諾博萊(lai)德 CTAB植(zhi)物基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速(su)提(ti)取試劑盒

CTAB植(zhi)物基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速(su)提(ti)取試劑盒-現貨(huo)

目(mu)錄(lu)號(hao)：40114

適(shi)用範圍(wei)：

適(shi)用於(yu)快速(su)提(ti)取植(zhi)物基因(yin)組(zu)DNA

試劑盒組成(cheng)、儲存(cun)、穩(wen)定(ding)性：

本(ben)試劑盒在(zai)室(shi)溫儲(chu)存(cun) 12 個(ge)月(yue)不影響(xiang)使(shi)用效果(guo)。

儲(chu)存(cun)事項(xiang):

1. 裂(lie)解(jie)液(ye) PL、結(jie)合液(ye) PQ 或(huo)者(zhe)抑(yi)制(zhi)物去(qu)除液(ye) IR 低溫(wen)時可(ke)能(neng)出現析(xi)出和(he)沈澱(dian)，可(ke)以在(zai) 55℃水浴(yu)幾分鐘幫助重(zhong)新溶(rong)解(jie)，恢(hui)復(fu)澄(cheng)清(qing)透(tou)明(ming)後冷(leng)卻到(dao)室(shi)溫即(ji)可使用。

2.避免試劑長(chang)時間暴露(lu)於(yu)空氣中產(chan)生(sheng)揮(hui)發(fa)、氧化(hua)、pH 值(zhi)變(bian)化(hua)，各溶(rong)液使用後應(ying)及時蓋(gai)緊蓋子。

具(ju)體產(chan)品(pin)的參(can)數(shu)以(yi)收到(dao)產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)的(de)參數(shu)為(wei)準(zhun)

產(chan)品(pin)介(jie)紹(shao)：

改(gai)進(jin)的經(jing)典 CTAB 植(zhi)物 DNA 抽提(ti)液內（添(tian)加(jia)多(duo)種(zhong)針對(dui)植(zhi)物特點的(de)多(duo)糖(tang)、多(duo)酚(fen)去(qu)除成(cheng)份(fen)）迅(xun)速(su)裂(lie)解(jie)細(xi)胞和(he)滅(mie)活(huo)細(xi)胞內核酸(suan)酶(mei)，氯仿抽提(ti)後通(tong)過(guo)離心(xin)清(qing)除多(duo)糖(tang)、多(duo)酚(fen)和(he)蛋(dan)白質（根(gen)據(ju)需(xu)要，上清(qing)中還(hai)加(jia)入異丙(bing)醇離心(xin)沈澱(dian)基因(yin)組(zu) DNA，進(jin)壹(yi)步(bu)去(qu)除其(qi)它各種(zhong)雜質(zhi)），然(ran)後基因(yin)組(zu) DNA 在(zai)高離序鹽狀態下選擇(ze)性吸(xi)附(fu)於(yu)離心(xin)柱內矽基質(zhi)膜(mo)，再通(tong)過(guo)壹系列快(kuai)速(su)的(de)漂(piao)洗－離(li)心(xin)的步(bu)驟， 進壹(yi)步(bu)將多(duo)糖(tang)、多(duo)酚(fen)和(he)細(xi)胞代(dai)謝(xie)物、蛋(dan)白等雜(za)質(zhi)去(qu)除，最後低(di)鹽的洗(xi)脫緩(huan)沖(chong)液將(jiang)純(chun)凈(jing)基因(yin)組(zu) DNA 從矽基質(zhi)膜(mo)上洗(xi)脫。

產(chan)品(pin)特點：

1.離(li)心(xin)吸附(fu)柱(zhu)內矽基質(zhi)膜(mo)全(quan)部(bu)采(cai)用進口特制(zhi)吸附(fu)膜(mo)，柱與(yu)柱(zhu)之(zhi)間吸附(fu)量(liang)差(cha)異極(ji)小(xiao)，可重復(fu)性好(hao)。克服了國產(chan)試劑盒膜(mo)質量(liang)不穩(wen)定(ding)的(de)弊(bi)端。

2.不需(xu)要使用有毒的(de)ben酚(fen)等試劑，也(ye)不需(xu)要乙醇沈澱(dian)等(deng)步(bu)驟。快速(su)，簡(jian)捷(jie)，單個(ge)樣品操作壹(yi)般(ban)可在(zai)1小(xiao)時內完成。

3.數(shu)種(zhong)去(qu)多糖(tang)、多(duo)酚(fen)成(cheng)份(fen)和多次柱漂(piao)洗(xi)確(que)保高純(chun)度，OD260/OD280典型(xing)的比(bi)值(zhi)達

4. 1.7～1.9，長(chang)度可達30kb-50kb，可(ke)直(zhi)接用於(yu)PCR，Southern-blot和(he)各種(zhong)酶(mei)切反(fan)應

