諾博(bo)萊(lai)德 快捷(jie)型植(zhi)物(wu)基(ji)因(yin)組(zu)DNA提(ti)qu試劑(ji)盒 核酸提(ti)取(qu)

快捷(jie)型植(zhi)物(wu)基(ji)因(yin)組(zu)DNA提(ti)qu試劑(ji)盒(溶液型)

目(mu)錄(lu)號(hao)：40314

v試劑(ji)盒組(zu)成(cheng)、儲存、穩定(ding)性：

本試(shi)劑(ji)盒在室(shi)溫(wen)儲存12個月(yue)不(bu)影(ying)響使(shi)用(yong)效(xiao)果。儲存事項(xiang):

1. 緩(huan)沖(chong)液(ye)AP1、AP2低溫(wen)時(shi)可(ke)能(neng)出現(xian)析出(chu)和沈(chen)澱，可(ke)以(yi)在37℃-65℃水(shui)浴幾分(fen)鐘幫助重新溶(rong)解(jie)，不(bu)要(yao)劇(ju)烈搖晃，以(yi)免(mian)形(xing)成過(guo)量的泡(pao)沫。恢復(fu)澄清透明(ming)後冷卻(que)到(dao)室(shi)溫(wen)即(ji)可(ke)使(shi)用(yong)。

2.避免(mian)試(shi)劑(ji)長時(shi)間暴(bao)露於空(kong)氣中(zhong)產生揮(hui)發、氧(yang)化、pH 值變化，各(ge)溶液(ye)使用(yong)後應及時(shi)蓋緊蓋子。

具(ju)體(ti)產品(pin)的參(can)數(shu)以(yi)收(shou)到(dao)產品(pin)說明(ming)書(shu)的(de)參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)

v產品(pin)介紹：

本試(shi)劑(ji)盒采用(yong)獨(du)te的緩(huan)沖(chong)液(ye)系(xi)統(tong)，特別(bie)適合從植物幹(gan)粉或者新鮮植物(wu)材料(liao)中(zhong)提(ti)取基(ji)因(yin)組(zu)DNA。無需酚(fen)/氯(lv)仿(fang)抽提，使(shi)用(yong)安(an)全方(fang)便(bian)，可(ke)最(zui)大限(xian)度去(qu)除雜(za)質(zhi)蛋(dan)白(bai)及細胞(bao)中(zhong)其(qi)他有(you)機化合物(wu)。對樣(yang)品(pin)的起(qi)始重量沒(mei)有限(xian)制(zhi)，實驗(yan)者可(ke)根(gen)據(ju)自(zi)己的需求靈(ling)活調(tiao)整。提取的基(ji)因(yin)組(zu)DNA片(pian)段大，純度高(gao)，質(zhi)量穩定(ding)可(ke)靠(kao)。使用(yong)本試(shi)劑(ji)盒回收(shou)的(de)DNA可(ke)適用(yong)於各(ge)種(zhong)常(chang)規操作(zuo)，包括(kuo)酶切、PCR、文(wen)庫(ku)構(gou)建、Southern雜(za)交等實驗(yan)。

v產品(pin)特點：

1.不需要(yao)使用(yong)有(you)毒的(de)ben酚(fen)、氯(lv)仿(fang)等試劑(ji)。

2.快速，簡(jian)捷(jie)，操作(zuo)整個過(guo)程可(ke)在1個小(xiao)時(shi)內(nei)完(wan)成(cheng)。

3.結果(guo)穩定(ding)，產量高（比(bi)離心柱型(xing)的產量高壹(yi)倍(bei)以(yi)上），OD260/OD280典型(xing)的(de)比值(zhi)達(da) 1.7～1.9，長度可(ke)達(da) 50Kb-150kb，可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於PCR，Southern-blot和(he)各(ge)種(zhong)酶切反(fan)應以(yi)及文庫(ku)構(gou)建。

v註意事(shi)項：

1.所(suo)有的(de)離心步驟(zhou)均(jun)在室(shi)溫(wen)完(wan)成(cheng)，使用(yong)轉(zhuan)速(su)可(ke)以(yi)達(da)到(dao)13,000rpm的(de)傳(chuan)統(tong)臺式(shi)離心機(ji)，如Eppendorf 5415C或者類似(si)離心機(ji)。

2.用(yong)戶(hu)需自(zi)備(bei)異(yi)丙醇(chun)、70％乙醇、液(ye)氮研(yan)缽(bo)、水浴箱(xiang)。

3.開始實(shi)驗前(qian)將需要(yao)的水(shui)浴先預(yu)熱好(hao)備(bei)用(yong)。

4.本試(shi)劑(ji)盒為(wei)溶液(ye)型，可(ke)以(yi)很容易(yi)的按照比例擴(kuo)大或者縮小(xiao)每(mei)次處(chu)理的量，請聯(lian)系我們(men)索取其它(ta)處(chu)理(li)量的操(cao)作(zuo)手(shou)冊(ce)。

v操作(zuo)步驟(zhou)：（實驗(yan)前(qian)請(qing)先閱(yue)讀註意事(shi)項）

1.取適量植物(wu)組(zu)織（新鮮組(zu)織100mg或幹(gan)重組(zu)織20mg）在研(yan)缽(bo)中(zhong)加入液氮(dan)充(chong)分(fen)碾磨成(cheng)細(xi)粉(fen)。

