Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit（免(mian)lv仿(fang)）適用於從各(ge)種動(dong)物(wu)組(zu)織、細胞(bao)中(zhong)同時(shi)提取出總(zong) RNA 和(he)基(ji)因(yin)組(zu) DNA，提取(qu)全程不(bu)需(xu)要使用lv仿(fang)，得(de)到包(bao)含總(zong) RNA，不(bu)需(xu)要DNase I消化，可直(zhi)接用於 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片(pian)、測序等。
動(dong)物(wu)組(zu)織細胞(bao)RNA/DNA共(gong)提(ti)試(shi)劑盒(he)

諾(nuo)博萊(lai)德(de) 動(dong)物(wu)組(zu)織細胞(bao)RNA/DNA共(gong)提(ti)試(shi)劑盒(he) 

Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit動(dong)物(wu)組(zu)織/細胞(bao) RNA/ DNA 共(gong)提(ti)試(shi)劑盒(he)（免(mian)lv仿(fang)）

目錄號：91219

產(chan)品內容

自備(bei)試(shi)劑

無水乙(yi)chun

保存(cun)條(tiao)件(jian)

室(shi)溫(wen)（15 ~ 25℃）

具體產(chan)品的參數以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品說明書(shu)的(de)參數為(wei)準(zhun)

產(chan)品簡(jian)介(jie)

Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit（免lv仿(fang)）適用於從各(ge)種動(dong)物(wu)組(zu)織、細胞(bao)中(zhong)同時(shi)提取出總(zong) RNA 和(he)基(ji)因(yin)組(zu) DNA，提取(qu)全程不(bu)需(xu)要使用lv仿(fang)，得(de)到包(bao)含總(zong) RNA，不(bu)需(xu)要DNase I消化，可直(zhi)接用於 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片(pian)、測序等。基(ji)因(yin)組(zu) DNA 也(ye)可以直(zhi)接用於下(xia)遊(you)的(de) Southern、mei切、PCR 等(deng)各種試驗(yan)。

du特的裂(lie)解液迅(xun)速(su)裂(lie)解細胞(bao)和(he)滅活(huo)細胞(bao) RNase/DNase，然(ran)後(hou)裂解混合物RNA/DNA同時(shi)通(tong)過(guo)壹(yi)個(ge)gDNA吸(xi)附柱(zhu)，基(ji)因(yin)組(zu)DNA被吸(xi)附而(er)RNA穿(chuan)透濾(lv)過(guo)。gDNA 吸(xi)附柱(zhu)上的基(ji)因(yin)組(zu)DNA經(jing)過(guo)壹(yi)系列漂洗、洗脫(tuo)後(hou)得(de)到純(chun)凈(jing)基(ji)因(yin)組(zu)DNA。濾過(guo)的(de)總(zong)RNA，先(xian)用乙chun調節(jie)結(jie)合條件(jian)，然(ran)後(hou)轉入RNA吸(xi)附柱(zhu)，在高(gao)離(li)序鹽狀態(tai)下(xia)選擇性(xing)吸(xi)附於(yu)RNA吸(xi)附柱(zhu)上，接著通(tong)過(guo)壹(yi)系列快(kuai)速的(de)離心-漂洗-離(li)心-洗脫(tuo)，得(de)到純(chun)凈(jing)的(de)總(zong)RNA。

註意事項(xiang)

1. 采集 RNA 樣(yang)本(ben)時(shi)，把新(xin)鮮組(zu)織樣(yang)本(ben)浸(jin)入 RNAsafe (RNA 樣(yang)品保存(cun)液(ye)，91115-100) 中(zhong)，可在37℃保存(cun)壹(yi)天，在(zai)25℃保存(cun)壹(yi)周，在(zai) 4℃保存(cun)壹(yi)個(ge)月(yue)，在(zai)-20℃或(huo)者–80℃長(chang)期保存(cun)。