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

1.所有(you)的離(li)心(xin)步(bu)驟均在(zai)室(shi)溫完成，使(shi)用轉速(su)可(ke)以(yi)達到(dao)13,000rpm的(de)傳(chuan)統臺式(shi)離(li)心(xin)機(ji)，如(ru)Eppendorf 5415C或(huo)者(zhe)類(lei)似離(li)心(xin)機(ji)。

2.開(kai)始(shi)實(shi)驗前(qian)將(jiang)需(xu)要的水浴先(xian)預(yu)熱(re)到(dao)65℃備(bei)用。

3.需(xu)要自備氯仿(fang)/異戊(wu)醇（體積比(bi)24：1混合）、無水乙醇和β-巰基乙(yi)醇。

4.結(jie)合液(ye)PQ 和(he)抑(yi)制(zhi)物去(qu)除液(ye)IR中含(han)有刺(ci)激性化(hua)合物，操作時要戴乳膠手(shou)套，避免沾(zhan)染(ran)皮膚、眼睛(jing)和衣(yi)服。若沾染皮膚、眼睛(jing)時，要用大量(liang)清(qing)水或(huo)者(zhe)生(sheng)理鹽水(shui)沖(chong)洗。

5.不同來(lai)源的植(zhi)物組(zu)織材料(liao)中(zhong)提(ti)取DNA 的(de)量(liang)會有(you)差(cha)異，壹(yi)般(ban)100mg新鮮(xian)組織(zhi)典型(xing)產(chan)量(liang)可(ke)達3-25μg。

洗(xi)脫液EB不含有(you)螯合(he)劑(ji)EDTA，不影響(xiang)下遊(you)酶(mei)切、連(lian)接(jie)等(deng)反(fan)應。也(ye)可以(yi)使用水洗脫，但(dan)應該(gai)確(que)保pH大於(yu)7.5，pH過(guo)低影響(xiang)洗(xi)脫效率(lv)。用水洗脫DNA應該保存(cun)在(zai)－20℃。DNA如(ru)果(guo)需(xu)要長期保存(cun)，可以(yi)用TE緩(huan)沖(chong)液洗(xi)脫 （10mM Tris-HCl，1mMEDTA，pH8.0），但(dan)是EDTA可(ke)能(neng)影響(xiang)下遊(you)酶(mei)切反(fan)應，使(shi)用時可(ke)以適當稀(xi)釋。    

標(biao)準(zhun)操作步(bu)驟：（實(shi)驗前(qian)請(qing)先(xian)閱讀(du)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)）提(ti)示：

ð第(di)壹(yi)次使用前請先(xian)在(zai)漂洗(xi)液WB和(he)結(jie)合液(ye)PQ中(zhong)加(jia)入指(zhi)ding量(liang)的(de)無水乙醇，充分混勻(yun)，加(jia)入後請(qing)及時在(zai)方框打(da)鉤標記(ji)已(yi)加(jia)入乙(yi)醇，以免多次加(jia)入!

ð取所需(xu)適(shi)量(liang)裂(lie)解(jie)液(ye)PL放(fang)置(zhi)在(zai)65℃預(yu)熱(re)，使(shi)用前加(jia)入β-巰(qiu)基乙(yi)醇到(dao)終(zhong)濃度2%。

1.取適量(liang)植(zhi)物組(zu)織（新(xin)鮮(xian)組織(zhi)100mg或(huo)幹(gan)重組織30mg）在(zai)研缽中加(jia)入液(ye)氮充分碾磨(mo)成(cheng)細(xi)粉。

2.轉(zhuan)移(yi)細(xi)粉到(dao)壹(yi)個(ge)1.5ml離(li)心(xin)管，不要解(jie)凍(dong)，加(jia)600μl65℃預(yu)熱(re)的(de)裂(lie)解(jie)液(ye)PL(確(que)認已(yi)加(jia)入β-巰(qiu)基乙(yi)醇至(zhi)2%)，劇烈(lie)渦旋(xuan)振(zhen)蕩混勻(yun)，用大口徑(jing)槍頭(tou)輕(qing)柔吹(chui)打(da)幫助裂(lie)解(jie)。

（如(ru)果(guo)組織(zhi)裂(lie)解(jie)困(kun)難(nan)，可根據需(xu)要加(jia)壹(yi)個(ge)輕(qing)柔勻(yun)漿(jiang)10秒(miao)的步(bu)驟幫助裂(lie)解(jie)。）

