Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA /Protein Mini Kit（免(mian)lv仿）適(shi)用(yong)於(yu)從各種(zhong)動(dong)物組織、細(xi)胞(bao)中(zhong)同(tong)時提(ti)取(qu)出(chu) RNA/miRNA（包(bao)含(han) miRNA 的(de)總(zong) RNA）、基因(yin)組(zu) DNA 和 Protein，提(ti)取(qu)全(quan)程(cheng)不(bu)需(xu)要(yao)使用lv仿(fang)，得(de)到包(bao)含(han) miRNA 的(de)總(zong)RNA，不(bu)需(xu)要(yao) DNase I 消化
動(dong)物組織/細(xi)胞(bao)RNA/ DNA共(gong)提(ti)試(shi)劑盒 核酸提取(qu)

諾博萊德 動(dong)物組織/細(xi)胞(bao)RNA/ DNA共(gong)提(ti)試(shi)劑盒 核酸提取(qu)

Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA /Protein Mini Kit動(dong)物組織/細(xi)胞(bao) RNA/miRNA/DNA/ Protein 共(gong)提(ti)試(shi)劑盒（免(mian)lv仿）

目錄(lu)號(hao)：91417

產品內(nei)容(rong)

自(zi)備試(shi)劑

無水(shui)乙chun

保存條(tiao)件

室溫（15 ~ 25℃）

具體(ti)產品的(de)參(can)數(shu)以(yi)收到產品說明書的(de)參(can)數(shu)為(wei)準

產品簡介(jie)

Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA /Protein Mini Kit（免(mian)lv仿）適(shi)用(yong)於(yu)從各種(zhong)動(dong)物組織、細(xi)胞(bao)中(zhong)同(tong)時提(ti)取(qu)出(chu) RNA/miRNA（包(bao)含(han) miRNA 的(de)總(zong) RNA）、基因(yin)組(zu) DNA 和 Protein，提(ti)取(qu)全(quan)程(cheng)不(bu)需(xu)要(yao)使用lv仿(fang)，得(de)到包(bao)含(han) miRNA 的(de)總(zong)RNA，不(bu)需(xu)要(yao) DNase I 消化，可直接用(yong)於(yu) miRNA 和 mRNA 的(de) RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、測序等(deng)。基因(yin)組(zu) DNA 也(ye)可以(yi)直接用(yong)於(yu)下(xia)遊(you)的(de)Southern、mei切(qie)、PCR 等(deng)各(ge)種(zhong)試(shi)驗(yan)。

du特(te)的(de)裂(lie)解(jie)液(ye)迅(xun)速(su)裂(lie)解(jie)細(xi)胞(bao)和滅(mie)活細(xi)胞(bao) RNase/DNase，然(ran)後(hou)裂(lie)解(jie)混合物 RNA/miRNA/ DNA/Protein 同時通(tong)過(guo)壹(yi)個(ge) gDNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)，基因(yin)組(zu) DNA被(bei)吸(xi)附(fu)而 miRNA/RNA/Protein 穿透(tou)濾過(guo)。gDNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)上(shang)的(de)基因(yin)組(zu) DNA經(jing)過(guo)壹(yi)系(xi)列漂洗(xi)、洗脫後(hou)得(de)到純(chun)凈(jing)基因(yin)組(zu) DNA。濾過(guo)的(de) RNA/miRNA，先用(yong)乙chun調節(jie)結(jie)合條(tiao)件，然(ran)後(hou)轉(zhuan)入(ru) RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)，在高(gao)離序鹽狀(zhuang)態下選(xuan)擇(ze)性(xing)吸(xi)附於RNA 吸附柱(zhu)上(shang)，接著(zhe)通(tong)過(guo)壹(yi)系(xi)列快(kuai)速的(de)離(li)心(xin)-漂洗(xi)-離心-洗脫，得(de)到純(chun)凈(jing)的(de)RNA/miRNA（包(bao)含(han) miRNA 的(de)總(zong) RNA）。濾液(ye)經(jing)選(xuan)擇(ze)性(xing)沈(chen)澱(dian)得(de)到 Protein。

