Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit（免(mian)氯仿）適用於從(cong)各(ge)種(zhong)動物組(zu)織(zhi)、細(xi)胞(bao)中同(tong)時(shi)提(ti)取出總RNA、基(ji)因組(zu)DNA和(he)Protein，提取全程(cheng)不需(xu)要使用氯仿，得到(dao)包(bao)含總RNA，不需(xu)要DNaseI消化，可直(zhi)接用於RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯(xin)片(pian)、測(ce)序(xu)等(deng)。
動物組(zu)織(zhi)細(xi)胞(bao)RNA/DNA共提試劑(ji)盒(he) 核(he)酸(suan)提取(qu)

諾(nuo)博(bo)萊德 動物組(zu)織(zhi)細(xi)胞(bao)RNA/DNA共提試劑(ji)盒(he) 核(he)酸(suan)提取(qu)

Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit動物組(zu)織(zhi)/細(xi)胞(bao)RNA/DNA/Protein共提試劑(ji)盒(he)（免(mian)氯仿）

目錄(lu)號：91316

產品內容(rong)

自備(bei)試劑(ji)

無水(shui)乙(yi)醇

保(bao)存條(tiao)件(jian)

室(shi)溫(wen)（15~25℃）

具(ju)體(ti)產品的(de)參數(shu)以收到(dao)產品說明(ming)書(shu)的(de)參數(shu)為準

產品簡(jian)介(jie)

Tissue/CellRNA/DNA/ProteinMiniKit（免(mian)氯仿）適用於從(cong)各(ge)種(zhong)動物組(zu)織(zhi)、細(xi)胞(bao)中同(tong)時(shi)提(ti)取出總RNA、基(ji)因組(zu)DNA和(he)Protein，提取全程(cheng)不需(xu)要使用氯仿，得到(dao)包(bao)含總RNA，不需(xu)要DNaseI消化，可直(zhi)接用於RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯(xin)片(pian)、測(ce)序(xu)等(deng)。基(ji)因組(zu)DNA也(ye)可以直(zhi)接用於下(xia)遊(you)的(de)Southern、酶切、PCR等各(ge)種(zhong)試(shi)驗(yan)。

獨(du)te的裂(lie)解(jie)液(ye)迅速(su)裂(lie)解(jie)細(xi)胞和滅(mie)活細(xi)胞RNase/DNase，然(ran)後裂(lie)解(jie)混(hun)合物RNA/DNA/Protein同(tong)時(shi)通過壹(yi)個gDNA吸附柱，基(ji)因組(zu)DNA被吸附而RNA/Protein穿透濾過。gDNA吸附柱上(shang)的基(ji)因組(zu)DNA經過壹(yi)系(xi)列漂(piao)洗(xi)、洗(xi)脫(tuo)後得到(dao)純凈基因組(zu)DNA。濾(lv)過的總RNA，先(xian)用乙(yi)醇調(tiao)節結(jie)合(he)條(tiao)件(jian)，然後轉入(ru)RNA吸附柱，在(zai)高(gao)離(li)序(xu)鹽(yan)狀態下(xia)選(xuan)擇性(xing)吸附於RNA吸附柱上(shang)，接著通過壹(yi)系(xi)列快(kuai)速的(de)離(li)心(xin)-漂(piao)洗(xi)-離(li)心(xin)-洗(xi)脫(tuo)，得到(dao)純凈的總RNA。濾(lv)液經選(xuan)擇性(xing)沈(chen)澱(dian)得到(dao)Protein。

註(zhu)意事(shi)項

1.采(cai)集(ji)RNA樣本(ben)時(shi)，把新鮮組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)浸入(ru)RNAsafe(RNA樣(yang)品(pin)保(bao)存液，91115-100)中，可在37℃保(bao)存壹(yi)天(tian)，在(zai)25℃保(bao)存壹(yi)周(zhou)，在(zai)4℃保(bao)存壹(yi)個月(yue)，在-20℃或(huo)者(zhe)–80℃長(chang)期保(bao)存。