2. 樣(yang)品應避免反復(fu)凍(dong)融(rong)，否則會(hui)影響 RNA 的提取得(de)率和(he)質量(liang)。

3. 提取時(shi)，RNA 在裂解液 MRL Plus 中(zhong)時(shi)不(bu)會(hui)被 RNase 降(jiang)解，但後(hou)續(xu)處理(li)過(guo)程中(zhong)應使(shi)用不(bu)含(han)RNase的吸(xi)頭(tou)和(he)器皿。

4. 樣(yang)品在加(jia)入裂解液 MRL Plus 並(bing)勻漿後(hou)，可在–80℃保存(cun)壹(yi)個(ge)月(yue)以(yi)上(shang)。

5. 所有的溶液應該是澄(cheng)清的，如果環(huan)境溫(wen)度低時(shi)溶液可能形成沈澱，此(ci)時(shi)不(bu)應(ying)該直(zhi)接使(shi)用，可在 37℃水浴(yu)加(jia)熱(re)幾(ji)分(fen)鐘(zhong)，即可恢(hui)復澄(cheng)清。

重(zhong)要提示(shi)：

① 第壹(yi)次使用前(qian), 請先(xian)在漂洗液(ye) RW 、70%乙chun、漂洗液(ye) WB 瓶(ping)中(zhong)加(jia)入

zhi定量(liang)無水(shui)乙chun，詳見(jian)瓶(ping)上(shang)的標簽(qian)。

② 所有離心(xin)步(bu)驟均需要在室(shi)溫(wen)（15~25℃）下進行，提(ti)取效(xiao)果(guo)更(geng)佳(jia)！

操作步(bu)驟

1. 動(dong)物(wu)組(zu)織：

a．電動(dong)勻(yun)漿：取(qu)新(xin)鮮組(zu)織10~20 mg加(jia)入 500μl裂解液MRL Plus，電動(dong)勻(yun)漿，直(zhi)到無(wu)明顯(xian)組(zu)織塊即(ji)可。

b．液氮研(yan)磨(mo)：液(ye)氮研(yan)磨(mo)組(zu)織成細粉(fen)，取(qu)10~20 mg組(zu)織細粉(fen)加(jia)入500μl 裂解液 MRL Plus，劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩，直(zhi)到無(wu)明顯(xian)粉末(mo)團即(ji)可。

c． 將裂解物 13,000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，沈澱不(bu)能(neng)裂解的碎(sui)片(pian)。

d．下接操(cao)作(zuo)步(bu)驟 3。

2. 細胞(bao)

a. 懸浮細(xi)胞(bao)：離(li)心(xin)收(shou)集(ji)細胞(bao)，加(jia)入500μl裂解液 MRL Plus（<8x10⁶細(xi)胞(bao)）, 吹打混勻(yun)，劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩20sec，充(chong)分(fen)裂(lie)解。

b. 貼壁細(xi)胞(bao)：不(bu)需(xu)要消化，吸(xi)棄(qi)培養(yang)基(ji)後(hou)，直(zhi)接在(zai)培養(yang)皿/板中(zhong)加(jia)裂(lie)解液MRL Plus（每(mei)<8x10⁶細胞(bao)加(jia)500μl裂(lie)解液MRL Plus）進行消化、裂(lie)解；或(huo)者，先(xian)用胰mei消化後(hou)離心(xin)收(shou)集(ji)細胞(bao)，然(ran)後(hou)加(jia)入裂解液MRL Plus，吹打混勻(yun)，劇(ju)烈(lie)渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩20sec，充(chong)分(fen)裂(lie)解。

c. 下接操(cao)作(zuo)步(bu)驟 3。

3. 將裂解勻漿物(wu)（或(huo)離心(xin)得(de)到的(de)上清(qing)）全(quan)部加(jia)入gDNA吸(xi)附柱(zhu)中(zhong)（吸(xi)附柱(zhu)放入收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)），13,000 rpm離心(xin)1min，基(ji)因(yin)組(zu)DNA被吸(xi)附在(zai)膜上，保(bao)留濾液(ye)（RNA 在(zai)濾(lv)液中(zhong)）。把 gDNA 吸(xi)附柱(zhu)放入2.0 ml離心管(guan)，置(zhi)於(yu)4℃度(du)，以(yi)備(bei)提(ti)取(qu)DNA用。