3.65℃水(shui)浴(yu)20-60分鐘，在(zai)水浴(yu)過(guo)程中顛倒(dao)離心(xin)管以(yi)混合樣品數(shu)次。

（可(ke)選(xuan):如(ru)果(guo)組織(zhi)幹(gan)燥(zao)或(huo)者(zhe)產(chan)量(liang)低(di)，可以適當(dang)延(yan)長水(shui)浴(yu)時間。如(ru)果(guo)RNA殘(can)留(liu)多，可(ke)在(zai)水浴(yu)前加(jia)入6μl RNA酶(mei)（20mg/ml）。）

4.加(jia)入700μl氯(lv)仿(fang)/異戊(wu)醇（體積比(bi)24：1混合），顛倒(dao)充分混勻(yun)幾(ji)分鐘（或(huo)者(zhe)渦(wo)旋混勻(yun)），13,000rpm離(li)心(xin)5分鐘。

（若(ruo)提(ti)取的植(zhi)物組(zu)織富(fu)含多(duo)糖(tang)多(duo)酚(fen)，可(ke)以(yi)在(zai)第 4 步(bu)前用等體積酚(fen)/氯(lv)仿（1：1）抽提(ti)壹遍。）

5.小(xiao)心(xin)吸取上清(qing)到(dao)壹(yi)個(ge)新(xin)的(de)1.5ml離(li)心(xin)管，註(zhu)意(yi)不要吸到(dao)界(jie)面(mian)物質(zhi)。

（如(ru)上(shang)清(qing)比較(jiao)渾濁(zhuo)，則(ze)需(xu)要重復(fu)步(bu)驟4壹(yi)遍，直(zhi)到(dao)得(de)到(dao)透(tou)亮(liang)上(shang)清(qing)。）

6.較(jiao)精(jing)確(que)估算(suan)上清(qing)量(liang)，加(jia)入1.5倍(bei)體積結(jie)合液(ye)PQ（請(qing)先(xian)檢查是否(fou)已(yi)加(jia)入無水乙醇!）

後立(li)刻渦(wo)旋，充分混勻(yun)。此(ci)時可(ke)能(neng)出現沈澱(dian)，但(dan)不影響(xiang)實(shi)驗結(jie)果(guo)。

7. 將(jiang)上(shang)壹步(bu)所得(de)混合物（包括(kuo)可能(neng)出現的沈澱(dian)）加(jia)入壹(yi)個(ge)DNA吸(xi)附(fu)柱(zhu)中(zhong)，（吸(xi)附(fu)柱(zhu)放(fang)入收集管(guan)中）13,000rpm離(li)心(xin)30秒(miao)，倒(dao)掉收集管(guan)中的(de)廢(fei)液（先(xian)加(jia)700μl離(li)心(xin)，棄廢(fei)液，再加(jia)入剩(sheng)余的(de)溶液，再次離心(xin)）。

8.加(jia)入500μl抑(yi)制(zhi)物去(qu)除液(ye)IR，12,000rpm離(li)心(xin)30秒(miao)，棄廢(fei)液。

9.加(jia)入700μl漂(piao)洗(xi)液WB（請(qing)先(xian)檢查是否(fou)已(yi)加(jia)入無水乙醇!），12,000rpm離(li)心(xin)30秒(miao)，棄掉(diao)廢液(ye)。

10.加(jia)入500μl漂(piao)洗(xi)液WB，12,000rpm離(li)心(xin)30秒(miao)，棄掉(diao)廢液(ye)。

11.將(jiang)DNA吸(xi)附(fu)柱(zhu)放(fang)回空收集管(guan)中，13,000rpm離(li)心(xin)2分鐘，盡量(liang)除(chu)去(qu)漂洗(xi)液，以(yi)免漂洗液(ye)中(zhong)殘留(liu)乙(yi)醇抑制(zhi)下遊(you)反(fan)應。

12.取出DNA吸(xi)附(fu)柱(zhu)，放(fang)入壹(yi)個(ge)幹(gan)凈(jing)的離心(xin)管中(zhong)，在(zai)吸附(fu)膜(mo)的中(zhong)央(yang)加(jia)100μl洗(xi)脫緩(huan)沖(chong)液EB（洗(xi)脫緩(huan)沖(chong)液事(shi)先(xian)在(zai)65-70℃水浴(yu)中預(yu)熱(re)），室(shi)溫放(fang)置(zhi)3-5分鐘，12,000rpm離(li)心(xin)1分鐘。將得到(dao)的(de)溶(rong)液(ye)重(zhong)新加(jia)入離(li)心(xin)吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)，室(shi)溫放(fang)置(zhi)2分鐘，12,000rpm離(li)心(xin)1分鐘。

