1. 血(xue)液 RNA 的(de)常溫保存/運(yun)輸(shu)/提(ti)取的(de)簡(jian)易(yi)方案：

臨(lin)床(chuang)取(qu)樣(yang)：在(zai)臨床(chuang)上(shang)，使(shi)用(yong)抗凝(ning)管(guan)采血(xue)後，取(qu) 250 μl 新鮮血(xue)液，加(jia)入 750μl的(de)裂(lie)解(jie)液(ye) RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#R012-100)，用(yong)移(yi)液(ye)槍反(fan)復(fu)抽打並(bing)振蕩(dang)混(hun)勻(yun)，在(zai)室溫裂(lie)解(jie) 5~10 min，直(zhi)至(zhi)血(xue)細胞(bao)充分(fen)發生裂(lie)解(jie)。

保(bao)存：經裂(lie)解(jie)後(hou)的血(xue)液可在(zai)-20℃下(xia)保(bao)存 1-2 個(ge)月(yue)，在(zai)-70℃保存半(ban)年。

運(yun)輸(shu)：可冰(bing)袋 4℃運輸(shu) 1 天，幹冰(bing)-20℃運輸壹周。

提(ti)取(qu)：後(hou)續(xu) RNA 提(ti)取按 R213（或 R012）的(de)說(shuo)明書(shu)進(jin)行。

2. RNA 純(chun)度(du)及濃度(du)檢(jian)測：

血(xue)清/血(xue)漿的 RNA 含量特別低(di)，已經低(di)於分(fen)光光度(du)計(ji)測量(liang)的(de)下(xia)限(xian)，無(wu)法準確(que)測量(liang)，因(yin)此(ci)無法通過(guo)測量(liang) OD 值或者(zhe)比值的方(fang)法來(lai)判斷濃度(du)或(huo)者(zhe)純(chun)度(du)，只能通過(guo)下(xia)遊做(zuo) RT-qPCR 來(lai)判斷產量。同(tong)時(shi)無細(xi)胞的(de)血(xue)清/血(xue)漿中(zhong)的(de) RNA 主(zhu)要(yao)是小於(yu) 100 nt 的(de) miRNA，因(yin)此(ci)跑電(dian)泳檢(jian)測 RNA 完(wan)整(zheng)性(xing)並(bing)不(bu)適用(yong)於血(xue)清/血(xue)漿 RNA。

3. Wash Solution 2/3 可能加入乙(yi)醇(chun)使(shi)用(yong)幾(ji)天後(hou)，可能會(hui)出(chu)現沈(chen)澱晶體(ti)，並(bing)不(bu)影響使(shi)用(yong)，取其(qi)上清直(zhi)接(jie)使(shi)用(yong)就可以(yi)。

操(cao)作(zuo)步驟 （得(de)到(dao)包含 microRNA 的總(zong) RNA）

提(ti)示(shi)：

第(di)壹次(ci)使用(yong)前(qian)，請(qing)先(xian)在(zai) Wash Solution 1、Wash Solution 2/3 中(zhong)加(jia)入

無(wu)水乙(yi)醇(chun)，加(jia)入量詳見(jian)瓶上的(de)標(biao)簽。

1. 每(mei) 250 μl 液(ye)體樣(yang)品 (血(xue)清，血(xue)漿，腦(nao)脊(ji)液等(deng))，加入(ru) 750 μl 裂(lie)解(jie)液(ye) RLS，用(yong)移(yi)液(ye)器反復(fu)抽打幾(ji)次，然(ran)後(hou)劇(ju)烈震(zhen)蕩(dang) 15 sec，充分(fen)混(hun)勻(yun)。（液體(ti)樣(yang)品和(he)裂(lie)解(jie)液(ye) RLS 的終(zhong)體積比總(zong)是(shi) 1：3）

註(zhu)意(yi)：對(dui)於(yu)含有高汙(wu)染物(wu)樣(yang)品（如(ru)：高蛋白高血(xue)脂樣(yang)品），可以(yi)適當(dang)減(jian)少(shao)處理量(liang)，用(yong) RNase-free H₂O 補足250μl後開(kai)始提取。

（例如(ru)：200μl樣(yang)品+50μl RNase-free H₂O + 750μl 裂(lie)解(jie)液(ye) RLS。）

2. 將(jiang)勻(yun)漿樣(yang)品在(zai)室溫下(xia)放置(zhi) 5 min，使(shi)得(de)核(he)酸蛋白復(fu)合(he)物(wu)完(wan)quan分(fen)離(li)。

3. 加(jia)入(ru) 200μl 氯仿，劇(ju)烈振蕩(dang) 15 秒(miao)，並(bing)在(zai)室溫下(xia)放置(zhi) 2 min，

4. 13,000 rpm 離(li)心(xin) 10 min。樣(yang)品會(hui)分(fen)成三層：上層(ceng)無(wu)色(se)的(de)水相(xiang)、中(zhong)間層、下(xia)層(ceng)有(you)機相(xiang)。RNA 存在(zai)於水相(xiang)中(zhong)，水相(xiang)層的體(ti)積大(da)約為(wei)所加裂(lie)解(jie)液(ye) RLS體積的(de) 70%。

5. 轉移(yi)上(shang)清（約 450 μl）至壹(yi)個(ge)新的離心管(guan)中(zhong)，加(jia)入 1.5 倍(bei)體(ti)積（675 μl）的(de)無水乙(yi)醇(chun)，吹打(da)混(hun)勻(yun)。

6. 轉移(yi)上(shang)清混(hun)合(he)液（每(mei)次(ci)小於(yu) 750 μl，多則(ze)分(fen) 2 次(ci)）至 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)中(zhong)，12,000 rpm 離(li)心 1 min，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

7. 向(xiang) RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)內加(jia)入 700 μl Wash Solution 1（檢(jian)查(zha)是(shi)否(fou)已加入(ru)乙(yi)醇(chun)），12,000 rpm 離(li)心 1 min，倒棄濾(lv)液(ye)。

8. 向(xiang) RNA吸(xi)附(fu)柱(zhu)內加(jia)入 500 μl Wash Solution 2/3（檢(jian)查(zha)是(shi)否(fou)已加入(ru)乙(yi)醇(chun)），12,000 rpm 離(li)心 1 min，倒棄濾(lv)液(ye)。

9. 重(zhong)復(fu)步驟 8 壹次。

10. 將(jiang) RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)放回空(kong)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)，12,000 rpm 離(li)心 2 min，除(chu)去(qu)膜上(shang)殘留的乙(yi)醇(chun)。

11. 取(qu)出(chu) RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)，放入新的 RNase-Free 1.5 ml 離心管(guan)中(zhong)，向(xiang)吸(xi)附(fu)膜(mo)的(de)中(zhong)央(yang)部位(wei)懸(xuan)空(kong)滴(di)加 30~50 μl 的(de) RNase-Free ddH2O，室溫放置(zhi) 1 min，12,000 rpm 離(li)心 1 min，管(guan)底(di)即包含 microRNA 的總(zong) RNA。

12. 得(de)到(dao)的(de) miRNA，可直(zhi)接(jie)用(yong)於下(xia)遊實驗(yan)，或於(yu)-70℃保存，避(bi)免(mian) RNA 降(jiang)解。

相(xiang)關(guan)產品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加(jia)尾(wei)法）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加(jia)尾(wei)法）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 +71419-500）

血(xue)清/血(xue)漿microRNA提取(qu)試劑盒(he)