註(zhu)意(yi)事(shi)項

1. 采集 RNA 樣(yang)本(ben)時，把新(xin)鮮(xian)組織樣(yang)本(ben)浸(jin)入(ru) RNAsafe (RNA 樣(yang)品保存液(ye)， 91115-100) 中，可在 37℃保存壹(yi)天，在 25℃保存壹(yi)周，在 4℃保存壹(yi)個月，在-20℃或者–80℃長期保存。

2. 樣(yang)品應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融，否(fou)則(ze)會(hui)影(ying)響(xiang) RNA 的(de)提(ti)取(qu)得(de)率和質量(liang)。

3. 提取(qu)時，RNA 在裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus 中時不(bu)會(hui)被(bei) RNase 降(jiang)解，但(dan)後(hou)續處理過(guo)程(cheng)中(zhong)應(ying)使(shi)用不(bu)含(han) RNase 的(de)吸(xi)頭(tou)和器(qi)皿。

4. 樣(yang)品在加入(ru)裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus 並勻漿後(hou)，可在–80℃保存壹(yi)個月以(yi)上(shang)。

5. Wash Solution 2/3 可能加入(ru)乙chun使(shi)用(yong)幾天後(hou)，可能會出(chu)現沈(chen)澱(dian)晶(jing)體(ti)，並不(bu)影(ying)響(xiang)使用，取(qu)其上(shang)清(qing)直接使(shi)用(yong)就(jiu)可以(yi)。

重(zhong)要提(ti)示：

① 第(di)壹次使(shi)用(yong)前, 請先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、漂洗(xi)液(ye) WB 中加入(ru)zhi定(ding)量(liang)無(wu)水(shui)乙chun，詳見(jian)瓶(ping)上(shang)的(de)標(biao)簽(qian)。

② 所有離心(xin)步驟均需要(yao)在室溫（15~37℃）下進(jin)行(xing)，提(ti)取(qu)效果更(geng)佳！

操(cao)作步驟

1. 動(dong)物組織：

a．電(dian)動勻(yun)漿：取(qu)新(xin)鮮組(zu)織 10~20 mg 加入(ru) 500 μl 裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus，電(dian)動勻(yun)漿，直到無(wu)明顯組織塊(kuai)即(ji)可。

b．液(ye)氮研(yan)磨：液(ye)氮研(yan)磨組織成(cheng)細(xi)粉(fen)，取(qu) 10~20 mg 組(zu)織細(xi)粉(fen)加入(ru)500μl 裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus，劇烈渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩(dang)，直到無(wu)明顯粉末團即(ji)可。

c． 將裂(lie)解(jie)物 13,000 rpm 離心 3 min，沈(chen)澱(dian)不(bu)能(neng)裂(lie)解(jie)的(de)碎(sui)片(pian)。

d．下接操(cao)作步驟 3。

2. 細(xi)胞(bao)

a. 懸浮(fu)細(xi)胞(bao)：離(li)心(xin)收集細(xi)胞(bao)，加 500 μl 裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus（<8x106 細(xi)胞(bao)）, 吹(chui)打混勻(yun)，劇烈渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩(dang) 20 sec，充分(fen)裂(lie)解(jie)。

b. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)：不(bu)需(xu)要(yao)消化，吸(xi)棄培(pei)養基後(hou)，直接在培養(yang)皿中加裂(lie)解(jie)液(ye)MRL Plus（每(mei)<8x106細(xi)胞(bao)加 500 μl 裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus）進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua)、裂(lie)解(jie)；或者，先用(yong)胰(yi)mei消化後(hou)離心(xin)收集細(xi)胞(bao)，然(ran)後(hou)加入(ru)裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus，吹打混勻(yun)，劇烈渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩(dang) 20 sec，充分(fen)裂(lie)解(jie)。

c. 下(xia)接操(cao)作步驟 3。

3. 將裂(lie)解(jie)勻漿物（或離心得(de)到的(de)上(shang)清(qing)）全(quan)部加入(ru) gDNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)中(zhong)（吸附柱(zhu)放入(ru)收集管中(zhong)），13,000 rpm 離心(xin) 1 min，基因(yin)組(zu) DNA 被(bei)吸(xi)附(fu)在膜上(shang)，保留(liu)濾液(ye)（RNA/ miRNA/Protein 在濾液(ye)中）。

