Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA Mini Kit（免(mian)lv仿）適用(yong)於(yu)從各(ge)種動(dong)物(wu)組(zu)織、細胞中同(tong)時(shi)提取(qu)出(chu)RNA/miRNA（包含miRNA的總(zong)RNA）、基因(yin)組(zu)DNA，提取(qu)全程不(bu)需(xu)要使用(yong)lv仿，得(de)到包含miRNA的總(zong)RNA，不(bu)需要DNase I消(xiao)化(hua)，可(ke)直(zhi)接(jie)用於(yu)miRNA和mRNA的(de)RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯(xin)片(pian)、測序等(deng)。
動(dong)物(wu)組(zu)織/細胞共提試(shi)劑盒 核(he)酸提取(qu)

諾博萊德(de) 動(dong)物(wu)組(zu)織/細胞共提試(shi)劑盒  核(he)酸提取(qu)

Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA Mini Kit動(dong)物(wu)組(zu)織/細胞 RNA/ miRNA/DNA 共提試(shi)劑盒（免(mian)lv仿(fang)）

目錄號：91418

產品(pin)內容(rong)

自備試(shi)劑

無水(shui)乙chun

保存條件(jian)

室溫(wen)（15 ~ 25℃）

具體產品(pin)的(de)參數以(yi)收到產品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)的參數為(wei)準(zhun)

產品(pin)簡介(jie)

Tissue/Cell RNA/ miRNA /DNA Mini Kit（免lv仿(fang)）適用(yong)於(yu)從各(ge)種動(dong)物(wu)組(zu)織、細胞中同(tong)時(shi)提取(qu)出(chu)RNA/miRNA（包含miRNA的總(zong)RNA）、基因(yin)組(zu)DNA，提取(qu)全程不(bu)需(xu)要使用(yong)lv仿，得(de)到包含miRNA的總(zong)RNA，不(bu)需要DNase I消(xiao)化(hua)，可(ke)直(zhi)接(jie)用於(yu)miRNA和mRNA的(de)RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯(xin)片(pian)、測序等(deng)。基因(yin)組(zu) DNA 也可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)用於(yu)下遊(you)的 Southern、mei切(qie)、PCR等(deng)各(ge)種(zhong)試(shi)驗。

du特的(de)裂解(jie)液迅(xun)速裂解(jie)細胞和滅(mie)活(huo)細(xi)胞 RNase/DNase，然後裂解(jie)混合(he)物(wu) RNA/miRNA/ DNA 同(tong)時(shi)通(tong)過(guo)壹(yi)個 gDNA 吸(xi)附柱，基因(yin)組(zu) DNA 被(bei)吸(xi)附而(er) miRNA/RNA 穿(chuan)透濾過(guo)。gDNA 吸附柱上的(de)基因(yin)組(zu) DNA 經過壹系列(lie)漂(piao)洗、洗脫(tuo)後(hou)得(de)到(dao)純(chun)凈(jing)基因(yin)組(zu) DNA。濾過(guo)的 RNA/miRNA，先(xian)用乙chun調節結合(he)條(tiao)件(jian)，然(ran)後轉入(ru) RNA 吸附柱，在高(gao)離(li)序鹽狀態(tai)下選(xuan)擇(ze)性(xing)吸附於(yu) RNA 吸附柱上，接(jie)著(zhe)通過(guo)壹系列(lie)快速的離心(xin)-漂(piao)洗-離(li)心(xin)-洗脫(tuo)，得(de)到(dao)純(chun)凈(jing)的(de) RNA/miRNA（包含 miRNA 的總(zong) RNA）。

註意事項(xiang)

1. 采(cai)集(ji) RNA 樣本(ben)時(shi)，把新(xin)鮮(xian)組(zu)織樣本(ben)浸(jin)入 RNAsafe (RNA 樣品(pin)保存液，91115-100) 中(zhong)，可(ke)在 37℃保存壹天(tian)，在 25℃保存壹周(zhou)，在 4℃保存壹個月(yue)，在-20℃或者–80℃長(chang)期保存。

2. 樣品(pin)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)，否(fou)則(ze)會影響(xiang)RNA的提取(qu)得率和質(zhi)量(liang)。

3. 提取(qu)時，RNA在裂解(jie)液MRL Plus中(zhong)時(shi)不會被(bei)RNase降(jiang)解，但(dan)後續(xu)處理(li)過(guo)程中(zhong)應(ying)使用(yong)不含RNase的吸(xi)頭和器(qi)皿。