2.樣(yang)品應(ying)避免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融，否則會(hui)影(ying)響(xiang)RNA的(de)提(ti)取(qu)得率(lv)和質(zhi)量(liang)。

3.提取(qu)時(shi)，RNA在(zai)裂(lie)解(jie)液(ye)MRLPlus中時(shi)不會(hui)被RNase降解(jie)，但(dan)後續處理(li)過(guo)程(cheng)中應(ying)使用不含RNase的吸頭和(he)器皿。

4.樣品在(zai)加入(ru)裂(lie)解(jie)液(ye)MRLPlus並勻(yun)漿(jiang)後，可在–80℃保(bao)存壹(yi)個月(yue)以上(shang)。

5.所(suo)有(you)的溶液(ye)應(ying)該是(shi)澄清(qing)的(de)，如(ru)果(guo)環境溫(wen)度低(di)時(shi)溶(rong)液可能(neng)形成沈(chen)澱(dian)，此(ci)時(shi)不應(ying)該直(zhi)接使用，可在37℃水(shui)浴(yu)加熱幾分鐘(zhong)，即(ji)可恢(hui)復(fu)澄清(qing)。

重要提示(shi)：

①第壹(yi)次(ci)使(shi)用前,請(qing)先(xian)在(zai)漂(piao)洗(xi)液(ye)RW、70%乙(yi)醇、漂(piao)洗(xi)液(ye)WB瓶中加入(ru)

指ding量無(wu)水(shui)乙(yi)醇，詳(xiang)見瓶上的標簽(qian)。

②所(suo)有(you)離(li)心(xin)步(bu)驟(zhou)均需(xu)要在室(shi)溫(wen)（15~25℃）下(xia)進(jin)行，提(ti)取效果(guo)更(geng)佳(jia)！

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

1.動物組(zu)織(zhi)：

a．電(dian)動勻(yun)漿(jiang)：取(qu)新(xin)鮮組(zu)織(zhi)10~20mg加入(ru)500μl裂(lie)解(jie)液(ye)MRL Plus，電(dian)動勻(yun)漿(jiang)，直(zhi)到(dao)無明(ming)顯(xian)組(zu)織(zhi)塊(kuai)即可。

b．液(ye)氮研(yan)磨：液(ye)氮(dan)研(yan)磨組(zu)織(zhi)成(cheng)細(xi)粉，取(qu)10~20mg組(zu)織(zhi)細(xi)粉加入(ru)500μl裂(lie)解(jie)液(ye)MRL Plus，劇烈(lie)渦旋(xuan)振蕩，直(zhi)到(dao)無明(ming)顯(xian)粉末團(tuan)即可。

c．將(jiang)裂(lie)解(jie)物(wu)13,000rpm離(li)心(xin)3min，沈(chen)澱(dian)不能(neng)裂(lie)解(jie)的(de)碎片(pian)。

d．下(xia)接(jie)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)3。

2.細胞

a.懸浮(fu)細胞：離(li)心(xin)收集(ji)細胞(bao)，加入(ru)500μl裂(lie)解(jie)液(ye)MRL Plus（<8x10⁶細胞）,吹打(da)混(hun)勻(yun)，劇(ju)烈(lie)渦旋(xuan)振蕩20sec，充(chong)分裂(lie)解(jie)。

b.貼壁細胞：不需(xu)要消化，吸棄培養基(ji)後，直(zhi)接在培養皿/板(ban)中加裂(lie)解(jie)液(ye)MRLPlus（每(mei)<8x10⁶細胞(bao)加500μl裂(lie)解(jie)液(ye)MRLPlus）進行消(xiao)化、裂(lie)解(jie)；或(huo)者，先(xian)用yi酶消化後離(li)心(xin)收集(ji)細胞(bao)，然後加入(ru)裂(lie)解(jie)液(ye)MRL Plus，吹打混勻(yun)，劇(ju)烈(lie)渦旋(xuan)振蕩20sec，充(chong)分裂(lie)解(jie)。

c.下接操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)3。

3.將(jiang)裂(lie)解(jie)勻(yun)漿(jiang)物(wu)（或(huo)離(li)心(xin)得到(dao)的上(shang)清(qing)）全(quan)部(bu)加入(ru)gDNA吸附柱中（吸附柱放(fang)入(ru)收集(ji)管中），13,000rpm離(li)心(xin)1min，基因組(zu)DNA被吸附在膜上，保(bao)留(liu)濾液(ye)（RNA/Protein在濾液中）。