把 gDNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)放入(ru) 2.0 ml 離(li)心(xin)管，置(zhi)於 4℃度(du)，以(yi)備(bei)提(ti)取(qu) DNA 用(yong)。

以(yi)下(xia)是(shi) RNA/miRNA 的(de)提(ti)取(qu)步(bu)驟：（包(bao)含(han) miRNA 的(de)總(zong) RNA）

4. 向濾液(ye)中加入(ru) 1.25 倍體積(ji)的(de)無(wu)水(shui)乙chun，用(yong)移(yi)液(ye)器吹打混勻(yun)。

5. 每(mei)次轉(zhuan)移≤750 μl濾液(ye)混合物至RNA吸附柱(zhu)中(zhong)，13,000 rpm離心1min，此時，RNA 被(bei)吸(xi)附(fu)在膜上(shang)，保留(liu)濾液(ye)，以(yi)備(bei)提(ti)取(qu) Protein。

濾液(ye)中含有 Protein，請轉(zhuan)入(ru)壹(yi)個(ge)合適(shi)大(da)小（至少 2 倍濾液(ye)體積(ji)）的(de)離(li)心(xin)管，用(yong)於步(bu)驟(zhou) 18 開始(shi)的(de) Protein 提(ti)取(qu)。

6. 加入(ru) 700 μl Wash Solution 1（檢查(zha)是否(fou)已(yi)加入(ru)乙chun），室溫放置(zhi) 1 min, 13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，倒(dao)棄濾液(ye)。

7. 加入(ru) 500 μl Wash Solution 2/3（檢查(zha)是否(fou)已(yi)加入(ru)乙chun），13,000 rpm 離(li)心(xin) 30 sec，倒(dao)棄濾液(ye)。

8. 重(zhong)復(fu)步(bu)驟 7。

9. 將(jiang) RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)放回(hui)空收集管中(zhong)，13,000 rpm 離心(xin) 2 min，除(chu)去膜(mo)上(shang)殘(can)留(liu)的(de)乙chun。

10. 取(qu)出(chu) RNA 吸附柱(zhu)，放入(ru) RNase-free 1.5 ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，向 RNA 吸附膜的(de)中(zhong)央(yang)部(bu)位懸空(kong)滴加 30~50 μl 的(de) RNase-free H2O，室溫放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min，管底(di)即(ji)包(bao)含(han) miRNA 的(de)總(zong) RNA。

11. 得(de)到 RNA/miRNA，可直接用(yong)於(yu)下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)，或於(yu)-70℃保存，以(yi)免(mian)降(jiang)解。

以(yi)下(xia)步(bu)驟(zhou)為(wei)提取(qu) DNA 步(bu)驟：

12. 向步驟 3 的(de) gDNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)中(zhong)，加入(ru) 500μl 抑(yi)制(zhi)物去除(chu)液(ye) IR，12,000 rpm離心 30 sec，倒(dao)棄濾液(ye)。

13. 加入(ru)700 μl漂洗(xi)液(ye)WB（檢查(zha)是否(fou)已(yi)加入(ru)乙chun），12,000 rpm離(li)心(xin)30sec，倒(dao)棄濾液(ye)。

14. 加入(ru) 500 μl 漂洗(xi)液(ye) WB，12,000rpm 離心 30 sec，倒(dao)棄濾液(ye)。

15. 將 DNA 吸附(fu)柱(zhu)放回(hui)空收集管中(zhong)，13,000rpm 離心(xin) 2 min，盡(jin)量(liang)除(chu)去漂洗(xi)液(ye)，以(yi)免(mian)漂洗(xi)液(ye)中殘(can)留(liu)乙chun抑(yi)制(zhi)下遊反(fan)應(ying)。

