適(shi)用(yong)於從動物(wu)組(zu)織(zhi)、培養細(xi)胞中快速(su)提(ti)取高質(zhi)量的基(ji)因(yin)組(zu)DNA。
本(ben)試劑盒(he)采用(yong)獨(du)te的裂解(jie)液(ye)，利(li)用矽膠(jiao)膜(mo)特異(yi)吸(xi)附DNA，無(wu)需(xu)酚氯(lv)仿等 有(you)毒試劑，也無需(xu)進(jin)行耗(hao)時的醇(chun)類(lei)沈澱，最大(da)限度(du)的去(qu)除(chu)蛋(dan)白(bai)及其他抑制(zhi)性 雜(za)質(zhi)，得(de)到基(ji)因(yin)組(zu)DNA，無(wu)蛋(dan)白(bai)、核酸(suan)酶汙染，可直接進(jin)行PCR、酶切和(he)雜(za) 交(jiao)等相關分子生(sheng)物(wu)學實(shi)驗(yan)。
組(zu)織(zhi)/細胞基(ji)因(yin)組(zu)DNA快速(su)提(ti)取試劑盒(he)

諾(nuo)博萊德(de) 組(zu)織(zhi)/細胞基(ji)因(yin)組(zu)DNA快速(su)提(ti)取試劑盒(he)

FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)/細胞基(ji)因(yin)組(zu)DNA提(ti)qu試劑盒(he)（離(li)心(xin)柱(zhu)型）

目(mu)錄(lu)號:40017

產(chan)品內容：

自(zi)備試劑:

  無(wu)水(shui)乙(yi)醇(chun)，RNaseA（可(ke)選(xuan)）

保(bao)存條(tiao)件(jian):

  室(shi)溫（15~25℃）

  蛋(dan)白(bai)酶K，室(shi)溫可(ke)保存6個(ge)月(yue)，4℃保存12個(ge)月(yue)，- 20℃保存2年(nian)。

具(ju)體產(chan)品的參(can)數以(yi)收(shou)到產(chan)品說明書(shu)的參(can)數為準

產(chan)品簡(jian)介(jie):

  適(shi)用(yong)於從(cong)動物組(zu)織(zhi)、培養細(xi)胞中快速(su)提(ti)取高質(zhi)量的基(ji)因(yin)組(zu)DNA。

  本(ben)試劑盒(he)采用(yong)獨(du)te的裂解(jie)液(ye)，利(li)用矽膠(jiao)膜(mo)特異(yi)吸(xi)附DNA，無(wu)需(xu)酚氯(lv)仿等 有(you)毒試劑，也無需(xu)進(jin)行耗(hao)時的醇(chun)類(lei)沈澱，最大(da)限度(du)的去(qu)除(chu)蛋(dan)白(bai)及其他抑制(zhi)性 雜(za)質(zhi)，得(de)到基(ji)因(yin)組(zu)DNA，無(wu)蛋(dan)白(bai)、核酸(suan)酶汙染，可直接進(jin)行PCR、酶切和(he)雜(za) 交(jiao)等相關分子生(sheng)物(wu)學實(shi)驗(yan)。

產(chan)品特點:

1.    簡(jian)便快速(su)：30 min內(nei)可獲得(de)高純(chun)度(du)的基(ji)因(yin)組(zu)DNA。

2.   安(an)全無毒：無需(xu)ben酚/氯(lv)仿抽提(ti)。

3.   高(gao)純(chun)：OD260/280=1.7～1.9，長度(du)可(ke)達(da) 30～50 kb，可直接(jie)進(jin)行PCR、酶切和(he)雜(za)交(jiao)等分(fen)子生(sheng)物(wu)學實(shi)驗(yan)。

註(zhu)意事項:

1.    如(ru)果(guo)裂解(jie)液(ye)TL、結合液(ye)CB、抑制(zhi)物去(qu)除(chu)液(ye)IR有(you)沈(chen)澱析(xi)出，可在37℃水(shui)浴 溶解(jie)，搖(yao)勻(yun)後(hou)使(shi)用。

2.   開(kai)始(shi)實(shi)驗(yan)前(qian)將需(xu)要的水浴先預熱到(dao)70℃備用。

3.   洗(xi)脫液(ye)EB不(bu)含有(you)螯(ao)合劑(ji)EDTA，不(bu)影(ying)響下(xia)遊(you)酶切、連(lian)接等反(fan)應(ying)。也可以(yi)使(shi) 用水洗脫，但應(ying)該確保批(pi)pH大(da)於7.5，pH過(guo)低影(ying)響洗(xi)脫效率(lv)。用水(shui)洗脫DNA應(ying)該保(bao)存在－20℃。DNA如(ru)果(guo)需(xu)要長期保存，可(ke)以(yi)用(yong)TE緩沖液(ye)洗(xi)脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是(shi)EDTA可(ke)能(neng)影(ying)響下(xia)遊(you) 酶切反(fan)應(ying)，使用(yong)時可(ke)以(yi)適(shi)當稀釋。

操作步(bu)驟:

第(di)壹次(ci)使用(yong)前(qian)，請先在漂洗(xi)液(ye)WB中加(jia)入指ding量(liang)無水(shui)乙(yi)醇(chun)，詳見(jian)瓶(ping)身(shen)的標(biao)簽。