把gDNA吸附柱放(fang)入(ru)2.0ml離(li)心(xin)管，置(zhi)於4℃度，以備(bei)提取(qu)DNA用。

以下(xia)是(shi)總RNA的(de)提取步(bu)驟(zhou)：

4.向濾液中加入(ru)等(deng)體(ti)積(ji)的(de)70%乙(yi)醇，用移液器吹打(da)混勻(yun)。

5.每(mei)次(ci)轉移≤750μl濾液(ye)混(hun)合(he)物至(zhi)RNA吸附柱中，13,000rpm離(li)心(xin)1min，此(ci)時(shi)，RNA被吸附在膜上，保(bao)留(liu)濾液(ye)，以備(bei)提取(qu)Protein。

濾液中含有(you)Protein，請(qing)轉入(ru)壹(yi)個合(he)適大(da)小（至(zhi)少(shao)2倍濾液(ye)體(ti)積(ji)）的(de)離(li)心(xin)管，用於步(bu)驟(zhou)18開(kai)始的Protein提(ti)取。

6.加入(ru)700μl去(qu)蛋白(bai)液(ye)RW1，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)1min,13,000rpm離(li)心(xin)30sec，倒棄(qi)濾液。

7.加入(ru)500μl漂(piao)洗(xi)液(ye)RW（檢查是否已(yi)加入(ru)乙(yi)醇），13,000rpm離(li)心(xin)30sec，倒棄(qi)濾液。

8.重復(fu)步(bu)驟(zhou)7。

9.將(jiang)RNA吸附柱放(fang)回(hui)空(kong)收集(ji)管中，13,000rpm離(li)心(xin)2min，除(chu)去(qu)膜上殘(can)留(liu)的乙(yi)醇。

10.取(qu)出RNA吸附柱，放(fang)入(ru)RNase-free1.5ml離(li)心(xin)管中，向RNA吸附膜的中央部(bu)位(wei)懸空(kong)滴(di)加30~50μl的RNase-freeH2O，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)1min，13,000rpm離(li)心(xin)1min，管底(di)即總RNA。

11.得到(dao)RNA，可直(zhi)接用於下(xia)遊(you)實(shi)驗(yan)，或(huo)於(yu)-70℃保(bao)存，以免(mian)降解(jie)。

以下(xia)是(shi)DNA的提(ti)取步(bu)驟(zhou)：

12.向步(bu)驟(zhou)3的gDNA吸附柱中，加入(ru)500μl抑(yi)制(zhi)物去(qu)除(chu)液IR，12,000rpm離(li)心(xin)30sec，倒棄(qi)濾液。

13.加入(ru)700μl漂(piao)洗(xi)液(ye)WB（檢查是否已(yi)加入(ru)乙(yi)醇），12,000rpm離(li)心(xin)30sec，倒棄(qi)濾液。

14.加入(ru)500μl漂(piao)洗(xi)液(ye)WB，12,000rpm離(li)心(xin)30sec，倒棄(qi)濾液。

15.將(jiang)DNA吸附柱放(fang)回(hui)空(kong)收集(ji)管中，13,000rpm離(li)心(xin)2min，盡量除(chu)去(qu)漂(piao)洗(xi)液(ye)，以免(mian)漂(piao)洗(xi)液(ye)中殘留(liu)乙(yi)醇抑(yi)制下(xia)遊(you)反(fan)應(ying)。