4. 樣品(pin)在加(jia)入裂解(jie)液 MRL Plus 並(bing)勻漿後，可(ke)在–80℃保存壹個月(yue)以(yi)上。

5. Wash Solution 2/3 可(ke)能(neng)加(jia)入乙(yi)chun使(shi)用(yong)幾天後(hou)，可(ke)能(neng)會(hui)出(chu)現沈(chen)澱(dian)晶體，並不(bu)影響(xiang)使(shi)用(yong)，取(qu)其上(shang)清(qing)直(zhi)接(jie)使用(yong)就(jiu)可(ke)以(yi)。

重(zhong)要提示：

① 第(di)壹次(ci)使用(yong)前(qian), 請先(xian)在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、漂(piao)洗液(ye) WB 中(zhong)加(jia)入zhi定(ding)量(liang)無水(shui)乙chun，詳(xiang)見瓶上的標簽。

② 所有離(li)心(xin)步(bu)驟(zhou)均需要在室(shi)溫(wen)（15~25℃）下進(jin)行(xing)，提取(qu)效果(guo)更佳(jia)！

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

1. 動(dong)物(wu)組(zu)織：

a．電動(dong)勻漿：取新(xin)鮮(xian)組(zu)織10~20mg加(jia)入500μl裂解(jie)液MRL Plus，電動(dong)勻漿，直(zhi)到(dao)無明(ming)顯(xian)組(zu)織塊(kuai)即可(ke)。

b．液氮(dan)研磨：液(ye)氮(dan)研磨組(zu)織成細粉，取(qu)10~20mg組(zu)織細粉加(jia)入500μl裂解(jie)液MRL Plus，劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋振(zhen)蕩(dang)，直(zhi)到(dao)無明(ming)顯(xian)粉末團(tuan)即可(ke)。

c． 將裂解(jie)物 13,000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，沈(chen)澱(dian)不(bu)能裂解(jie)的碎(sui)片(pian)。

d．下接(jie)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou) 3。

2. 細胞

a. 懸浮細胞：離心(xin)收(shou)集(ji)細(xi)胞，加(jia)500μl裂解(jie)液MRL Plus（<8x10⁶細(xi)胞）, 吹打(da)混(hun)勻，劇(ju)烈渦(wo)旋振(zhen)蕩(dang)20sec，充分裂解(jie)。

b. 貼壁細(xi)胞：不需要消(xiao)化(hua)，吸(xi)棄(qi)培養(yang)基後(hou)，直(zhi)接(jie)在培(pei)養(yang)皿中(zhong)加(jia)裂解(jie)液MRL Plus（每(mei)<8x106細(xi)胞加(jia)500μl裂解(jie)液MRL Plus）進(jin)行(xing)消(xiao)化(hua)、裂解(jie)；或者，先(xian)用(yong)胰mei消(xiao)化(hua)後(hou)離(li)心(xin)收(shou)集(ji)細(xi)胞，然後加(jia)入裂解(jie)液MRL Plus，吹打(da)混(hun)勻，劇(ju)烈渦(wo)旋振(zhen)蕩(dang)20sec，充分裂解(jie)。

c. 下接(jie)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou) 3。

3. 將裂解(jie)勻漿物（或離心(xin)得(de)到(dao)的(de)上清(qing)）全部(bu)加(jia)入gDNA吸(xi)附柱中（吸(xi)附柱放入(ru)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)），13,000 rpm 離心(xin) 1 min，基因(yin)組(zu) DNA 被(bei)吸(xi)附在膜(mo)上(shang)，保留(liu)濾液(ye)（RNA/ miRNA/Protein 在濾液(ye)中）。

把gDNA吸(xi)附柱放入(ru)2.0ml離(li)心(xin)管(guan)，置(zhi)於(yu)4℃度，以(yi)備提取(qu)DNA用。

以(yi)下是(shi) RNA/miRNA 的提取(qu)步(bu)驟(zhou)：（包含 miRNA 的總(zong) RNA）

4. 向(xiang)濾液(ye)中加(jia)入 1.25 倍(bei)體積(ji)的(de)無水(shui)乙chun，用(yong)移液(ye)器吹打(da)混(hun)勻。