提(ti)示：所有(you)離(li)心(xin)步(bu)驟必須在室(shi)溫（15~25℃）下(xia)進(jin)行。

1.    柱(zhu)平(ping)衡：向(xiang)吸(xi)附柱(zhu)的膜(mo)中央（吸(xi)附柱(zhu)放入收(shou)集(ji)管中）加(jia)入 100μl 平(ping)衡液(ye)，12,000rpm 離(li)心1 min，棄濾(lv)液(ye)，將(jiang)吸(xi)附柱(zhu)重(zhong)新(xin)放回收(shou)集(ji)管中。（請使(shi)用(yong)當(dang)天處理過的柱(zhu)子）

2.材(cai)料(liao)處理：

a. 動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)

將(jiang)動(dong)物組(zu)織(zhi)在液(ye)氮(dan)中研磨(mo)成細粉(fen)（或者用解(jie)剖(pou)dao切成(cheng)小(xiao)碎塊），取(qu)約25mg轉(zhuan)入1.5 ml離心(xin)管中，加(jia)入180μl裂解(jie)液(ye)TL，再(zai)加(jia)入20μl蛋(dan)白(bai)酶K溶液(ye)，振(zhen)蕩至(zhi)徹di懸(xuan)浮(fu)，56℃水浴1~3小(xiao)時，直(zhi)至(zhi)組(zu)織(zhi)完quan消(xiao)化(hua)溶(rong)解。

推(tui)薦(jian)樣本(ben)投入量：動(dong)物(wu)組(zu)織(zhi)≤25 mg，動物(wu)脾臟(zang)≤10 mg。

鼠尾樣本(ben)投入量：大(da)鼠尾巴最(zui)大(da)用量(liang)為0.6 cm長片(pian)段(duan)，小(xiao)鼠鼠尾巴最(zui)大(da)用量(liang)為1.2cm長片(pian)段(duan)，並(bing)將裂解(jie)時(shi)間延(yan)長至(zhi)6-8小(xiao)時。

註(zhu)意：水(shui)浴過程(cheng)中，每10分(fen)鐘(zhong)顛(dian)倒(dao)混(hun)勻(yun)壹次(ci)，可促(cu)進(jin)細(xi)胞裂解(jie)。

b.    培養細(xi)胞

① 105~106懸(xuan)浮(fu)細胞到壹個1.5 ml離(li)心管；對(dui)於(yu)貼(tie)壁(bi)細胞，應(ying)該先用胰蛋(dan)bai酶消化(hua)後(hou)吹(chui)打(da)下(xia)來收(shou)集(ji)。

② 13,000rpm離(li)心(xin)10 sec，吸(xi)棄上清(qing)，留(liu)下(xia)細(xi)胞團和大(da)約10~20μl殘(can)留(liu)的液(ye)體。

③ 加(jia)入200 μl 1× PBS，振(zhen)蕩至(zhi)細(xi)胞充分懸(xuan)浮(fu)，洗滌(di)細胞去(qu)除(chu)雜(za)質(zhi)，13, 000 rpm離心(xin)10sec，完quan吸(xi)棄上清(qing)。

④再(zai)次(ci)加(jia)入180μl1×PBS，振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，使(shi)細(xi)胞徹di懸(xuan)浮(fu)。

⑤ 加(jia)入20μl蛋(dan)白(bai)酶K溶液(ye)，充分混(hun)勻(yun)。

3.（可(ke)選(xuan)步驟(zhou)）加(jia)入5μl RNase A (100mg/ml)溶液(ye)，振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，室(shi)溫 放置5 ~ 10min。

4.加(jia)入200μl結合液(ye)CB，充分振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，70℃水(shui)浴或金(jin)屬浴處理10 min。

5.冷卻(que)後(hou)加(jia)100μl無水(shui)乙(yi)醇(chun)(或(huo)異(yi)丙(bing)醇(chun))，充分振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，此(ci)時(shi)可能(neng)會(hui)出現絮(xu)狀(zhuang)沈澱，短(duan)暫離心以(yi)去(qu)除(chu)管(guan)蓋內壁(bi)水珠(zhu)。

6.    將(jiang)所得(de)溶液(ye)和(he)絮狀(zhuang)沈澱加(jia)入壹個DNA吸(xi)附柱(zhu)中，（吸(xi)附柱(zhu)放入收(shou)集(ji)管中）13,000rpm離心(xin)1 min，DNA被吸(xi)附在膜(mo)上，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

7. 加(jia)入500μl抑制(zhi)物去(qu)除(chu)IR，13,000rpm離(li)心30sec，倒棄濾(lv)液(ye)。

8.    加(jia)入600μl漂洗(xi)液(ye)WB（請(qing)檢(jian)查是(shi)否已加(jia)入無水(shui)乙(yi)醇(chun)），13,000rpm離(li)心30 sec，倒(dao)棄濾(lv)液(ye)。

9.重(zhong)復步(bu)驟(zhou)9壹遍。

10.將(jiang)DNA吸(xi)附柱(zhu)放回空收(shou)集(ji)管中，13,000rpm離心(xin)2min，盡(jin)量(liang)除去(qu)漂洗(xi)液(ye)，以(yi)免(mian)漂洗(xi)液(ye)中殘留(liu)乙(yi)醇(chun)抑制(zhi)下遊(you)反(fan)應(ying)。

11.取(qu)出DNA吸(xi)附柱(zhu)，放入壹個幹(gan)凈(jing)的1.5 ml離心(xin)管(guan)中，向吸(xi)附膜(mo)的中央加(jia)入100μl洗脫緩沖液(ye)EB（洗(xi)脫緩沖液(ye)事先在80~100℃水(shui)浴中預 熱可(ke)以(yi)提(ti)高產量）， 室(shi)溫放置3~5min，13,000rpm離心1min。

12.DNA可(ke)以(yi)存放在2~8℃，如(ru)果(guo)要長時間存放，可以(yi)放置在-20℃。

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