（洗(xi)脫體積越大，洗(xi)脫效率(lv)越高，如(ru)果(guo)預(yu)計(ji)和(he)需(xu)要產(chan)量(liang)高，可增(zeng)大(da)洗脫體積，如(ru)果(guo)需(xu)要DNA濃度較高，可以(yi)適(shi)當減少(shao)洗脫體積，但(dan)是最小(xiao)體積不應少(shao)於(yu) 50μl，體積過(guo)小(xiao)降低DNA洗(xi)脫效率(lv)，減(jian)少(shao)DNA產(chan)量(liang)。）

13.DNA可(ke)以(yi)存(cun)放(fang)在(zai)2-8℃，如(ru)果(guo)要長時間存(cun)放(fang)，可以(yi)放(fang)置(zhi)在(zai)－20℃。

附(fu)錄(lu)（低DNA含量(liang)或(huo)者(zhe)產(chan)量(liang)低(di)樣品操作步(bu)驟）：

1.取適量(liang)植(zhi)物組(zu)織（新鮮(xian)組織(zhi)400mg或(huo)幹(gan)重組織200mg）在(zai)研缽中加(jia)入液(ye)氮充分碾磨(mo)成(cheng)細(xi)粉。

2. 轉(zhuan)移(yi)細(xi)粉到(dao)壹(yi)個(ge)15ml離(li)心(xin)管，不要解(jie)凍(dong)，加(jia)入9ml65℃預(yu)熱(re)的(de)裂(lie)解(jie)液(ye)PL(確(que)認已(yi)經(jing)加(jia)入β-巰(qiu)基乙(yi)醇至(zhi) 2%)，劇烈(lie)渦旋(xuan)振(zhen)蕩混勻(yun)，用大口徑(jing)槍頭(tou)吹(chui)打幫助裂(lie)解(jie)。

（如(ru)果(guo)組織(zhi)裂(lie)解(jie)困(kun)難(nan)，可根據需(xu)要加(jia)壹(yi)個(ge)輕(qing)柔勻(yun)漿(jiang) 10 秒(miao)的步(bu)驟幫助裂(lie)解(jie)。）

3.室(shi)溫放(fang)置(zhi)60分鐘，中間不時顛倒(dao)離心(xin)管以(yi)混合樣品數(shu)次。

（如(ru)果(guo)組織(zhi)幹(gan)燥(zao)或(huo)者(zhe)產(chan)量(liang)低(di)，可以放(fang)置(zhi)在(zai)65℃水(shui)浴(yu)。）

4.加(jia)4.5ml氯(lv)仿(fang)/異戊(wu)醇（體積比(bi)24：1混合），渦(wo)旋(xuan)充分混勻(yun)，3,000g離(li)心(xin)10分鐘。

5.小(xiao)心(xin)吸取上清(qing)到(dao)壹(yi)個(ge)新(xin)的(de)15ml離(li)心(xin)管，註(zhu)意(yi)不要吸到(dao)界(jie)面(mian)物質(zhi)。重復(fu)壹(yi)遍步(bu)驟4。

6.小(xiao)心(xin)吸取上清(qing)到(dao)壹(yi)個(ge)新(xin)的(de)15ml離(li)心(xin)管，估算(suan)上清(qing)量(liang)，加(jia)入0.7倍(bei)體積的(de)異丙(bing)醇，渦(wo)旋(xuan)混勻(yun)來(lai)沈澱(dian)DNA。

7.立(li)刻3,000g離(li)心(xin)20分鐘沈澱(dian)DNA，棄(qi)上(shang)清(qing)，顛倒(dao)離心(xin)管口放(fang)在(zai)紙巾(jin)上控(kong)幹(gan)殘留液(ye)體，並小(xiao)心(xin)用用移液槍吸(xi)幹(gan)沈澱(dian)周(zhou)圍(wei)殘留(liu)液體（不要過(guo)於(yu)幹(gan)燥(zao)DNA沈澱(dian)）。

8.加(jia)入300μl－400μl預(yu)熱(re)到(dao)65℃的(de)滅(mie)菌水，重(zhong)新溶(rong)解(jie)DNA，可(ke)能(neng)需(xu)要在(zai)65℃短暫(zan)溫(wen)育(yu)幫助溶(rong)解(jie)，期(qi)間不斷輕(qing)彈(dan)管(guan)底(di)幫助溶(rong)解(jie)。

9.加(jia)入1.5倍(bei)體積結(jie)合液(ye)PQ（450μl－600μl，請先(xian)檢查是否(fou)已(yi)加(jia)入無水乙醇!）後立(li)刻渦(wo)旋，充分混勻(yun)。此(ci)時可(ke)能(neng)出現沈澱(dian)，但(dan)不影響(xiang)實(shi)驗結(jie)果(guo)。

10.後續(xu)步(bu)驟和上(shang)面(mian)標(biao)準(zhun)操作步(bu)驟7開(kai)始(shi)後完quan壹樣。

CTAB植(zhi)物基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速(su)提(ti)取試劑盒-現貨(huo)