以下是總RNA的提(ti)取步(bu)驟：

4. 向(xiang)濾液(ye)中(zhong)加(jia)入等體積(ji)的(de)70%乙chun，用移液(ye)器吹打混勻(yun)。

5. 每(mei)次轉移(yi)≤750μl濾(lv)液(ye)混合物至RNA吸(xi)附柱(zhu)中(zhong)，13,000 rpm離心(xin)1min，此(ci)時(shi)，RNA 被吸(xi)附在(zai)膜上，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

6. 加(jia)入700μl去蛋白(bai)液RW1，室(shi)溫(wen)放置1min,13,000rpm離(li)心(xin)30sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

7. 加(jia)入500μl漂洗液(ye)RW（檢(jian)查是否已(yi)加(jia)入乙chun），13,000 rpm離30sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

8. 重(zhong)復(fu)步(bu)驟 7。

9. 將 RNA 吸(xi)附柱(zhu)放回空(kong)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)，13,000 rpm 離心(xin)2min，除(chu)去膜上殘(can)留的乙(yi)chun。

10. 取出RNA吸(xi)附柱(zhu)，放入RNase-free 1.5 ml離心管(guan)中(zhong)，向(xiang)RNA吸(xi)附膜(mo)的中(zhong)央(yang)部位懸空滴加(jia)30~50μl 的(de)RNase-free H2O，室(shi)溫(wen)放置 1 min，13,000 rpm 離(li)心(xin)1min，管(guan)底即(ji)總(zong) RNA。

11. 得(de)到RNA，可直(zhi)接用於下(xia)遊(you)實驗(yan)，或(huo)於-70℃保(bao)存(cun)，以(yi)免(mian)降(jiang)解。

以下是 DNA 的提取(qu)步(bu)驟：

12. 向(xiang)步(bu)驟3的gDNA吸(xi)附柱(zhu)中(zhong)，加(jia)入500μl抑(yi)制物(wu)去除(chu)液IR，12,000 rpm離心30sec，倒棄(qi)濾液(ye)。

13. 加(jia)入700μl漂洗液(ye)WB（檢(jian)查是否已(yi)加(jia)入乙chun），12,000 rpm離心(xin)30sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

14. 加(jia)入500μl漂洗液(ye)WB，12,000rpm 離心30sec，倒(dao)棄(qi)濾液(ye)。

15. 將 DNA 吸(xi)附柱(zhu)放回空(kong)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)，13,000rpm 離心(xin)2 min，甩(shuai)幹(gan)吸(xi)附膜(mo)上殘(can)留的乙(yi)chun。

16. 取出 gDNA 吸(xi)附柱(zhu)，放入新(xin)的 1.5 ml 的(de)離心管(guan)中(zhong)，向(xiang)吸(xi)附膜(mo)的中(zhong)央(yang)懸(xuan)空(kong)滴加(jia)100μl 洗脫(tuo)緩(huan)沖液(ye)EB（洗脫(tuo)緩(huan)沖液(ye)事先(xian)在65~70℃水(shui)浴(yu)中(zhong)預熱(re)效(xiao)果(guo)更(geng)好），室(shi)溫(wen)放置 3~5 min，12,000rpm離(li)心(xin)1 min。將(jiang)得(de)到的(de)溶液重(zhong)新(xin)加(jia)入離心吸(xi)附柱(zhu)中(zhong)，室(shi)溫(wen)放置2min，12,000 rpm離(li)心(xin)1 min。

17. 得(de)到的(de)DNA可以存(cun)放(fang)在(zai)2~8℃，如果要長時(shi)間存(cun)放(fang)，可以放置在(zai)- 20℃。

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