2.轉(zhuan)移(yi)細(xi)粉(fen)到(dao)壹(yi)個1.5ml離心管，不要(yao)解(jie)凍(dong)，加入400μl緩(huan)沖(chong)液(ye)AP1和4μlRNase A(10 mg/ml)，旋(xuan)渦(wo)振(zhen)蕩，充(chong)分(fen)混(hun)勻幫(bang)助(zhu)裂解(jie)。

如果組(zu)織裂解(jie)困(kun)難，可(ke)根(gen)據(ju)需要(yao)加壹個輕(qing)柔(rou)勻漿(jiang)10秒(miao)的步驟(zhou)幫助(zhu)裂(lie)解(jie)。大多(duo)數(shu)情況下不(bu)需要(yao)離心去(qu)除未完(wan)quan裂(lie)解(jie)的(de)組(zu)織，因(yin)為(wei)後面(mian)有(you)壹個離心去(qu)除的步驟(zhou)。

3.65℃水浴10分鐘，在水(shui)浴過(guo)程中(zhong)顛(dian)倒離心管2-3次，混(hun)合(he)樣(yang)品(pin)。

4.加入130μl緩(huan)沖(chong)液(ye)AP2，充(chong)分(fen)混(hun)勻，冰(bing)上(shang)放置(zhi)5分鐘，14,000rpm離心5分鐘，小心吸(xi)取(qu)上清到(dao)壹(yi)個新(xin)的(de)1.5ml離心管，註意不(bu)要(yao)吸(xi)到(dao)界面(mian)物(wu)質(zhi)。

5.可(ke)選步驟(zhou)：將上(shang)清液(ye)再次14,000rpm(~13,400×g)離心5分鐘，小心(xin)緩(huan)慢吸(xi)取(qu)上清到(dao)壹(yi)個新(xin)的(de)1.5ml離心管中(zhong)，不(bu)要(yao)吸(xi)到(dao)沈(chen)澱。

此(ci)步驟(zhou)目(mu)的(de)為(wei)去(qu)除上清液(ye)中(zhong)的(de)沈(chen)澱雜(za)質(zhi)，使(shi)提(ti)取基(ji)因(yin)組(zu)DNA純度更高(gao)。

6.加入0.7體(ti)積的室(shi)溫(wen)異(yi)丙醇(chun)（例如(ru)500μl的(de)上(shang)清液(ye)加350μl異丙醇(chun)），顛(dian)倒30次混(hun)勻或者直(zhi)到(dao)出(chu)現棉(mian)絮狀(zhuang)（絲狀(zhuang)）白(bai)色(se)DNA沈(chen)澱。

7.12,000rpm離心2分鐘，在管底可(ke)以(yi)見到(dao)白(bai)色(se)的(de)DNA沈(chen)澱塊(kuai)，倒棄(qi)上清。

8.加入1ml70％乙醇，顛(dian)倒幾次漂(piao)洗(xi)DNA沈(chen)澱，12,000rpm離心1分(fen)鐘，倒(dao)去(qu)上(shang)清（註意不(bu)要(yao)把DNA沈(chen)澱倒(dao)掉(diao)了），倒置(zhi)後在吸(xi)水(shui)紙上輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下以(yi)控(kong)幹(gan)殘留(liu)乙醇，還可(ke)以(yi)用(yong)槍頭(tou)小心(xin)吸(xi)掉(diao)管底沈(chen)澱周圍(wei)和管壁的殘(can)留(liu)乙醇，空(kong)氣晾幹(gan)沈(chen)澱幾(ji)分(fen)鐘。註意不(bu)要(yao)幹(gan)燥過(guo)頭(tou)，否則DNA極其(qi)難溶(rong)；也(ye)不(bu)能(neng)殘留(liu)太多(duo)乙醇，否(fou)則乙醇可(ke)能(neng)抑制(zhi)下遊(you)如酶切反(fan)應。

9.加入適量DNA溶解(jie)液(ye)重(zhong)新(xin)水化溶解(jie)DNA沈(chen)澱，輕(qing)彈(dan)管壁混(hun)勻，可(ke)以(yi)放置(zhi)在65℃溫(wen)育30-60分鐘（不要(yao)超過(guo)壹小(xiao)時(shi)），期間(jian)不時(shi)的輕(qing)彈(dan)管壁幫助(zhu)重(zhong)新(xin)水化DNA。也可(ke)以(yi)在室(shi)溫(wen)或者4℃放置(zhi)過(guo)夜(ye)來重(zhong)新水化DNA。

10.DNA可(ke)以(yi)存放在2-8℃，如果要(yao)長時(shi)間存放，可(ke)以(yi)放置(zhi)在－20℃。

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