16.取(qu)出(chu)gDNA吸附柱，放(fang)入(ru)新(xin)的(de)1.5ml的離(li)心(xin)管中，向吸附膜的中央懸空(kong)滴(di)加100μl洗(xi)脫(tuo)緩沖液(ye)EB（洗(xi)脫(tuo)緩沖液(ye)事(shi)先(xian)在(zai)65~70℃水(shui)浴(yu)中預(yu)熱(re)效果(guo)更(geng)好(hao)），室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)3~5min，12,000rpm離(li)心(xin)1min。將(jiang)得(de)到(dao)的溶(rong)液重(zhong)新加入(ru)離(li)心(xin)吸附柱中，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)2min，12,000rpm離(li)心(xin)1min。

17.得到(dao)的DNA可以存放在(zai)2~8℃，如(ru)果(guo)要長時(shi)間存放，可以放(fang)置(zhi)在-20℃。

以下(xia)是(shi)提取(qu)Protein的步(bu)驟(zhou)：

18.向步(bu)驟(zhou)5的濾(lv)液中加入(ru)等(deng)體(ti)積(ji)的(de)緩沖液(ye)APP，渦旋(xuan)振蕩混勻(yun)，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)15min沈(chen)澱(dian)Protein。

19.13,000rpm離(li)心(xin)5~10min，小心棄上清(qing)。加入(ru)0.5ml70%乙(yi)醇，顛倒(dao)混勻(yun)後，離(li)心(xin)1min，小心棄上清(qing)，留(liu)下蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)，盡量將(jiang)殘(can)留(liu)液體(ti)用移液器吸幹凈。

20.室(shi)溫(wen)晾(liang)幹沈(chen)澱(dian)5~10min，註(zhu)意壹(yi)定讓乙(yi)醇揮(hui)發(fa)幹凈，以免(mian)影(ying)響(xiang)下(xia)遊(you)試(shi)驗(yan)。

21.將(jiang)蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)溶解(jie)於(yu)30~150μl1x蛋白(bai)上(shang)樣緩沖液(ye)（如(ru)需(xu)要蛋白(bai)定量，緩沖液(ye)中不應(ying)該加入(ru)溴(xiu)酚蘭）或其它(ta)下遊(you)試(shi)驗(yan)要求的(de)緩沖液(ye)中。

由(you)於裂(lie)解(jie)液(ye)MRLPlus強變(bian)性作(zuo)用或者(zhe)不同(tong)蛋白(bai)等(deng)電(dian)點(dian)，蛋白(bai)可能(neng)溶解(jie)比(bi)較(jiao)困(kun)難(nan)，用移液器吹打(da)幫助(zhu)溶解(jie)或(huo)者改變(bian)PH值幫助(zhu)蛋白(bai)溶(rong)解(jie)，短(duan)暫(zan)離(li)心(xin)取上(shang)清(qing)使(shi)用。或者(zhe)用5%SDS或者(zhe)8M尿(niao)素幫助(zhu)溶解(jie)蛋白(bai)沈(chen)澱(dian)後做蛋白(bai)定量。如(ru)果(guo)需(xu)要BCA蛋白(bai)定量可能(neng)需(xu)要把8M尿(niao)素稀(xi)釋(shi)到(dao)3M。

22.95℃放置(zhi)5min溶解(jie)和(he)變(bian)性蛋白(bai)，回(hui)復(fu)到(dao)室(shi)溫(wen)，最(zui)高(gao)速(su)離(li)心(xin)1min，取上(shang)清(qing)進(jin)行SDS-PAGE電(dian)泳或(huo)者(zhe)westernblot等試驗(yan)。

與(yu)RNA相關的(de)產品：

71118-100 Script III 1^st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Univ ersal SYBR Green qPCR Mix(適用於所(suo)有(you)qPCR儀)

與(yu)miRNA相關的(de)產品：

71418-25 Script III miRNA 1^st StandSynthesis Kit（加尾法(fa)）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assaykit（for qPCR，加尾法(fa)）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25+71419-500）

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