16. 取(qu)出(chu) gDNA 吸附柱(zhu)，放入(ru)新(xin)的(de) 1.5 ml 的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，向吸附膜的(de)中(zhong)央(yang)懸(xuan)空(kong)滴加 100 μl 洗脫緩(huan)沖(chong)液(ye) EB（洗脫緩(huan)沖(chong)液(ye)事(shi)先在 65~70℃水(shui)浴中(zhong)預(yu)熱效果更(geng)好），室溫放置(zhi) 3~5 min，12,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min。將得(de)到的(de)溶(rong)液(ye)重(zhong)新加入(ru)離(li)心(xin)吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)，室溫放置(zhi) 2 min，12,000 rpm 離(li)心(xin) 1 min。

17. 得(de)到的(de)DNA可以(yi)存(cun)放在2~8℃，如(ru)果要長時間存放，可以(yi)放置(zhi)在- 20℃。

以(yi)下(xia)步(bu)驟(zhou)為(wei)提取(qu) Protein 步(bu)驟：

18. 向步驟 5 的(de)濾液(ye)中加入(ru)等(deng)體(ti)積(ji)的(de)緩(huan)沖(chong)液(ye) APP，渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，室溫放置(zhi)15 min 沈(chen)澱(dian) Protein。

19. 13,000 rpm 離心(xin) 5~10 min，小心棄上(shang)清(qing)。加入(ru) 0.5ml 70%乙chun，顛(dian)倒(dao)混(hun)勻(yun)後(hou)，離心(xin) 1 min，小心棄上(shang)清(qing)，留(liu)下蛋(dan)白(bai)沈(chen)澱(dian)，盡量(liang)將(jiang)殘(can)留(liu)液(ye)體用移液(ye)器吸幹凈(jing)。

20. 室溫晾(liang)幹沈(chen)澱(dian) 5~10 min，註(zhu)意(yi)壹(yi)定(ding)讓乙chun揮(hui)發幹(gan)凈(jing)，以(yi)免(mian)影(ying)響(xiang)下遊試驗(yan)。

21. 將蛋(dan)白(bai)沈(chen)澱(dian)溶解(jie)於 30~150 μl 1x 蛋(dan)白上(shang)樣(yang)緩(huan)沖(chong)液(ye)（如(ru)需要(yao)蛋白(bai)定(ding)量(liang)，緩(huan)沖(chong)液(ye)中不(bu)應(ying)該加入(ru)溴(xiu)fen蘭）或其它(ta)下(xia)遊試(shi)驗(yan)要求的(de)緩(huan)沖(chong)液(ye)中。

由(you)於裂(lie)解(jie)液(ye) MRL Plus 強變性(xing)作(zuo)用或者不(bu)同(tong)蛋(dan)白等(deng)電(dian)點(dian)，蛋(dan)白(bai)可能溶解比(bi)較困難(nan)，用移(yi)液(ye)器吹打幫助(zhu)溶解(jie)或(huo)者改(gai)變 PH 值幫助(zhu)蛋白(bai)溶(rong)解(jie)，短(duan)暫(zan)離心(xin)取(qu)上(shang)清(qing)使用。或(huo)者用(yong) 5% SDS 或者 8M 尿(niao)素幫(bang)助溶解蛋白沈(chen)澱(dian)後(hou)做蛋(dan)白定(ding)量(liang)。如(ru)果需要 BCA 蛋白(bai)定(ding)量(liang)可能需要把 8M 尿(niao)素稀(xi)釋(shi)到 3M。

22. 95℃放置(zhi) 5 min 溶(rong)解(jie)和變性(xing)蛋(dan)白，回(hui)復(fu)到室溫，最高(gao)速離心 1 min，取(qu)上(shang)清(qing)進(jin)行(xing) SDS-PAGE 電(dian)泳或(huo)者 western blot 等(deng)試(shi)驗(yan)。

與(yu) RNA 相關(guan)的(de)產品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於所有(you)qPCR儀(yi))

與(yu) miRNA 相關(guan)的(de)產品：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加尾(wei)法(fa)）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加尾(wei)法(fa)）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

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