5. 每次(ci)轉移(yi)≤750 μl濾液(ye)混合(he)物(wu)至(zhi)RNA吸(xi)附柱中，13,000 rpm離(li)心(xin)1min，此時，RNA 被(bei)吸(xi)附在膜(mo)上(shang)，保留(liu)濾液(ye)，以(yi)備提取(qu) Protein。

濾液(ye)中含有Protein，請轉(zhuan)入(ru)壹(yi)個合(he)適(shi)大(da)小（至(zhi)少2倍(bei)濾液(ye)體積(ji)）的(de)離心(xin)管(guan)，用(yong)於(yu)步(bu)驟(zhou) 18開(kai)始(shi)的 Protein 提取(qu)。

6. 加(jia)入700μl Wash Solution 1（檢(jian)查(zha)是(shi)否已加(jia)入乙(yi)chun），室(shi)溫(wen)放置(zhi)1 min, 13,000 rpm 離心(xin)30sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

7. 加(jia)入500μl Wash Solution 2/3（檢(jian)查(zha)是(shi)否已加(jia)入乙(yi)chun），13,000 rpm離(li)心(xin)30sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

8. 重(zhong)復(fu)步(bu)驟(zhou) 7。

9. 將RNA吸(xi)附柱放回(hui)空(kong)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)，13,000 rpm離心(xin)2min，除(chu)去(qu)膜(mo)上殘留(liu)的(de)乙chun。

10. 取出(chu)RNA吸附柱，放入(ru)RNase-free 1.5ml離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，向(xiang)RNA吸附膜的中(zhong)央(yang)部(bu)位懸空(kong)滴(di)加(jia)30~50μl的RNase-free H2O，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)1min， 13,000rpm離心(xin)1min，管(guan)底(di)即包含miRNA 的總(zong)RNA。

11. 得到(dao)RNA/miRNA，可(ke)直(zhi)接(jie)用於(yu)下遊(you)實(shi)驗，或於(yu)-70℃保存，以(yi)免降(jiang)解。

以(yi)下步(bu)驟(zhou)為提取(qu) DNA 步(bu)驟(zhou)：

12. 向(xiang)步(bu)驟(zhou)3的gDNA吸(xi)附柱中，加(jia)入500μl抑(yi)制物去(qu)除(chu)液IR，12,000 rpm離心(xin)30 sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

13. 加(jia)700μl漂(piao)洗液(ye)WB（檢(jian)查(zha)是(shi)否已加(jia)入乙(yi)chun），12,000 rpm離(li)心(xin)30sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

14. 加(jia)入500 μl漂(piao)洗液(ye) WB，12,000rpm離(li)心(xin)30 sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

15. 將DNA吸(xi)附柱放回(hui)空(kong)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)，13,000rpm 離心(xin)2 min，盡(jin)量(liang)除去(qu)漂(piao)洗液(ye)，以(yi)免漂(piao)洗液(ye)中(zhong)殘留(liu)乙(yi)chun抑(yi)制下遊(you)反(fan)應(ying)。

16. 取出(chu)gDNA 吸附柱，放入(ru)新(xin)的(de)1.5 ml的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，向(xiang)吸附膜的中(zhong)央(yang)懸空(kong)滴(di)加(jia) 100 μl 洗脫(tuo)緩(huan)沖液 EB（洗脫(tuo)緩(huan)沖液事(shi)先在 65~70℃水(shui)浴中(zhong)預(yu)熱(re)效果(guo)更好(hao)），室溫(wen)放置(zhi) 3~5 min，12,000 rpm離心(xin)1 min。將(jiang)得(de)到(dao)的溶液重(zhong)新(xin)加(jia)入離(li)心(xin)吸(xi)附柱中，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi) 2 min，12,000 rpm離心(xin)1min。

17. 得到(dao)的DNA可(ke)以(yi)存放在2~8℃，如(ru)果(guo)要長(chang)時間(jian)存放，可(ke)以(yi)放置(zhi)在- 20℃。

與 RNA 相關的產品(pin)：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用(yong)於(yu)所有qPCR儀(yi))

與 miRNA 相關的產品(pin)：

71418-25 Script III miRNA 1st Stand Synthesis Kit（加(jia)尾(wei)法(fa)）

71419-500 Script III miRNA Real-Time PCR Assay kit（for qPCR，加(jia)尾(wei)法(fa)）

71613-500 Script III miRNA RT-qPCR Detection kit（71418-25 + 71419-500）

動(dong)物(wu)組(zu)織/細胞共提試(shi)劑盒  核(he)酸提取(qu)